成大研發快訊 - 文摘
成大研發快訊 第二十二卷 第八期 - 2012年七月二十日 [ http://research.ncku.edu.tw/re/articles/c/20120720/4.html ]
MicroRNA-330 是一抑癌因子並藉由E2F1蛋白抑制Akt
磷酸化以促使攝護腺癌細胞凋亡
李崑豪
1、陳玉玲
2、葉劭德
3、蕭宏昇
4、林仁泰
5、管毅剛
6,7、呂佩融
*81國立成功大學基礎醫學研究所、2口腔醫學研究所、以及8臨床醫學研究所；3台北醫藥大學泌尿部； 4中 央研究院基因體研究中心;5高雄榮民總醫院泌尿外科以及6外科部；7國立陽明大學外科部
pjlu2190@mail.ncku.edu.tw Oncogene 2009;28:3360-3370
微
小核醣核酸(microRNA/miRNA)是一段長度約為22核苷酸的寡核醣核酸分子，可藉由抑制其target mRNA轉譯作用，或造成target mRNA降解來降低基因的表現。
許多研究推論miRNA可能參予癌化過程。已有超過700個miRNA被証實存在於人體 中，約有100個左右miRNA被指出與人類癌症有關，包含乳癌、血癌、肺癌、直腸 癌、腦癌和肝癌。不過，對於大部分的miRNA在人類癌症所扮演的角色仍需進一步 印證。本研究主要探討與攝護腺癌相關的miRNAs在攝護腺癌癌化過程中的角色。
我們發現miR-330在攝護腺癌細胞株中的表現明顯低於正常攝護腺細胞株，利用生 物資訊學方法和luciferase reporter assay証明miR-330所調控的蛋白為E2F1。分析
E2F1蛋白質在攝護腺癌細胞株與攝護腺癌臨床組織的表現，我們發現E2F1蛋白質的表現與miR-330的表現 呈相反趨勢(Fig. 1)。進一步在攝護腺癌細胞株中過度表現miR-330，結果發現miR-330藉由抑制E2F1的表現 間接抑制Akt的磷酸化，而促使細胞的生長受抑制，並誘導細胞凋亡(Fig. 2 and 3)。綜合上述結果，我們認 為miR-330可以透過負向調控E2F1-磷酸化Akt訊息來影響攝護腺癌細胞的生長。應用方面，此研究提供將 來microRNA在臨床上治療攝護腺癌的新方向。
Figure 1. 在臨床攝護腺檢體中miR-330和E2F1蛋白表現呈負相關. 臨床攝護腺正常和腫瘤組織中，miR-330
(a)和E2F1 (b)蛋白的相對表現量。
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Figure 2. MiR-330在轉錄後階段控制E2F1蛋白質表現並抑制細胞生長. (a和b) 在轉染pre-miR-330或anti- miR-330的PC-3細胞中，分析miR-330相對表現量，以及利用西方點墨法分析E2F1和cyclinD1蛋白表現量。
(c) 利用Focus-forming assay分析PC-3細胞，在轉染pre-miR-330後的細胞生長抑制。(d) 過度表現E2F1蛋白 可除去因miR-330調控而減少的Akt、Bad、磷酸化caspase-9而造成PARP cleavage回復。
Figure 3. Pre-miR-330在PC-3細胞中藉由抑制Akt磷酸化促使細胞凋亡. (a) 比較PC-3細胞在轉染control-miR (上圖)或pre-miR-330 (下圖)後，細胞內激酶的改變。(b) 利用西方點墨法分析PC-3細胞在共同轉染pre-miR- 330以及myr-Akt後，細胞內Akt磷酸化程度，以及細胞凋亡相關蛋白的表現。(c) miR-330藉由調控E2F1-Akt 磷酸化訊息而促使細胞凋亡之圖解。
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