行政院國家科學委員會專題研究計畫 成果報告
研究調控子 REP1 在白色念珠菌中調節真菌抗藥性的功能
計畫類別： 個別型計畫 計畫編號： NSC94-2320-B-009-001- 執行期間： 94 年 08 月 01 日至 95 年 07 月 31 日 執行單位： 國立交通大學生物科技學系(所) 計畫主持人： 楊昀良 計畫參與人員： 石欣怡, 郭大榮, 林啟陽, 陳杏芳, 歐陽政中, 吳金蓉, 王 馨 報告類型： 精簡報告 報告附件： 出席國際會議研究心得報告及發表論文 處理方式： 本計畫可公開查詢中 華 民 國 95 年 7 月 25 日
成果報告: NSC 94-2320-B-009-001 執行時間: 94/08/01 –95/07/31 主持人：楊昀良 國立交通大學生物科技學系 由於醫學的發展產生了各式各樣的醫療器材和藥物。這些新發展的普遍 應用，使免疫系統功能不健全的病患壽命延長，再加上抗生素的不適當使用， 使伺機型病原菌造成的感染病症大量地增加。其中尤以真菌感染的增加最為 顯著，在近年來已成為院內感染的主要病因之一。以美國為例，念珠菌 (Candida)已升為院內感染的第四常見致病菌。在台灣也不例外，念珠菌自 1981 至 2000 年間在北部某大醫院中造成院內感染的例子就增加了 16 倍,成 為最常見的院內感染的真菌致病原。因此，如何防治真菌感染已是一個刻不 容緩的課題。惟目前抗真菌藥物種類並不多，而且多半伴隨著危險的副作用; 尤有甚者，隨著大量使用抗真菌藥物，抗藥性菌株的出現也隨著增加。 產生真菌抗藥的主要機制之一是過度表現藥物幫浦CDR1，使真菌細胞可 將體內的藥物排出體外，減少藥物在體內的累積而產生抗藥性。為了瞭解
CDRI 表現的調控機制，我們建構了一個 lacZ 報告子(lacZ reporter)系統，
用來篩選白色念珠菌(Candida albicans)的 CDRI 的反式調控子
(trans-acting regulatory factors) 。我們將CDR1 的起動子(promoter)
和lacZ 基因結合，使得 lacZ 的表現受控於 CDR1 的起動子（CDR1p-lacZ）。
將此系統轉形至啤酒酵母菌後，再以基因遺傳(Gentics)表現之方法篩選白色 念珠菌的 gene library，進而找出 library 中能調控CDRI 表現的反式因子。
在篩選所得之基因中，被我們命名為REP1 的基因在過度表現(over
expression)時會提升CDR1p-lacZ 在啤酒酵母菌中的表現。進一步實驗結果
顯示，過度表現REP1 可改變啤酒酵母菌對抗真菌藥物的抗藥性。
本研究目的是了解REP1 在白色念珠菌中所扮演的角色。 經分析, REP1
和CaNTD80 有相似的 DNA binding domain，此 domain 與白色念珠菌產生抗
藥性有關。為了偵測REP1 是否與白色念珠菌抗藥性的產生及表現有關，我們
建構rep1/rep1 的突變株，以探討 REP1 在白色念珠菌抗藥性所扮演的角色。
此外，為進一步了解REP1 與 CaNDT80 的關係，我們亦建構 rep1/rep1 Candt80/Candt80 的雙突變株。以瞭解基因的功能。
Publication:
1. Yang, Y.-L., Lin, Y.-H., Tsao, M.-Y., Chen, C.-G., Shih, H.-I., Fan, J.-C., Wang, J.-S. and Lo, H.-J. (2006). Serum repressing efflux pump CDR1 in Candida
albicans. BMC Molecular Biology. 7:22. SCI.
2. Yang,Y.-L.*, Chen, H.-F, Kuo, T.-J., Lin, C.-Y. (2006). Mutations on CaENO1 in Candida albicans inhibit cell growth in the presence of glucose. J. Biomedical Science: 13:312-21. SCI
3. Wang, J.-S., Yang, Y.-L., Wu, C.-J., Ouyang, K. J.,Tseng, K.-Y., Chen, C.-G., Wang, H., and Lo, H.-J. (2006). The DNA Binding Domain of CaNdt80p Is Required for Activating CDR1 Involved in Drug Resistance in Candida albicans. J. Medical Microbiology. Accepted. SCI.
Abstracts for international conferences:
1. Yang, Y. L., Kao, Y. Y., Chen, C. G., Su, C. L., Tsao, M. Y., Lo, H. J. (2005). Cph1 negatively regulating MDR1 involved in drug resistance in Candida albicans. XXIInd International Conference on Yeast Genetics and Molecular Biology P-S95. 7-12 August, 2005. Bratislava, Slovakia.
2. Wang, J. S., Chen, C. G., Shih, H. I., Yang, Y. L., Lo, H. J. (2005). CaNdt80 involved in drug resistance by regulating the expression of CDR1 in Candida
albicans. XXIInd International Conference on Yeast Genetics and Molecular
Biology P-S205. 7-12 August, 2005. Bratislava, Slovakia.
3. Chen, C. G., Yang, Y. L., Cheng, H. H., Su, C. L., Huang, S. F., Chen, C. T., Liu, Y. T., Su, I. J., Lo, H. J. (2005). Non-fatal Candida albicans cph1/cph1 efg1/efg1 transcription factor mutant forming filaments and causing inflammation in a mouse model of systemic infection. XXIInd International Conference on Yeast Genetics and Molecular Biology P-S205. 7-12 August, 2005. Bratislava, Slovakia. 4.Yang, Y., Chen, H. (2006). Mutations on CaENO1 Arrest the Cell Growth of
Candida albicans in the Presence of Glucose and Serum. The 16th Congress of
the International Society for Human and Animal Mycology. P-708. 25-29 June, 2006. Paris, France.
5. Yang, Y., Cheng, H., Lo, H. (2006). The Distribution of Candida Species and Their Trends of Drug Susceptibility between 1999-2002 in Taiwan. The 16th Congress of the International Society for Human and Animal Mycology. P-571. 25-29 June, 2006. Paris, France.
6. Lo, H., Yang, Y., Chen, C., Shih, H., Wang, J. (2006). A Positive Transcription Factor, CaNDT80, of CDR1 Involved in Drug Resistance in Candida albicans. The 16th Congress of the International Society for Human and Animal Mycology. P-660. 25-29 June, 2006. Paris, France.
7. Lo, H., Yang, Y., Li, S., Wang, J., Chou, H. (2006). Close Relatedness among Fluconazole Resistant Candida tropicalis Isolates from Different Hospitals in Taiwan. The 16th Congress of the International Society for Human and Animal Mycology. P-504. 25-29, June, 2006. Paris, France.
