材料與方法 材料與方法 材料與方法 材料與方法
一、 實驗動物簡介
雪山草蜥 (T. hsuehshanesis)為臺灣特有種，目前紀錄僅侷限於臺灣中部偏北 雪山山脈，海拔 1800～3000 m 左右的山區。外型較臺灣的同屬蜥蜴都為粗壯，
吻肛長最大可達 6.8 cm 左右，尾長最大約達吻肛長的兩倍，一般具有兩對鼠蹊 孔，腹鱗較平滑。
臺灣草蜥 (T. formosanus)身體修長，最大吻肛長可達 6 cm，最大尾長約達吻 肛長的三倍，一般具有兩對鼠蹊孔。亦為臺灣特有種，廣泛分布於全島低海拔 1500 m 以下之地區 (Lue et al., 1999)。依據 Lin (2002)的研究，本研究採用之蜥 蜴為臺灣草蜥北部種，分布在臺灣北部地區，東向往南延伸至清水斷崖，西邊與 臺灣草蜥西部種的分界較不明顯。
二、 實驗動物採集與飼養
實驗動物的採集是於 2006 年四月到六月，以徒手捕捉之方式，於野外採集 雌性成蜥。臺灣草蜥採自基隆市八斗子公園以及臺北縣新店市的四崁水區域；雪 山草蜥採自合歡山區小風口及落鷹山莊附近，採集證為太魯閣國家公園所核可，
證號為：營太保字第 0950001641。帶回之雌蜥飼養於 21×12×12 cm (長×寬×高) 的飼養箱中，給予潮濕水苔做為墊料，環境溫度為 25℃，設定光週期為 12 小時 光亮 (6:00 am～6:00 pm)，12 小時黑暗。給予飲水及蟋蟀或麵包蟲，並附上一個 功率 2 瓦的紅燈泡使其可以自由選溫，等待實驗進行。
三、 實驗方法
(1) 恆溫孵化實驗
於 2005 年 7 月自臺北市立動物園所測得的夏季地表溫度顯示，在茂密樹林
的石頭下約為 24℃～30℃，在開闊草地石頭下為 26℃～35℃。為避免實驗溫度 過高使孵化率低落，而無法找出極限高溫，因此將恆溫孵化的最高溫組設為 33℃。根據我們的野外觀察，雪山草蜥母蜥的生殖季節為 5 到 8 月，2005 年特 有生物中心高海拔試驗站所測得的森林外土下 10 cm 的日均溫約為 10℃～
16℃ ， 然 而 先 前 以 蓬 萊 草 蜥 所 做 的 孵 化 實 驗 顯 示 ， 15℃ 的 孵 化 率 為 0%
(unpublished data)，為了避免類似情況發生，恆溫孵化實驗所設置的最低溫度選 取為 18℃，另外的兩組溫度則在 18℃及 33℃的範圍內每隔 5℃設置一組孵化溫 度，分別為 23℃、28℃，如此總共為四組孵化溫度。
針對大陸北草蜥的研究顯示，雖然早期的失水會造成卵的高死亡率，但實驗 中設置的不同孵化溼度 (蛭石與水的重量比為 1：1、1：2 及 1：3)對幼體的表型 影響不顯著，而溼度 1：1 與 1：2 時的孵化率無差異 (Lin & Ji, 1998)。另外，先 前以蓬萊草蜥做卵的孵化實驗，其結果也顯示，在基質溼度 1：1 及 1：2 時不影 響孵化率與表型 (unpublished data)。Packard et al. (1977)認為，革質卵在孵化過 程中，即使外界空氣的水份含量達到飽和，水份仍會不斷地自卵的表面散失。因 此，本實驗為了避免水份散失過快，選擇含水量較高的混合比 (1：2)，取蛭石 100 g 與水 200 g 置入高 12 cm、直徑 8.5 cm 的透明塑膠罐內做為孵化基質，瓶 口覆蓋避免水份迅速散失，並於蓋上鑽通氣小孔數個，以利胚胎發育所需之氣體 交換。
每隻母蜥產下的卵隨機放置於四組溫度之下，且每組溫度至少有一顆卵。捕 回之雌草蜥以觸診方式檢驗是否懷卵，將母蜥單獨置於 21×12×12 cm (長×寬×高) 的飼養箱中，並給予產卵時所需的基質。前置實驗發現，兩種草蜥於產卵基質的 需求不同，臺灣草蜥只需潮濕水苔，而雪山草蜥則需於飼養箱底部鋪上 1～3 cm 的潮濕泥土，並在土表覆上一層潮濕水苔做為產卵基質。
根據經驗，雌蜥皆於白天時產卵，因此將檢查有無產卵的時間設定於白天，
固定於 1:00 pm 及 7:00 pm 兩個時段查看。取卵時記錄時間、測量卵重及雌蜥吻
肛長、體重。移動卵時維持原向上的一面朝上，將卵埋入潮濕蛭石內，約 1/2 露 出在外，並蓋上有通氣孔的蓋子，每一顆卵單獨置入一孵化罐內，放入恆溫箱中 進行實驗。孵化期間，為了避免干擾次數過於頻繁，每星期記錄一次卵吸水所增 加的重量，同時加水使基質維持溼度的恆定。
由於無法確定幼蜥孵出的時間，在預計孵化的前十天起，每天四次 (1:00 am、7:00 am、1:00 pm 及 7:00 pm)檢視孵化情形，以期準確地掌握幼蜥的孵化時 間。孵化後記錄孵化時間、測定幼蜥體重、吻肛長，用以比較不同孵化溫度下的 孵化期長短以及幼蜥表型。幼蜥孵出後所剩餘的卵殼以及其內容物陰乾至恆重，
測量並記錄剩餘卵的乾重，用以比較不同孵化溫度之下，胚胎對卵黃的利用情 形。若孵化過程中，卵有嚴重脫水、發霉或呈褐色的現象，則判定其為死亡，待 全數卵孵化完畢後計算孵化率。
幼蜥置於室溫 25℃環境下的飼養箱中，給予 2 瓦燈泡供其自由選溫，設定 光週期為 12 小時白天，12 小時黑暗；供給飲水及麵包蟲、蟋蟀。每週測量一次 體重，每兩週測量吻肛長變化以避免頻繁干擾，以體重及吻肛長增加率檢視成長 情況。飼養三個月，記錄其存活率。
(2) 半自然圈養實驗
圈養場選擇建立於臺北市立動物園內，因為此地位於低海拔、不易受到人為 干擾，且有臺灣草蜥出現的紀錄，為其分布以及生存的環境。實驗物種除了雪山 草蜥以外，並加入臺灣草蜥，做為檢視此人工圈養環境是否合宜的指標。每一個 圈養場以四塊鐵板圍成，長寬高分別為 3 m、3 m 及 0.6 m，如圖一所示，鐵板底 部埋入土裡約 15 cm。上方覆以塑膠網，防止鳥或蛇類等天敵捕食。圈養場中放 置木頭、石塊與落葉，使棲地多樣化。三個圈養場放入雪山草蜥雌蜥，另三個圈 養場放入臺灣草蜥雌蜥，每個圈養場中皆有 10 隻雌蜥，六個圈養場共放入 60 隻雌蜥。供給足量飲水及麵包蟲或蟋蟀。使雌蜥於圈養場中自由選擇巢位產卵，
每天巡視一次有無新生窩卵，記錄每窩卵個數並標示產卵位置，於數個產卵位置 放置溫度記錄器 (HOBO® U12-006-04, Onset Computer Company, USA)，記錄每 天巢位的土溫變化。
草蜥卵於原產卵位置孵化，每天巡視一次已標示的窩卵，檢查有無幼蜥破 殼，用以計算孵化天數及孵化率，同時捕捉新生幼蜥測定其體重以及吻肛長。為 了使實驗環境更加趨於相似，將一圈養場隔成兩半，孵出之兩種草蜥幼蜥各約 20 隻給予剪指標記，移至同一圈養場的兩半部圈養三個月。給予充足食物及飲 水，每週測量一次體重變化，每兩週測量吻肛長變化，用以檢視成長情況。記錄 三個月內圈養場中幼蜥的存活率。
四、 統計分析
(1) 恆溫孵化實驗
以複邏輯迴歸 (multiple logistic regression)分析孵化溫度對兩種草蜥的孵化 率及孵出幼蜥三個月存活率的影響，並以所得之公式預測有最佳孵化率或幼蜥存 活率的孵化溫度。將孵化天數的倒數做為發育平均速率，以孵化溫度及發育速率 做線性迴歸分析 (linear regression)，可以藉由有效積溫法則找出兩種草蜥所需的 有效積溫以及發育起點溫度，並嘗試以多項式迴歸分析 (polynomial regression) 檢視孵化溫度與兩種草蜥發育速率的其他可能關係。以變異數分析 (two-factor ANOVA with nested measures on one factor)檢測孵化溫度對兩種草蜥的幼蜥體 重、幼蜥吻肛長及剩餘卵重量的影響。以變異數分析 (two-factor ANOVA)檢測孵 化溫度對兩種草蜥幼蜥早期成長率的影響，由於實驗後期存活之個體較少，早期 成長率以兩種草蜥第六週時的體重或吻肛長相對於出生時的體重或吻肛長的增
加率來計算 ( 100%
mass Initial
mass Initial - sixth week of
Mass × )。
(2) 半自然圈養實驗
將一圈養場視為一單位，以變異數分析 (nested ANOVA)檢測兩種草蜥孵化 天數的差異。以卡方分析 (Pearson’s Chi-square)檢測兩種草蜥以下項目的差異：
總卵窩數、總卵個數、孵化率、孵出幼蜥的尋獲率、第12週的幼蜥存活率以及產 卵位置有無覆蓋物的比例。孵化率計算方式為，觀察到卵為正常破殼的個數佔卵 總數的比例。尋獲率計算方式為，尋獲的幼蜥數量佔正常破殼卵數的比例。產卵 位置有無覆蓋物的標準為，卵窩上方有落葉、石塊、木板或埋於土下，即為有覆 蓋物；若於土表或草根附近，可直接目視者，判定為無覆蓋物。以變異數分析 (ANOVA)兩種草蜥幼蜥早期成長率的差異，由於實驗後期存活之個體較少，早 期成長率以兩種草蜥第五週時的體重或吻肛長相對於出生時的體重或吻肛長的 增加率來計算，公式與恆溫孵化實驗相似。以上數據皆以統計軟體JMP 5.0 (SAS) 以及SAS 9.1分析。
