水產品中動物用藥硝基

(1)

因毒性及致癌性，無法建立其無毒害劑量（no observed effect level, NOEL）及每日容許攝取量

（acceptable daily intake, ADI），歐盟分別於1993 年⁽⁵⁾及1995年⁽⁶⁾禁止furaltadone、nitrofurazone、

nitrofurantoin及furazolidone使用於作為肉品食用的動物。然而硝基呋喃藥物在許多國家仍被違法使用，且大量存在於動物肉品中^(1,2)。歐盟於2003年針對家禽及水產品中殘留之每種硝基呋喃藥物，明定檢驗方法應具備最低能力要求

（minimum required performance limit, MRPL）為 1 ng/g⁽⁷⁾。我國為使對於市售食品之核判具有一致性，亦參考歐盟規定，實驗室於執行硝基呋喃類動物用藥及其代謝物檢測時，應具備最低能力要求為1 ppb⁽⁸⁾。

國內關於硝基呋喃代謝物之殘留情形，從92 年10月間我國輸往歐盟養殖水產品被檢出殘留硝基呋喃代謝物而遭退運⁽⁹⁾；94年從中國進口的29 批大閘蟹中，檢出6批含有禁用硝基呋喃代謝物，

不合格率逾二成⁽¹⁰⁾。95年5月間出口至美國再轉賣至加拿大的烤鰻，遭加拿大官方檢出殘留禁藥孔硝基呋喃類藥物屬於人工合成抗菌劑，被

廣泛使用作為飼料添加劑，可有效預防及治療牛、豬、家禽類、水產魚類及蝦的細菌性或原蟲疾病^{( 1 , 2 )}。常見之硝基呋喃藥物包括富來頓

（furazolidone）、富來他頓（furaltadone）、

硝化富樂遜（ n i t r o f u r a z o n e ）及硝化富蘭音

（nitrofurantoin），其在動物體內代謝非常快速，於投藥後會迅速於動物體內消失而無法測

得^{( 3 , 4 )}，而其代謝物則會與蛋白質形成穩定結

合，甚至超過30天仍可於組織中測得硝基呋喃代謝物之殘留⁽¹⁾，其中furazolidone之代謝物為 3-amino-2-oxazolidinone（AOZ），furaltadone 之代謝物為3-amino-5-morpholinomethyl-2- oxazolidinone（AMOZ），而nitrofurantoin會代謝為1-aminohydantoin（AH），nitrofurazone則代謝為semicarbazide（SC）。McCracken等學者⁽⁴⁾研究發現這些與蛋白質結合的硝基呋喃代謝物相當穩定，即使經過烹煮、烘培、燒烤或微波等食物製備過程，亦不會有明顯減量的現象。

由於硝基呋喃類藥物及其代謝物具有致基

水產品中動物用藥硝基 H喃代謝物之殘留量調查

陳信志 ¹ 　賈東明 ¹ 　許正忠 ² 　邱再預 ² 　周秀冠 ¹ 　鄭守訓 ²

1中部檢驗站　²南部檢驗站

摘　要

為了解水產品動物用藥殘留之衛生安全，由各縣市衛生局於96年6至12月間，自超級市場、大賣場與傳統市場等地，共抽樣水產品83件；其中包括吳郭魚12件、鱒魚11件、鰻魚 6件、石斑9件、香魚12件、蟹類5件、大閘蟹8件、蝦類10件、甲魚4件、田雞2件、牛蛙2 件及土虱2件，依據衛生署公告之液相層析串聯質譜法（liquid chromatography/tandem mass spectrometry）檢測硝基呋喃代謝物SC、AH、AOZ及AMOZ之殘留情形，結果於2件鱒魚檢體檢出AOZ，檢出濃度分別為1.094及0.014 ppm。檢出不合格之檢體及供貨來源，已由農政機關依「動物藥品管理法」處辦，並加強源頭養殖戶用藥管理。

關鍵詞：硝基H喃代謝物、動物用藥、水產品、液相層析串聯質譜法

前　言

(2)

雀綠和硝基呋喃代謝物⁽¹¹⁾。衛生署自95年9月1日起至10月12日，針對中國大陸及東南亞地區進口的活蟹加強檢驗，報驗批數共514批，查驗批數59 批，共有7批中國進口的大閘蟹含有禁用硝基呋喃代謝物，不合格率達12%⁽¹⁰⁾。本局於95年針對市售71件魚蝦類檢體進行抽驗，共有9件魚類及1件蝦類檢出硝基呋喃代謝物。其中AOZ之檢出濃度為0.73~972 ppb，AMOZ為24~558 ppb，SC為13.7 ppb，而AH則為20 ppb，檢出率達14.1%⁽¹²⁾。96年 7月至8月21日，衛生署共驗出6批中國冷凍白蝦含有硝基呋喃代謝物等禁藥，衛生署因此宣布自8月 22日起全面禁止中國殼蝦進口。但一批進口時虛報馬來西亞名義的冷凍蝦再度被驗出含有致癌物質硝基呋喃，來貨無產地標示，包裝箱上有大陸簡體字，整批貨被全部扣押銷毀⁽¹⁰⁾。

有鑑於歷年檢出硝基呋喃類藥物情形不斷，

本研究配合本局「食品中殘留動物用藥之檢測」

計畫，針對過去高檢出率之水產品檢體，由各縣市衛生局抽驗送至本局進行檢測，並以液相層析串聯式質譜儀（liquid chromatograph/tandem mass spectrometer, LC/MS/MS）進行定量與鑑別確認，

以評估市售禽畜水產品中硝基呋喃代謝物殘留情形，並將檢驗結果提供行政管理單位參考。

材料與方法

一、檢體來源：

本調查之檢體係由各縣市衛生局，於96年6 至12月間，自超級市場、大賣場與傳統市場等地，抽樣吳郭魚12件、鱒魚11件、鰻魚6件、石斑9件、香魚12件、蟹類5件、大閘蟹8件、蝦類10 件、甲魚4件、田雞2件、牛蛙2件及土虱2件，共計水產品檢體83件，各縣市衛生局抽驗件數分配如表一。

二、檢驗方法：

本調查計畫主要依據行政院衛生署公告「食品中動物用藥殘留量檢驗方法—硝基呋喃代謝物之檢驗」⁽¹³⁾，分析流程見圖一。

三、試藥：

3-Amino-2-oxazolidinone（AOZ，純度＞

99%）、3-Amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone（AMOZ，純度99.9%）、1-aminohydantoin hydrochloride（AH，純度99.8%）及Semicarba- zide hydrochloride（SC，純度99.9%）共計4種標準品，AOZ-d4（純度＞99%）及AMOZ-d5

（純度＞99%）2種同位素內部標準品，皆購自 Riedel-deHaën（Seelze, Germany）。2-硝基苯甲醛（2-nitrobenzaldehyde, 2-NBA，純度99.9%）為試藥特級，購自東京化成工業株式會社（東京，

日本）。乙酸乙酯為HPLC級，購自Merck Ltd.

（Darmstadt, Germany）。甲醇為LC/MS級，購自 J. T. Baker（Phillipsburg, NJ, U.S.A.）。氯化鈉、

磷酸氫二鉀、醋酸銨及鹽酸均為試藥特級。

四、器具及裝置

㈠均質攪拌機（Homogenizer）：SMT Co. Ltd.

（Tokyo, Japan）。

㈡離心機（Centrifuge）：BOECO centrifuge U-320R（Hamburg, Germany）。

㈢旋渦混合器（Vortex mixer）：Vortex-Genie 2 Mixer（Scientific Industries, Inc., NY, U.S.A.）。

㈣抽氣過濾裝置：包括抽氣瓶250 mL及布赫納漏斗（Buchner funnel）。

㈤水平振盪水浴鍋（Shaking bath）：model B603D（Firstek Scientific, Taiwan）。

㈥超音波振盪器（Ultrasonic vibrator）：Ultra- sonics Model-5510（Branson Co., U.S.A.）。

㈦去離子水製造機（Milli-Q SP reagent water system）：Millipore Ltd., Bedford, MA, U.S.A.

㈧酸鹼度測定器（pH meter）：Mettler Toledo MP225（Greifensee, Switzerland）。

㈨層析管柱：Inertsil® ODS-3（5 µm，內徑 2.1 mm × 15 cm）, GL Science Inc. (Tokyo, Japan)。

㈩濾膜（Syringe filters）：PVDF材質，0.22 µm, 47 mm, Millipore Ltd., Bedford, MA,

(3)

U.S.A.。

注射器過濾裝置：Nylon材質，0.22 µm, 13 mm, ChromTech, Taiwan。

五、儀器設備：

液相層析串聯質譜儀（liquid chromatograph/

tandem mass spectrometer, LC/MS/MS）。

Alliance 2695高效液相層析儀系統及Waters Micromass Quattro Premier XE質譜儀（Waters Cor- poration, Milford, MA, U.S.A.），安裝MassLynx數據分析軟體。

六、試劑之配製：

㈠衍生化試劑50 mM 2-硝基苯甲醛：

稱取2-硝基苯甲醛0.075 g，以甲醇溶解並定容至10 mL。須於當天新鮮配製，並置於褐色瓶中避光。

㈡0.125 M鹽酸溶液：

量取鹽酸10.4 mL，以去離子水定容至1 L。

㈢0.8 M氫氧化鈉溶液：

稱取氫氧化鈉16 g，以去離子水溶解並定容至500 mL。

表一、各縣市衛生局送驗水產品件數分配表檢體

　　　件數抽樣縣市

吳郭魚鱒魚鰻魚石斑香魚蟹類大閘蟹蝦類甲魚田雞牛蛙土虱合計

基隆市 2 2

台北市 2 1 1 2 4 10

台北縣 2 4 6

桃園縣 2 2

新竹縣 2 2

苗栗縣 2 2

台中市 1 2 3

台中縣 2 2 4

南投縣 1 1

彰化縣 2 2 4

雲林縣 2 2

嘉義縣 2 2 4

台南縣 2 1 1 4

高雄市 2 2 4

高雄縣 1 2 2 5

屏東縣 1 2 2 5

宜蘭縣 3 4 2 9

花蓮縣 2 2

台東縣 1 2 3

澎湖縣 2 2 4

連江縣 1 2 3

金門縣 2 2

合計 12 11 6 9 12 5 8 10 4 2 2 2 83

(4)

㈣0.1 M磷酸氫二鉀溶液：

稱取磷酸氫二鉀17.4 g，以去離子水溶解並定容至1 L。

㈤移動相溶液之配製：

移動相溶液A：甲醇

移動相溶液B：稱取醋酸銨0.39 g，以去離子水溶解使成1 L，以0.22 µm濾膜過濾，

取濾液供作移動相溶液B。

取移動相溶液A及B以55：45（v/v）之比例進行分析。

㈥混合標準溶液之配製：

稱取相當於含AOZ、AMOZ、SC及AH對照用標準品各約5 mg，精確稱定，以甲醇溶解並定容至50 mL，作為標準原液，再各取0.1 mL標準原液以甲醇定容至100 mL，作為混合標準原液（100 ng/mL），皆避光置於-20℃

貯存備用。使用時取適量混合標準原液，以 50%甲醇溶液稀釋至0.1~5.0 ng/mL，作為混合標準溶液，每次使用時必須新鮮配製。

㈦內部標準品之配製：

精確稱取AOZ-d4及AMOZ-d5標準品各10 mg，以甲醇溶解並定容至100 mL，作為內部標準原液，再各取0.1 mL內部標準原液，共置於100 mL定容瓶，以甲醇定容，作為內部標準溶液（100 ng/mL），皆避光置於-20℃

貯存備用。使用時取50 µL添加至樣品中。

七、檢量線之製作

精確量取標準溶液與內部標準品溶液添加於空白檢體中，使其添加濃度為0.2~10.0 ppb，依公告方法調製檢液，並參照下列條件進行液相層析串聯質譜分析，以硝基呋喃代謝物與內部標準品波峰面積比，對應添加濃度，分別製作檢量線。

當檢體檢出硝基呋喃代謝物超出檢量線範圍時，

依據待測物之濃度應於檢量線最高濃度之20%至 80%間，重新製作檢量線計算。

八、液相層析串聯質譜儀測定條件：

㈠液相層析條件

1. 層析管柱：Inertsil® ODS-3

2. 移動相溶液：依六之（五）節所調製之移動相溶液，流速為0.2 mL/min。

3. 自動樣品注射器注射量為40 µL。

㈡串聯質譜測定條件

離子源採電灑法離子化（electron spray ionization, ESI）偵測正離子，搭配多重反應偵測模式（multiple reaction monitoring, MRM）

進行偵測。質譜之分析條件見表二，多重反應偵測模式之離子及其參數見表三。

均質檢體2 g

1. 加入內部標準品 50 ML (100 ng/mL) 2. 加入 0.125 M 鹽酸溶液 10 mL 3. 加入 50 mM 2-NBA 試劑 0.4 mL 旋渦混合 15 秒

37℃ 水浴，80 rpm 水平振盪

避光，隔夜反應16 小時冷卻至室溫

1. 加入 0.1 M 磷酸氫二鉀溶液 1 mL 2. 加入 0.8 M 氫氧化鈉溶液 1 mL 3. 旋渦混合 15 秒

調整 pH 值至 7.3 ± 0.2 旋渦混合15 秒離心3500 rpm, 5 分鐘

1. 收集上清液

2. 沉澱物再以去離子水 3 mL 重複萃取一次合併上清液

1. 加入氯化鈉 0.5 g 2. 加入乙酸乙酯 12 mL 3. 旋渦混合 30 秒 4. 離心 3500 rpm, 5 分鐘取乙酸乙酯層

液相層析串聯質譜儀分析

1. 置於 40℃水浴，以氮氣吹乾 2. 以 50 % 甲醇溶液 1 mL 溶解 3. 正己烷 1 mL，混合

4. 取下層以 0.22 Mm 濾膜過濾

圖一、硝基H喃代謝物殘留之分析流程圖

(5)

九、鑑別試驗及含量測定

精確量取檢液及衍生化標準溶液各40 µL，分別注入液相層析串聯質譜儀中，參照八之（二）

節測定條件進行分析，就檢液與衍生化標準溶液所得波峰之滯留時間及多重反應偵測之相對離子強度鑑別之，並依下列計算式求出檢體中各硝基呋喃代謝物之含量（ppb）：

檢體中各硝基呋喃代謝物之含量（ppb）

= C × V M

C：由檢量線求得檢液中各硝基呋喃代謝物之濃度（ng/mL）

V：檢體最後定容之體積（mL）

M：取樣分析檢體之重量（g）

十、統計分析方法

採用QuanLynx軟體分析數據、製作檢量線與計算離子比例，並以Excel軟體統計分析。

十一、量測不確定度評估

評估之步驟是採用「食品檢驗之量測不確定度評估作業程序」（NLFD6-P8-0008）、ISO GUM⁽¹⁴⁾和Eurachem/CITA Guide⁽¹⁵⁾所建議之方法，

以提高實驗室檢測之準確度和可靠度。

十二、品質管制分析

每批次檢體（少於10個樣品）於分析硝基呋喃代謝物殘留時，分別作空白分析、添加硝基呋喃代謝物1.0 ppb於水產品之樣品分析及重複分析。

結果與討論

一、量測不確定度之分析

1. 量測不確定度來源之鑑別

水產品中硝基呋喃代謝物之檢驗之量測不確定考量因素如圖二（魚骨圖）所示。本評估報告書中標準不確定度之計算依據包括標準品配製、檢量線製作、分析流程（包含檢體稱重、萃取、定容及儀器檢測等步驟）、重表二、硝基呋喃代謝物檢測之質譜儀分析條件

ESI mode Positive

Capillary voltage（kV） 2.8

Cone voltage（V） 25

Extractor（V） 3.0

Source Temperature（℃） 120 Desolvation temperature（℃） 350 Desolvation gas ﬂow rate（L/hr） 500 Cone Gas Flow（L/hr） 100

LM 1 Resolution 12.0

HM 1 Resolution 12.0

Ion Energy 1 0.5

Entrance 1

Exit 1

LM 2 Resolution 12.0

HM 2 Resolution 12.0

Ion Energy 2 0.5

Multiplier（V） 650

表三、硝基呋喃代謝物檢測之多重反應模式偵測離子及分析參數

Compound Mass

Transition Dwell

（Secs）

Cone Voltage

（V）

Collision Energy

（eV）

NBA-SC

209 → 192^a

0.2 25 12

209 → 166^b 209 → 134^b

NBA-AOZ

236 → 134^a

0.2 25 15

236 → 104^b 236 → 149^b

NBA-AH

249 → 104a

0.2 25 20

249 → 134^b 249 → 178^b NBA-

AMOZ

335 → 291^a

0.2 25 15

335 → 262^b 335 → 128^b

AOZ-d4 240→134 0.2 25 15 AMOZ-d5 340→296 0.2 25 15

a MRM trasition used for quantitation

b MRM transition used for confirmation

(6)

複間之變異與回收率試驗，皆併入評估。

2.量測不確定度要因分析 2.1 標準品配製之不確定度

標準品溶液配製之過程中，關係到標準品本身的純度以及配製過程中使用定量瓶配製，因此需考慮定量瓶本身之容差及溫度對溶劑體積變化產生之不確定度。

2.2 標準品配製流程

2.2.1 精稱 5 m g 標準品 → 以甲醇定容至 50 mL為標準原液（Ι）（100 µg/

mL）。

2.2.2 取（Ι）液0.1 mL→以甲醇定容至 100 mL為標準原液（Ⅱ）（100 ng/

mL）。

2.2.3 取（Ⅱ）液5 mL→以50%甲醇定容至50 mL為標準溶液（10 ng/mL）。

2.2.4 取（Ⅱ）液2.5 mL→以50%甲醇定容至50 mL為標準溶液（5 ng/mL）。

2.2.5 取（Ⅱ）液1 mL→以50%甲醇定容至50 mL為標準溶液（2 ng/mL）。

2.2.6 取（Ⅱ）液0.5 mL→以50%甲醇定容

至50 mL為標準溶液（1 ng/mL）。

2.2.7 取（Ⅱ）液0.25 mL→以50%甲醇定容至50 mL為標準溶液（0.5 g/

mL）。

2.2.8 取（Ⅱ）液0.1 mL→以50%甲醇定容至50 mL為標準溶液（0.2 ng/mL）。

2.3 標準品純度（P）

由供應商（Riedel-de Haën）提供之證書

（COA），計算購買之二批標準品之純度標準偏差，假設其變異為矩形分佈（

3 s

）

，則標準不確定度及相對不確定度分別如表四所示。

2.4 標準品精稱（m_st）：天平解析度（R）為 0.01 mg，假設矩形分佈，u(R) = 0.01/2/

3 s

=0.002886751。天平校正所導入之不確定度，由校正報告中獲知，標稱值5 mg，擴充係數K＝2，95%擴充不確定度為0.082 mg，標準不確定度u(A)為0.082/2

= 0.041

∴標準品稱重重量組合標準不確定度：

定容體積(V) 重複性(f

REP

) 回收率( Rec) ^{檢體稱重(M)}

檢量線(C

X

) 標準溶液配製

檢體中硝基呋喃代謝物

校正校正

純度

校正

溫度

定容儀具

解析度

溫度

純度

稱重校正

規格容差解析度

圖二、水產品中硝基呋喃代謝物之不確定度因素分析魚骨圖

(7)

u(mst)=[u²(R)+u²(A)]^1/2=0.041101 相對不確定度為

u(mst)/ mst=0.041101/5=0.00822。

2.5 定量儀具：定量瓶、微量分注器 2.5.1 50 mL定量瓶

2.5.1.1 製造容差± 0.06 mL，假設三角形分佈，標準不確定度為

0.06/

6

= 0.02449。

2.5.1.2 溫度效應：甲醇在20℃之體積膨脹係數 α = 1.18×10^-3 mL/℃，

實驗室內溫度變化± 5℃，溫度引起之體積變異為 5 0 × 5 × α，假設矩形分佈，可得標準不確定度為50×5×1.18×10^-3/

3

=0.17032。組合標準不確定度：

u(V₁)=[ (0.02449)²+(0.17032)²]^1/2= 0.17207。

2.5.2 100 mL定量瓶

2.5.2.1 製造容差± 0.1 mL，假設三角形分佈，標準不確定度為0.1/

6

=0.04082。

2.5.2.2 溫度效應：甲醇在20℃之體積膨脹係數 α = 1.18×10^-3 mL/℃，

實驗室內溫度變化± 5℃，溫度引起之體積變異為100×5×α，

假設矩形分佈，可得標準不確定度為100×5×1.18×10^-3/

3

=0.34064。組合標準不確定度：

u(V2)=[ (0.04082)²+(0.34064)²]^1/2=

0.34308。

2.5.3 50 mL定量瓶（標準原液以50%甲醇稀釋）

2.5.3.1 製造容差± 0.06 mL，假設三角形分佈，標準不確定度為 0.06/

6

=0.02449。

2.5.3.2 溫度效應：甲醇在20℃之體積膨脹係數 α = 1.18×10^-3 mL/℃，水在20℃之體積膨脹係數 α = 2.1

×10^-4 mL/℃實驗室內溫度變化

± 5℃，溫度引起之體積變異為

（50×5×αmethanol×50%）＋（50

×5×αwater×50%），假設矩形分

佈，可得標準不確定度為[(50×5

×1.18×10^-3×0.5)＋(50×5×2.1

×10^-4×0.5)]/

3

=0.10031。組合標準不確定度：u(V3)=[ (0.02449)

2+(0.10031)²]^1/2=0.10326。

2.5.4 分注器

由校正報告中獲知，100 µL分注器在擴充係數K＝2，95%信心水準，

標準不確定度u(V₄)為0.027。

1000 µL分注器在擴充係數K＝2，

95%信心水準，組合標準不確定度 u(V5)為0.323。

5000 µL分注器在擴充係數K＝2，

95%信心水準，組合標準不確定度 u(V₆)為1.902。

2.5.5 定容儀具之相對不確定度u (VST)/ VST

表四、硝基呋喃代謝物標準品純度之相對不確定度

品項批號平均純度(%) 標準偏差(%) 標準不確定度u(P) 相對不確定度u(P)/P

SC-HCl 5027X

99.80 ± 0.20 0.001154 1.16×10^-5 6171X

AH-HCl 6205X

99.85 ± 0.15 0.000866 8.67×10^-6 6234X

AOZ 6116X

99.00 ± 1.00 0.005774 5.83×10^-5 6128X

AMOZ 4267X

99.45 ± 0.55 0.003175 3.19×10^-5 6116X

(8)

公式如下：

5000 902 .

1

}^1/2

＝0.00707

∴ 定容儀具之相對不確定度u (VST)/

V_ST為0.00707。

2.6 標準品配製之相對不確定度u（fSTD）經由量測不確定度傳遞原理可得下列公式：

2 1/2 st 2 st st 2 st

V ) u(V m

) u(m P C u(P) ) C (

u ®¼

® » º

®

® ¬

« ¸¹ ·

©ª ¨

¸¹

©ª · ¨

¸¹ ·

©ª ¨ s

^ST

ST

C

ST

= V

P m s

u(C_ST)：標準品配製之組合不確定度 CST：標準原液濃度

m：5 mg V：50 mL

標準品配製之相對不確定度u（f_STD）=u (CST)/ CST

計算之結果詳列於表五。

3. 檢量線濃度之不確定度

利用6個標準品濃度（0.2~10 ppb）配製檢

量線，共製作4條檢量線（表六），檢量線量測不確定度公式如下：

1/2 XX

2

D ref

]

S ) X - (C n 1 p [ 1 a u(Cref) S

n：檢量線所用標準品之數目=24 p：檢量線之條數=4

a：檢量線之斜率=(Σbi)/p

S_D：檢量線之平均標準差=[SSE/(n-2)]^1/2 SSE=∑(y-‾y)²

C_ref：由檢量線獲得之檢液濃度（ng/mL）

1/2 XX ref 2

D

]

S ) X - (C n 1 p [ 1 a

u(Cref) S

：標準液之平均濃度=3.12 ppb

¤

i ²

XX

(X - X )

S

=72.00833 計算之結果詳列於表七。

4. 檢體精稱（m_samp）：天平解析度（R）為 0.01 mg，假設矩形分佈，u(R)=0.01/2/

3

=0.002886751。天平校正所導入之不確定度，由校正報告中獲知，標稱值2 g，擴充係數K＝2，95%擴充不確定度為0.31 mg，

標準不確定度u(A)為0.31/2=0.155

∴ 檢體稱重組合標準不確定度：u(m_samp)=[u

2(R)+u²(A)]^1/2=0.15503

相對不確定度u(m_samp)/ m_samp=0.15503/2000=

0.00008

5. 檢液定容（V）

1000 µL分注器在擴充係數K＝2，95%信心水準，組合標準不確定度u(V)為0.323，相對不確定度u(V)/V=0.323/1000=0.00032。

6. 空白試驗之不確定度：

分析濃度均為0，因此無變異故不計。

7. 回收率（Recovery）檢測（Type A）

7.1 執行 21~23次添加樣品分析，求出其回

表五、硝基呋喃代謝物標準品配製之組合不確定度硝基呋喃

代謝物

標準原液濃度

（µg/mL）CST

標準品純度之相對不確定度

u(P)/P

標準品稱重重量之相對不確定度

u(m_st)/m_st

定容儀具之相對不確定度

u(V_st)/V_st

標準品配製之組合不確定度

u(C_ST)

標準品配製之相對不確定度

u（f_STD） SC 99.8 1.16×10^-5 0.00822 0.00707 1.08190 0.01084 AH 99.85 8.67×10^-6 0.00822 0.00707 1.08244 0.01084 AOZ 99.00 5.83×10^-5 0.00822 0.00707 1.07324 0.01084 AMOZ 99.45 3.19×10^-5 0.00822 0.00707 1.07811 0.01084

(9)

收率之結果，並計算回收率之平均值

（%）及回收率之標準偏差（%），詳見表八。

7.2 回收率（Rec）標準不確定度

S C 回收率平均值之標準不確定度 u（Rec）＝0.1092 /√21=0.02383

∴ 其相對不確定度＝u（Rec）/ Rec=

0.02383/0.7817=0.03048

A H 回收率平均值之標準不確定度 u（Rec）＝0.1689 /√21=0.03686 表六、檢量線之斜率、迴歸係數與線性方程式

標準品名稱斜率a 檢量線y=ax+b 迴歸係數R²

1.

SC 0.279248 Y=0.279248X－0.0066142 0.997638

AH 0.206057 Y=0.206057X－0.00232011 0.998851

AOZ 1.03171 Y=1.03171X－0.00198729 0.999049

AMOZ 0.814303 Y=0.814303X＋0.0080355 0.997588

2.

SC 0.347125 Y=0.347125X－0.00110164 0.995412

AH 0.233437 Y=0.233437X－0.0045128 0.994633

AOZ 1.2358 Y=1.2358X－0.013456 0.997425

AMOZ 0.886114 Y=0.886114X－0.00668236 0.998296

3.

SC 0.168187 Y=0.168187X－0.00243795 0.997176

AH 0.219062 Y=0.219062X－0.0154945 0.995925

AOZ 1.00319 Y=1.00319X－0.0147974 0.999347

AMOZ 0.80323 Y=0.80323X－0.000379324 0.997302

4.

SC 0.311465 Y=0.311465X＋0.00391363 0.995513 AH 0.220812 Y=0.220812X－0.00399984 0.994126

AOZ 1.19911 Y=1.19911X－0.0104726 0.997474

AMOZ 0.93971 Y=0.93971X＋0.000015528 0.998397

平均

SC 0.281684 Y=0.281684X－0.017747 0.999378

AH 0.222487 Y=0.222487X－0.01472 0.999792

AOZ 1.137072 Y=1.137072X－0.071363 0.999496

AMOZ 0.874156 Y=0.874156X－0.028901 0.999844 表七、檢量線之不確定度計算結果

標準品名稱平均斜率a 檢量線之平均標準差SD

由檢量線獲得之檢液濃度

（ng/mL）C_ref

檢量線之不確定度 u(C_ref)

SC 0.281684 0.02983 3.22 0.05720

AH 0.222487 0.01362 3.95 0.03359

AOZ 1.137072 0.10833 4.32 0.05320

AMOZ 0.874156 0.04631 4.93 0.03077

表八、添加硝基呋喃代謝物標準品於檢體之平均回收率及標準差

硝基呋喃代謝物

添加組數平均回收率

（%）

標準偏差

（%）

SC 21 78.17 10.92

AH 21 87.42 16.89

AOZ 23 98.88 9.26

AMOZ 23 101.72 6.94

(10)

0.03686/0.8742=0.04216

A O Z 回收率平均值之標準不確定度 u（Rec）＝0.0926 /√23=0.01931

0.01931/0.9888=0.01953

A MOZ回收率平均值之標準不確定度 u（Rec）＝0.0694 /√23=0.01447

0.01447/1.0172=0.01423 8. 重複性試驗 ( Type A )

8.1 執行10次以上重複樣品分析，分別求出其檢測濃度之結果，並計算平均濃度

（ng/mL）、差異與相對差異百分比等數據，計算標準偏差，結果詳見表九。

8.2 重複性試驗標準不確定度：

SC重複性相對不確定度u(f_REP)＝標準偏差（SD）/√10＝0.07102/√10＝

0.02246

AH重複性相對不確定度u(fREP)＝標準偏差（SD）/√10＝0.11869/√10＝

0.03753

AOZ重複性相對不確定度u(f_REP)＝標準偏差（SD）/√11＝0.08786/√11＝

0.02649

AMOZ重複性相對不確定度u(fREP)＝標準偏差（SD）/√11＝0.07006/√11＝

0.02112

9. 檢體檢測之不確定度 9.1 組合不確定度公式：

Cop＝Cref‧

samp

Vop

Rec • m

‧fREP‧fSTD

Cop：由標準程序中，依受測量定義所計算出來檢體之濃度。

Cref：由檢量線獲得之檢液濃度（ng/

mL）

V

_op：檢液定容體積：1 mL Rec：平均回收率

msamp＝檢體重量：2 g

f_REP＝ 1，因u (f_REP)已經是相對不確定度。

f_STD＝ 1，但需把u (f_STD)變成相對不確定度。

計算結果詳見表十。

9.2 檢體中硝基呋喃代謝物含量檢測之組合不確定度計算如下：

u(Cop)＝Cop‧ ²

2

( ) ( )

) (

®

® ¬

« ¸¹ ·

©ª ¨

¸

¸ ¹

· © © ª ¨

¸ ¸

¹

· © © ª

¨

samp samp ref

ref

2 / 2 1 2

2

( ) ( )

Re ) Re (

®¼

® » º

¸ ¹

© · ª ¨

¸ ¹

© · ª ¨

¸ ¹

© · ª

¨

STD STD REP

REP

f

f u f

f u c

c u

V V u M

M u C

C u

計算結果詳見表十一，硝基呋喃代謝物含量檢測之組合不確定度 S C 為0.08899，AH為0.13127，AOZ為表九、添加硝基呋喃代謝物標準品於檢體之重複樣品

分析結果硝基呋喃

代謝物 No

相對差異百分比（R, %）

SC AH AOZ AMOZ

1 6.977 4.016 2.151 20.225 2 12.346 36.269 0.948 0.976 3 16.514 7.568 3.141 1.026 4 10.989 29.703 9.476 5.181 5 28.402 22.798 9.677 0.000 6 10.689 1.970 32.603 18.546 7 4.476 7.270 2.453 2.187 8 10.894 10.498 2.091 2.633 9 3.123 1.302 11.164 9.989 10 4.020 3.678 2.199 0.622

11 2.505 1.107

標準偏差

(S_D, %) 7.102% 11.869% 8.786% 7.006%

表十、檢體中硝基H喃代謝物含量檢測之受測量定義計算之檢體濃度

由檢量線獲得之檢液濃度（ng/mL）

C_ref

平均回收率 Rec

受測量定義計算之檢體濃度C_op

SC 3.22 78.17% 2.06

AH 3.95 87.42% 2.26

AOZ 4.32 98.88% 2.18

AMOZ 4.93 101.72% 2.42

(11)

0.08034，AMOZ為0.06905。

9.3 擴充不確定度之計算

量測組合不確定度乘以擴充系數K即得擴充不確定度。在95%信賴水準，

K=2所獲得硝基呋喃代謝物量測結果，

SC為2.06 ± 0.178 ng/g，AH為2.26 ± 0.263 ng/g，AOZ為2.18 ± 0.161 ng/g，

AMOZ為2.42 ± 0.138 ng/g。

二、品質管制分析

每批次水產品（少於10個樣品）檢驗硝基呋喃代謝物殘留時，至少作一次空白分析、重複分

析及添加樣品分析。本調查添加1.0 ppb之標準品於樣品中進行重複分析及添加樣品分析，4種硝基呋喃代謝物之添加回收率均在管制上限（upper control limit, UCL）及管制下限（lower control limit, LCL）之內（圖三)；相對差異百分比皆低於警告上限（upper warning limit, UCL）（圖四），檢測結果均符合品管要求。

三、調查結果與往年之比較

96年度市售調查結果係依據衛生署公告衛署食字第0960402011號令⁽⁸⁾，低於1 ng/g以下，認定為未檢出。96年度共抽驗83件水產品，於2件鱒表十一、檢體中硝基呋喃代謝物含量檢測之組合不確定度

檢量線濃度之相對不確定度

u(C_ref)/C_ref

檢液定容之相對不確定度

u(V)/V

檢體稱重之相對不確定度 u(m_samp)/m_samp

重複性相對不確定度u(f_REP)/

f_REP

回收率相對不確定度u(Rec)/

Rec

標準品配製之相對不確定度 u（f_STD）/ f_STD

組合不確定度 u(Cop) SC 0.01776 0.00032 0.00008 0.02246 0.03048 0.01086 0.08899 AH 0.00850 0.00032 0.00008 0.03753 0.04216 0.01084 0.13127 AOZ 0.01231 0.00032 0.00008 0.02649 0.01953 0.01084 0.08034 AMOZ 0.00624 0.00032 0.00008 0.02112 0.01423 0.01115 0.06905

（c） AOZ添加回收管制圖

0.00%

20.00%

40.00%

60.00%

80.00%

100.00%

120.00%

140.00%

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

次數

回收率

（d） AMOZ添加回收管制圖

0.00%

20.00%

40.00%

60.00%

80.00%

100.00%

120.00%

140.00%

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

次數

回收率

UCLUWL Rec LWLLCL

UCLUWL RecLWL LCL

（a） SC添加回收管制圖

0.000%

20.000%

40.000%

60.000%

80.000%

100.000%

120.000%

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

次數

回收率

（b） AH添加回收管制圖

0.00%

20.00%

40.00%

60.00%

80.00%

100.00%

120.00%

140.00%

160.00%

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

次數

回收率

LWL UCLUWL

Rec LCL LWL UCLUWL Rec LCL

圖三、水產品中硝基呋喃代謝物（a）SC、（b）AH、（c）AOZ及（d）AMOZ之添加樣品管制圖（UCL：管制上限、

LCL：管制下限、UWL：警告上限、LWL：警告下限、Rec：回收率平均值）

(12)

魚檢體中，檢出含有依規定不得檢出之富來頓代謝物AOZ，檢出濃度分別為1.094及0.014 ppm。

鱒魚之檢出率為18.2%，總檢出率為2.4%（表

十二）。檢出之檢體依據歐盟2002/657/EC⁽¹⁶⁾之規定，分析物之滯留時間與標準品之滯留時間之誤差須介於2.5%，子離子含量比例必需符合容許範圍（ion ratio tolerance）（表十三）。圖五為鱒魚檢體檢出AOZ之多重反應偵測層析圖譜，本調查結果相較於往年，鱒魚之檢出率與總檢出率均低於去年度之抽驗結果（鱒魚檢出率70%、總檢出率14.1%），然而硝基呋喃類藥品持續使用於養殖鱒魚，未來仍需對這類產品持續進行市售品監測。

表十二、市售水產品中硝基呋喃代謝物殘留量調查結果

檢體名稱

檢出物質

檢出件數

（檢體抽樣數）

檢出率

（%）

檢出量

（ppm）

吳郭魚－ 0（12） 0 ND

鱒魚 AOZ 2（11） 18.2 0.014、

1.094

鰻魚－ 0（6） 0 ND

石斑－ 0（9） 0 ND

香魚－ 0（12） 0 ND

蟹類－ 0（5） 0 ND

大閘蟹－ 0（8） 0 ND

蝦類－ 0（10） 0 ND

甲魚－ 0（4） 0 ND

田雞－ 0（2） 0 ND

牛蛙－ 0（2） 0 ND

土虱－ 0（2） 0 ND

總計 2（83） 2.4

註：ND = Non Detect

表十三、液相層析串聯質譜技術分析硝基H喃代謝物之相對離子強度容許範圍

Relative intensity*

(% of base peak) Ion ratio tolerance（CI-GC-MS, GC- MS-MSⁿ, LC-MS, LC-MS-MSⁿ）

>50 % ± 20 %

> 20 % - 50 % ± 25 %

> 10 % - 20 % ± 30 %

＜10 % ± 50 %

＊Relative intensity =

Peak area of second transition product Peak area of main transition product

×100%

（a） SC重複分析管制圖

0.00%

5.00%

10.00%

15.00%

20.00%

25.00%

30.00%

35.00%

40.00%

45.00%

50.00%

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

次數

相對差異百分比

（b） AH重複分析管制圖

0.00%

5.00%

10.00%

15.00%

20.00%

25.00%

30.00%

35.00%

40.00%

45.00%

50.00%

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

次數

UCL UWL

R UCL UWL R

（c） AOZ重複分析管制圖

0.00%

5.00%

10.00%

15.00%

20.00%

25.00%

30.00%

35.00%

40.00%

45.00%

50.00%

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

次數

（d） AMOZ重複分析管制圖

0.00%

5.00%

10.00%

15.00%

20.00%

25.00%

30.00%

35.00%

40.00%

45.00%

50.00%

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

次數

UCL UWL

R

UCL UWL

R

圖四、水產品中硝基呋喃代謝物（a）SC、（b）AH、（c）AOZ及（d）AMOZ之重複分析管制圖（UCL：管制上限、

UWL：警告上限、R：相對差異百分比）

(13)

（ a）

Tauyan sample 2 check HLB

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00Time

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00

%

0 100

960803_37 Sm (Mn, 2x1) MRM of 14 Channels ES+

236 > 134 9.45e6 Area 33167763.78

236 > 104 4.45e6 Area 15717413.78

236 > 149 1.08e6 Area 3646773.78

236 > 134 4.29e6 Area 13998643.78

236 > 104 2.02e6 Area 6631733.78

236 > 149 4.87e5 Area 1642163.78

（b）

Taipei city sample 1

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00Time

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00

%

0 100

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00

%

0 100

236 > 134 2.11e5 Area 680903.83

236 > 104 1.00e5 Area 382513.83

236 > 149 2.37e4 Area 71983.83

236 > 134 1.32e5 Area 421953.83

236 > 104 6.35e4 Area 210803.83

236 > 149 1.53e4 Area 49943.83

2.98130

桃園縣鱒魚

AOZ 500 ppb

台北市鱒魚

AOZ 10 ppb

圖五、殘留AOZ之鱒魚檢體之液相層析串聯質譜儀多重反應偵測層析圖譜

(14)

四、風險評估

本調查檢出不符規定之AOZ，為富來頓之代謝物，富來頓屬於廣效性抗菌劑，於動物體內快速代謝，其代謝物與蛋白質結合而相當安定，

雖然目前尚無足夠證據證明硝基呋喃類類藥物對人體具有致癌性，但其致癌性及致基因突變性之風險仍不可忽視。為避免硝基呋喃類藥物對人類健康造成危害，歐盟及美國等國家皆已公告禁止使用於產食動物，行政院農業委員會亦於92 年11月21日公告，自93年6月1日起全面禁止動物使用硝基呋喃類之動物用藥品⁽¹⁷⁾。聯合國糧農組織/世界衛生組織食品添加物專家委員會（Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives, JECFA）未針對硝基呋喃類藥物訂定每日可接受攝取量（Acceptable daily intake, ADI）。依據行政院衛生署「動物用藥殘留標準」⁽¹⁸⁾，水產品中硝基呋喃類動物用藥代謝物之殘留規定均為不得檢出，因此若長期食用含有硝基呋喃類藥物殘留之食品，恐會對人體健康引發風險。

五、不符規定檢體之後續追蹤處理

本次調查不符規定之檢體，除函送當地衛生局依法處辦外，並副知行政院農業委員會漁業署與動植物防疫檢疫局。並已由地方衛生局及農政機關進行追查，皆已查出供貨來源，且列為加強輔導對象，進行源頭管理及輔導改善，以防止再度違反規定。經追蹤之不符規定之鱒魚檢體來源，已就不合格之魚池執行銷毀，其他未上市販售之鱒魚禁止移出養殖池處分，並持續追蹤檢驗。

結　論

本調查研究檢測83件水產品中硝基呋喃代謝物殘留情形，結果於2件鱒魚檢體檢出不得殘留之 AOZ，檢出濃度分別為1.094及0.014 ppm，與規定不符者佔2.4%，所有檢驗流程符合品管要求且依照國際規範判定。調查結果顯示部分業者未遵守動物用藥之相關規定，導致市售鱒魚仍存在硝基呋喃代謝物殘留問題。本調查結果已提供有關單

位作為行政管理之參考，以加強對業者之源頭管理及輔導，對於不易追蹤來源之水產品，未來更需落實「水產品生產履歷管理系統」之執行。有鑑於硝基呋喃類藥物近幾年不斷地被檢出，續於 97年度規劃市售畜禽水產品殘留硝基呋喃代謝物之檢測計畫，持續調查動物用藥殘留情形，以維護消費大眾食用之安全。

參考文獻

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Survey of Nitrofuran Metabolite Residues in Aquatic Products

HSIN-CHIH CHEN ¹ , DUNG-MING JEA ¹ , CHENG-CHUNG HSU ² , TRAY-YUH CHIOU ² , HSIU-KUAN CHOU ¹ AND SHOU-HSUN CHENG ²

1Central Regional Laboratory ²Southern Regional Laboratory

ABSTRACT

In order to survey nitrofuran metabolite residues in aquatic products in Taiwan, local health bureaus were coordinated to sample the marketed products including tilapias, trouts, eels, groupers, crabs, hairy crabs, sweet fishs (ayu), shrimps, turtles, frogs, bullfrogs and catfishs, from the supermarkets, warehouse stores and traditional markets. The residual nitrofuran metabolites in samples were analyzed by liquid chromatography/tandem mass spectrometry (LC/MS/MS). The results showed that 2 trouts contained AOZ, which is forbidden in livestock and aquatic products, at concentrations of 1.094 and 0.014 ppm respectively. The non-compliant products were reported to the local enforcement authorities, tracked down to their supply sources and fined according to the Veterinary Drugs Control Act.

Key words: nitrofuran metabolites, aquatic products, veterinary drugs, LC/MS/MS

水產品中動物用藥硝基

水產品中動物用藥硝基 H喃代謝物之殘留量調查

陳信志 1 賈東明 1 許正忠 2 邱再預 2 周秀冠 1 鄭守訓 2

摘 要

前 言

材料與方法

結果與討論

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陳信志 ¹ 　賈東明 ¹ 　許正忠 ² 　邱再預 ² 　周秀冠 ¹ 　鄭守訓 ²

摘　要

前　言