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我有喝到哪一類型的乳酸菌?

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(1)

我有喝到哪一類型的乳酸菌?

應用 peR 技術檢驗酸酵飲料中乳酸菌的種類

欒琳*李淑華**

自然科學教育學系

**屏東縣里港國中

*國立屏東師範學院

句J勿 j寅化 U0rHH足J!tn \J ~I~J 關(芳:、多關于物的 一、目lJ i言 乳階菌在人體腸道內屬於「有益問 J' 自E 塔伊l 科1 鹼某 r(歹IJ 的主} j<... 等方面。 2003 年 干句:斗1 、港、台爆發的嚴重急性呼吸道症候群 合成維守主 B 群和維 1+ 長一 K ,並能幫助食物

Syndrome

Respiratory

Acute

( Severe

代謝、增強免疫力及促進營養。如果讓腸內

SARS)

,也是利用此相關技術建立SARS 病 有益菌維持較大的優勢,就叫以維持人體的 再基因|高敏感度之檢測方法。而我們在課程 健康(斥志威等,民86 ;芋褔臨,民 89 :雙r;

II'

HiJ選用.*.泊中較易取得的菌種來源 乳酸 1日 合實,民 89 )。因此,乳酸菌長久以來 的[問品,作為 PCR 實驗課程檢驗的材料。 被應用在食品方面,近年來國內更是興起-雖然現在已知的乳酸菌已達兩白多種, 股乳酸商製品的風潮,商品的種類繁多令人 但依據闢際仁的定義: I商品化的優酪乳中 H 不暇給,不同菌種的乳酸雨製品標榜著對

定要使用 Lactobacillus bulgaricus 和

Strep-人體有不|司的益喔,消費者在購買時也能有

tococcus thermoph iI

us 這兩種菌種內|用自菌 更多的選擇。們是,這些產品內是否卓有其 種的故事 http://gly.ek2 1. com/GLY/DOR-l/ 標榜特別添加的活茵茵種呢?為了解J!j 由一 L PAGE/05.HTM) 。此外,可由各廠商自行再 乳酸再i 製品的菌種成分是古:立如其標示,在 添加對人體有益的菌種。如市售商品中標榜 半個簡單的生技實驗 站 FA 們;而課堂上用 含有 A 南即為 Lactobacillus acidophil肘, B PCR 技術檢驗市售的乳酸南商品中所標榜的 C 菌 的即為 Bifidobacteria (或稱 Bifidus)

,

有益菌種的種類! 即為

LGG

以及

casel

Lactobaci

II

us

聚合臨連鎖反應 (Polymerase

Chain

Lactobacillus

rhamnos山 GG 等。 這些菌種都 干重可在思時間內!l守特定

Reaction' PCR

)是 屬於對人體有益的益牛。出j (Probiotics) 。依 基因片段加以培養使得某因數量大量增加的

f禹

國家 CNS 規定,優酪乳中每毫升應合 技術,此種技術被廣泛的應用在訐多領域 個 UJ~的活性發酵菌(鄭金寶,民 89 )。在 土,如親子關係鑑定、鑑定犯罪現場遺留|、 合令,乳酸的的飲料中,優格和優酪乳成份中 含有}r:脂肪乳間形物 8%以 I二,為濃祠發酵 來口J能含有微量 DNA 的血跡、毛髮、皮膚 等、偵測被病毒感染的細胞(如H1V) 、檢驗

(2)

乳,而乳酸菌飲料成份中含有非脂肪乳間形 物 2%以上,乳脂肪 0.5%以 F 0 因為含非脂 肪乳固形物和乳脂肪都最少的乳酸菌飲料, 可以在離心收集菌種時減少非脂肪乳固形物

的混雜量,離心後清洗菌種的處理上也會較

容易,因此本實驗在收集菌種時以乳酸菌飲 料為採樣的樣本。自乳酸菌飲料中收集清洗 後之菌液樣本,可直接打破溶解以進行 PCR ,處理于續上非常簡便。五十毫升飲料

收集之菌液(半瓶養樂多) ,即足夠數十次反

應使用,取材十分容易。 本實驗參考市售的乳酸菌飲料商品中所 標示的菌種,選出四種常用的菌種做為檢驗 日標。-種為國際定義必合的 Streptococcus

thermophilus

(T 商) ,不日在多家品牌中常發 現的三種菌種 Lactobacillus

acidophilus ( A

菌)、 Bitidus (B 商)和 Lactobacillus

casei

(C 間)。根據資料顯示(

Schleifer et a!.

,

1995;

Tilsala-Timisjarvi et

a!.可 1997;

Song et a!.

,

2000)

,發現乳酸菌菌種在l 的 rDNAL台有 大部分相同序列的基閃片段和少部份相異序 列基因片段。我們挑選同種檢驗商禪:均有的 共同片段,設計成實驗引于對5'和 3'兩端的 位置,做為檢驗四種乳酸菌的共同依據。再 依據各菌種相異的片段,選出各菌種各自獨 立的 5' 端引子的1\1.置,配合原先 3' 端的引 子,做為四種菌種個別檢驗的依據(附錄 本實驗依照特定DNA的位置做增量放 大作用,即進行PCR (聚合臨連鎖反應)。此 段微量特定的DNA序列經由PCR實驗放大預 估約 2叫古後,收集PCR崖物做電泳分析。根

- 41

據四種菌種共同的 DNA 片段和個別的 DNA 片段的 PCR產物的大小,判斷出各片段在電 泳膠片 t 的相對位置,就可做為我們檢驗市 售乳酸菌飲料中是否含有所選定的四種乳酸 茵茵種的依據。

二、實驗原理:

DNA 是由兩股互相反向平行的多核昔 酸鏈所形成的雙股螺旋狀的構造。每股多核 背酸鏈以糖一磷酸為兩股的骨架,兩股內部 則以四種合氮鹼基做互補性鹼基配對

( complementary

base

pamng)

,

NP

A

(

adenine' 腺H票日令)配對 T (thymine' 胸腺 喵H定) ,而 G (guanine' 鳥糞嘿 H令)配對 C

(

cytosine' 胞瞎 H定) ,且每股多核甘酸鏈的 鹼革有 4 定的排列次序,稱為鹼基斤,列(

base

sequence) 。因此只要我們知道雙股的 DNA 多核苦酸鏈其中 股的鹼基序列,就可利用 互補性鹼基配對的方法,知道另一股核甘酸 鏈的鹼基序列。而細胞內的DNA 在進行複 製時,就是利用這樣的原理: 首先,會先利用螺旋臨(helicase) 將雙 股多核甘酸鏈分開,再以原先的雙股多核苦 酸鏈為模板,利用 primase 結合到單股鑄模 仁的第一個起始序列,形成川、段RNA

primer

(RNA 引子) ,再依互補性鹼基配對

的原則,用 DNA 聚合臨(

DNA polymerase)

將→個個的核昔酸放置在模板上,做含氮鹼 基互補配對延長的工作,如此個DNA 分

子就複製成兩個完全相同的DNA 分子。因 為在新的雙股 DNA 分子中,其中一股是新

(3)

科學教育月刊 第 264 期 中華民國九十二年十一月 稱為半保留性(

semiconservative

)。 必須注意的是,在我們要進行的 PCR 實 驗中,我們不是用原本細胞中的 RNA 引于 進行工作,而是要事先設定想要複製放大的 特定序列 DNA 片段,依照此片段前後 5' 端 和 3'端的 DNA 序列,設計出對大約 20 個 已知鹼幕序列的 DNA 引于來替代原先細胞 中 RNA 引于的 L 作,做為提製特定基因 DNA 片段 L作的起始處 (Kim' 2000) 。 PCRR/'.! 原理是非常簡單的,在本次實驗 巾,一開始先利用 PCR 熱循環機的高溫將雙 股 DNA 分開形成單股的多核有酸鏈;常溫度 降低時,預先設計的」對司 If 對就會依照互 補性鹼基配對的原則, 5'端不[] 3' 端的引子就 可以和單股 DNA [-_的特定段做最初起始點 的互補結合,然後兩 I 熱聚合悔即可將原料中 混向的核 q: 酸 (dNTP) 和此特定段單股 DNA 模板上的合氮鹼基繼續做互補配對延長的動 作,進而複製出兩個完全千美的特定雙股 DNA 片段,如此就完成第-次複製新的雙股 DNA 分子的土作。之後再利用高溫將第-次 複製出來的雙股 DNA 分子再分開,就變成兩 個單股的棋板,重複閉口對、延長的動作,完 成兩個複製新的雙股 DNA 分子。每重複一次 就口J 增加兩倍雙股 DNA 片段的量,重複相同

的步驟 30 次,就口J得到放大增量 2

10倍的特 定雙股 DNA 片段的量。實驗流和圓如下: 形成兩個單股 DNA 鑄模 設計引子

(primer)

耐熱 DNA 聚合時

(Taq DNA polymerase)

原料 (dNTP)

dATP

,

dTTP

,

dCTP

,

dGTP

Y

一個 DNA 分子複製成兩個完全相同 的 DNA 分子

重複此複製步

2

重複複製 30 二欠佳得到原先DNA 量的 2叫苦 電泳分析

(4)

三、實驗器材:

卜市售乳酸菌飲料: (I) 優沛蕾益菌多(簡稱益菌多)

:

500

g/瓶。每瓶合-白億個以 t活性 乳酸 i罰。產品標;1\合有 A 菌

( Acidophilus

)、 B 菌(

Bifidus

)、 C 茵 (Casei) 。 (2) 活益比菲多(簡稱比菲多)

:

1000

g/ 瓶。產品標示為 HO-EAT

TM

Bifido' 原料fT有活性乳酸菌(未標明 含有的問種羊毛稱)。

(3) 統一好菌多多(簡稱好菌多多)

:

500

g/瓶。產品標示每 CC 含 1200 禹 個以上活性乳酸菌(未標明含有的商 種名稱)。 (4) 養樂多活菌發酵乳(簡稱養樂多)

:

100

g/瓶。產品標示每瓶fT有→百億個 以上的養樂多代 m 筒。 (5) 亦可嘗試其他種類,如亞當、健健 美等。

2 、乳酸菌清洗、溶解液(

Lysozyme

buffer) :

(I)Tris-HCI

(pH 7.2) : 50 mM

(2)EDTA : I mM

(3)NaCI : 50 mM

0 (4)若要溶解乳酸菌的菌壁,則 200μl 清 洗液中要加入 4

mg

lysozyme 形成乳 酸菌溶解液。

-43

3 、 Genomic

DNA Purification Ki t

( Cat:BTC04-50

)

:

BERTEC

ENTERPR ISE

C缸,

LTD.

(伯昂公司)

生產。

4 、離心機:

HITACHI

HIMAG

CENTRIFUGE

SCR20BB

'

1吏用

RPR20-2 7

~虎的品在心管。

5 、恆溫槽。

6 、 PCR 熱循環。

7 、電泳設備。

8 、五種乳酸菌 DNA primer: 訂購自

Genemed Synthesis

,

Inc. 。

9 、 1kb

DNA ladder

: GIBCOBRL®

Cat. No. 15615-016' Lot No. MAB732

1. 0μg/μ1

0

10 、 Agarose

: GI

BCOBRL 公司出產 o

11 、染色劑:澳、化睡液 (Ethidium

Bromide)

12 、紫外光照相在統 o

四、實驗步驟:

卜找出乳酸菌的基因序列

由文獻資料和市售乳酸商商品決定出四 種乳酸菌的菌種,利用 NCBll-tJ 的Nucleotide 資菲菲!卓 (

http

.

//www.ncbi.nlm.nih.gov/

Nucleotide)

,搜尋出Acidophilus 、 Bifido 、

Lactobacillus

casei 不U

Streptococcus

thermophilus 四種乳酸菌位於 16S rDNA的

怯酸序列。但是市售乳酸菌飲料中並無明確 的商種品系名稱,而在NCB!網路內的參考資 料為菌種品系的序列資料,因此選定序列段 最長的菌種資料,立jz 且事先假定與我們所需

(5)

科學教育月刊 第 264 期 中華民國九十二年十一月 要檢測的菌種基因序列差異不大。 利用網路 GCG pileup 程式,將上述四種 乳酸菌中相似的基因序列進行比對,並由圖 中自行找出五種可供實驗的 primer 序列(如 附錄一)。但是商品中並末標示正確的菌種品 系,因此我們先假定由 NCBI 中找到的菌種 是我們所需的相似菌種品系。並請同學能由 討論方式探討以下問題:

( I

)這五種實驗的 pnmer 序列是否會 受到其他非此四種乳酸菌的影響? (2) 各組 pnmers 所夾出的基因序列為何?經過討論 後再利用基因定序來做結果的確認。 2 、引子的設計 引于是特別設計的 A 段核百酸序列,用 來擴增放大特定的 DNA 序列,乃 PCR 反應 成功與否之關鍵 (Kim , 2000) 。因此,設計 引子時須注意 F 列事項: (I)引子需具有專-性,長度約 18~25 個核官 酸較適合 O (2) 哥|于 3'端的核苦酸最好設計成 G'C'GC' 或 CG tj,增加鏈合的親和性。 (3)避免重複相同的核昔酸,尤其是 G 不可連 續 3 個; G+C 的含量最好能佔 50%以仁。 (4) 司|子的 T

m

(熔點溫度)需大於 45°C; 且引 于提合( annealing) 的溫度需適當,否則 溫度太高則無產物出現,溫度太低則非專 」性的產物會很多而影響實驗。 (5)引子的結構需避免出現 dimer 或髮夾狀的 三級結構造成無法配對接合的情形發生

( Scheppler

,

2000

)。 依照仁述原則,可讓同學在實驗中親自 嘗試或模擬不同引子會出現之假想結果。

3 、收集乳酸菌飲料中的菌種

同學可事先調查市售商品中,哪-類的 商品較易收集到實驗所需的乳酸菌,並事先 模擬收集的方式,評估處理的過程中所需要 使用的器材,和收集的原則,最後決定出一 種最容易操作且可以收集到較純的乳酸菌的 商品。大約五十毫升之飲料,即含有足夠的 菌數可供實驗。收集菌液之方法,主要依據 離心原理,將菌體沉澱,再用適當緩衝溶液, 將雜質清洗數次即可。

4 、乳酸菌 DNA 的純化

收集足夠量的乳酸菌後,就要準備將細 胞內的 DNA 萃取純化出來。乳酸菌屬於革 蘭氏陽性的細菌,外層有細胞壁包圍,因此 需要先破壞掉細胞壁,才能讓裡面的 DNA 溶解到外面來 O 細菌的細胞壁成份為做聚 糖,與耐受植物的纖維素細胞壁組成不同, 因此該選擇何種類型的分解醋,學生可多做 思考。 因為是使用套裝材料 (Genomic

DNA

Purification

K此,伯昂公司製造)來做萃取, 廠商都已準備好所需的試劑,因此同學須了 解萃取純化的基本原則,小心謹慎的操作即 可純化出乳酸菌的 DNA0

5 、進行 peR

實驗步驟: (I)將每種乳酸菌飲料中萃取出來的 DNA 抽 取液分成五管,分別加入各待測菌種的

pnmers

0 (2)在 PCR 的反應中,每管使用 5μl 的 lOx PCR 專用緩衝液, 4μI

2.5

mM 的 dNTP 混合液(每種濃度為 2.5

mM)

,

Iμl 抽取

(6)

的乳酸菌 DNA 模板, 5' 端及 3' 端的 pnmer

(50

pmol! μI) 各 l 叭,並加入1.5單位的 耐熱聚合酵素 (TaKaRa

Taq)

,最後用水 將整個反應體積補到50μI ,放到 PCR 熱 循環機中進行反應。

(3

)反應的時間與溫度分別是:最初雙股 DNA 模板分離(

initial denaturing)

94°e ' 4

min

、 模板與引子鏈合(

annealing) 52

°e '

I

min 、 聚合臨延長反應 (extension)

noe '

I

min 、

每次重新循環時 DNA 模板分離

( denaturing) 94°'(

,

I min

0

(4) 用上述條件重複 30 次,最終延長(

final

extension)

noe '

5 min

。這樣就可以得到

放大 DNA 濃度的產物。 (5) 將此產物置於 4°e 下 ~T 存供日後檢驗所 需。本實驗進行約需 2~2.5 小時。 注意事項: (I)步驟中所需的溶液濃度均是從母液

(

stock) 取出合併在-起使用,因此如何 配置實驗所需的正確濃度,往往是決定實 驗成功與否的第-步。 (2) 同學在操作過程中須要很小心。 DNA 分子 容易被環境中存在的酵素給分解,所以學 生需養成實驗前先將實驗桌面擦拭乾 淨,實驗進行中小心各器材之間不被互相 污染等良好實驗習慣。交因為實驗中使用 的試劑都很微量和昂貴, 乎不小心都有口J 能造成結果誤判和時間與材料的浪費,學 生由此可學習正確與切實的設備操作之 重要性。 6 、電泳 將 PCR 產物用 2%

agarose

gel 做水平電 泳分離,直到含藍色染料(

bromophenol blue)

的樣本約移至電泳膠片四分之三處停止。將 電泳膠片取下用澳化臨液(

ethidium

bromide) 染色 5 分鐘,並視背景強度以蒸餾 水進行退染,然後用紫外光照相系統照相。

7 、五種選定的實驗prImer 序列比對

由四種選定菌種的 DNA 序列中,確定 共同的實驗引子對 (LAB 5' 端和 LAB 3' 端) 的 DNA 序列,和個別菌種自己特定 5' 端的 引子序列;再利用 GCG pileup 程式比對出 Acidophilus 、 Bifido 、 Lactobacillus

casei

干日

Streptococcus

thermophilus 四種乳酸菌位於

16S

rONA 上相似核酸序列的排列位置,依序 列數目大小推知電泳膠片上出現的 DNA 條 帶位置,是屬於哪一個實驗菌種引子對所夾 出 PCR 產物。 五、結論: 本實驗設計的主要目的,是讓學生在課 堂中了解 PCR 原理後,能更進一步地由實際 操作的過程中,了解 PCR 技術以及應用於生 活中的實例;並由實驗過程中學會使用電泳 檢驗與進行 primer 序列比對的技術。此外, 也希望學生在實際操作過程中,學習在實驗 室中應有的良好習慣,建立同學在進行 PCR 實驗時所要注意的概念,並能聯想 PCR 技術 在其他方面利用的價值,以達到學以致用、 觸類旁通的學習效果。 本實驗經由屏東師院自然科學教育學系 大之學生分組實際操作後發現,實驗步驟操 作容易,依照實驗程序操作都叮以在電泳膠 片 t 得到清楚的 PCR 產物,實驗成功率很 一 45 一

(7)

科學教育月刊 第 264 期 中華民國九十二年十一月 高。附圖為兩片學生分組實驗電泳膠片的結 果。圖三為選用實驗建議材料活益比菲多乳 酸菌飲料的電泳檢驗結果,圖一則為學If了,白 行找尋的材料亞當乳酸菌飲料的電泳檢驗結 果。 由電泳檢驗的結果發現,實驗的乳酸茵 飲料 ql 均有發現我們設計的檢驗菌種的共同 片段,即標示 LAB 5' 端和 LAB 3' 端的 primer

所得的 PCR 產物,而挑選出來的四種常用的 檢驗菌種 T 茵、 A 菌、 B 菌和 C 菌,則為廠 商白行添加的菌種,不一定會在所有的乳酸 菌飲料中都會出現。實驗後由學生畫出實驗 相關概念圖中也發現,學生大都能清楚的表 現出與 PCR 相關的概念描述(附錄三) ,並 能正確連結相關的觀念。 由實驗設計的過程中,學生須先行搜尋 相關的資料配合實驗設計所需,並統整相關 的知識概念,比只白書本中得到的片段知識 訊息、,更為完整且全面,更能實現「由做中 學」的精神。

致謝

本研究所需經費部分由國科會計畫 (紗帽 2511-S-153-007)補助,特此致謝。

參考資料

l 丘志威等(民 86) :雙丈桿菌在人體內的活 性與功能。輔仁民生學誌, 3 卷, I 期, 131-142 頁 C 2. 李褔臨(民 89) :乳酸菌分類之研究近況。 科學與方法, 32 卷, 8 期, 36-42 頁。 3. 鄭金寶(民 89) :認識優酪乳。空大學訊,

89 . 3 . 16 :

121-122 頁。

4.Schleifer

,

K.-H.

,

Ehrmann

,

M.

,

Beimfohr

, c.,

Brockmann

,

E.

,

Ludwig

W叫&

Amann

,

R.

,

( 1995) . Application of molecular methods

for the classification and identification of

lactic acid bacteria. Int

I.

Dairy Journal 5:

1081-1094.

5. Tilsala-

Timisjarvi司 A.

&

Alatossava

,

T.

( 1997) . Development of oligonucleotide

primers from the 16S-23S rRNA intergenic

sequences for identifying different dairy and

probiotic lactic acid bacteria by PCR. Int

I.

J.Food

Microbiol.衍, 49-56.

6.Song

, Y.-L.

Kato

,

N 叫 L凹,

c.

-X.

,

Matsumiya

,

Y.,

Kato

,

H. 、&

Watanabe

,

K. (2000). Rapid

identification of II human

intestinallacto-bacillus species by multiplex PCR assays

using group- and species-specific primers

derived from the 16S-23S rRNA intergenic

spacer region and its flanking 23S rRNA.

FEMS Microbiol Let

t.

187

,

167-173.

7.Kim

, T.

D.

(2000). PCR primer design: an

inquiey-based introduction to bioinformatics

on the World Wide Web. Biochemistry and

恥lolecular

Biology Education. 28

,

274-276.

8.Scheppl釘,

J. A.

,

Cassin

,

P. E.

,

Gambier

,

R.

恥1.

Biotechnology explorations

applying

the fundamentals

,

Washington DC

,

ASM

Press

,

pp 241-243

,

2000.

(8)

扎1

L

T A B

C

圖一

個已剩餘引子::>

M

L

T A B

C

國二 國一:亞當乳酸菌飲料所含菌種之 DNA ,經 PCR 處理後,電泳膠片分析結果。自左而右依序為: M 一一 lkb

ladder marker;

L 一 LAB 5' 端和 LAB 3' 端的 primer 所得的 PCR 產物品 T

Strep tococcus thermophilus spec if i c pr i

mer 所得之 PCR 產物; A 一 -

Lactobacillus

acidophi Ius speci f ic

primer 所得之 PCR 產物;

B --

Bifidobacteria specific primer

所得之 PCR 產物;

C --

Lactobacillus casei specific

primer 所得之 PCR 產物(無

產物,可推測亞當中無比菌種存在)。箭頭所指處為1 kb 及 o. 5kb 之位置。

國二:活益比菲多乳酸菌飲料所含菌種之DNA ,經 PCR 處理後,電泳膠片分析結果。圈中標示

如圖一,但可發現活益比菲多PCR 結果得不到 Streptococcus thermophilus產物,可 推測活益比菲多中 Streptococcus thermophilus可能不存在。而 Lactobacilluscasei

之 PCR 產物亦微,可能為 pnmer 非專一性之黏令所致。

(9)

科學教育月刊 第 264 期 中攀民國九十二年十一月

個別差異 5' 端

acicb tccacaatgg a

CXJClCla

gtet

gab哪9也甸甸句tga gtg扭扭agg tttteggatc 嗔品agetet gttgtt明甸的伊咖taga明鼠也a

bifid

tgca咽tgg 9'句臼呵臼t gatgcagcga 句呵呵tga gggatgg明白哎呀到tt 芋甜臼tet tttgttb姐且盟..

casei

b咄咄tgg a句泊agtet gab呵呵呵且句C句句tga gt伊φagg ttttc羽ateφaaaaetet gttgtb明ag aa扭扭扭u阻且也豆

them

t咱也atgg 明明 C臼t ga呵呵呵且句C句句句a etg,羽gaagg tttt句gate 恨aaagetet gttgt坐坐立主盟笠阻:L9:包姐也 tgg

LAB

5' 端 100

acicb

aetgqc旦旦主旦旦丟到 t

aatcaaccag aaagtcaegg

ctaacta句t qωocaocc qα耽aatac at明tgg,∞ a9'吟吟cc 匆atttattg

bifid..

..q臼ttc cn:ltαaotot a,αttt句趟出呵句α羽 ctaacta句t qα到caocc qα羽taatac 位ac閉句ca a9'句ttatc氾明atttattg easel 豆蛀虫臨19

tagtgacggt

at咽accag 泊苟明明 ctaacta句t

occaocaocc

q叫出atac 耐咿呀臼呵呵 ttgtcc

ggatttattg

them 品agttcaca 個gtgacggt agettaccag 泊湖但egg ctaacta句t

accaacaocc

qω位aatac 位aggtcc 甸甸句ttgtcc

ggatttattg

200

LAB

3' 端

acicb

gtcaget 句tgt句tgagat otta∞t凶a otcc呵呵ac

0

,

agtgcaacc

ettgt臼t個 gt句ccagc. .at出agttg

ggcaetctaa tgagaetgcc

bifid

gtcagct句tgt句句agat otb閥ttaa otα叩臼ac

0agcgcaacc

etcgcc叫t gttgccagca 句ttat明tg ggaaetca句 q明accgα

臼seigt臼get句t

gtcgtgagat

ottoc蛇崗位α閻明coaq 句明白 ettattacta

gttgccagc. .atttagttg ggcaetctag tgagaetgcc

them

gtcaget句tgt甸甸甸at ottoc蛇出aot 白白明coa狗也ααtattgtta

gttgccatc. .attcagttg ggcaetctag cgagaetgcc

800

附錄一:利用 GCG pileup 程式比對出 Lactobacillus acidophilus 、 Bifidobacteria 、 Lactobacillus casei 和

-

Streptococcus

thermophilus 四種乳酸菌位於 168 rDNA 上部份相似核酸序列的相對位置。圖

中 acido 表 Lactobacillus

acidophilus

(A 菌)

;

bifid 表 Bifidobacteria (B 菌)

;

casei 表

Lactobacillus casei

(

C 菌)

;

thenn 表 Streptococcus

thermophilus

(T 菌)。序列位置底線為

直線的是四種乳酸菌共同的引子 LAB5'端和 LAB3'端處;序列位置底線為波浪狀的則為四

(10)

氮鹼基互補配一

對延長反應

告司緩衝劑 功 能 包含

\

If]

\fJ

E

DNA

雙 模 股 板 分 離

乳酸菌溶解液

乳酸菌清洗液

功 能

除去雜質

附錄二:學生畫出來的實驗概念圖。 (上承第 69 頁) 得的知識或能力來解決其生活所遭遇之問題 以有各種形式,基本的結構可以以教學活動 時,必然是統整所有所知所學以解決其問 進行之流程為藍本,例如可以有:安置性評 題,不會限制只用某一科之知識或能力。因 量、引起動機、發展活動、綜合活動、成就 此,統整的工作,學生在學習及成長的過程 測驗等。 中是始終在進行的。學生在腦海中的認知基 本文中嘗試以「生物與環境」模組統整 模也並未刻意分割,因此在課程發展的過程 自然與生活科技之各分科概念,由於以生物 中,各學習領域中各分科之內容及比重仍需 為主軸,因此其深度及廣度以生物科教師能 要教師依其學校之教育目標及學校要發展之 特色作專業之判斷。 一 49 一 勝任教學為主。無論教材如何呈現,分科或 合科,統整或只是連結,學生在連用其所學

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