行政院國家科學委員會專題研究計畫 期中進度報告
TGF-βs, TG2, Apoptosis, GFAP, NF, P substance 和 Dopamine 參與鼠腦部犬蛔蟲症神經系統病變之分子免疫病
理機制之研究(1/2)
計畫類別： 個別型計畫
計畫編號： NSC94-2320-B-038-025-
執行期間： 94 年 08 月 01 日至 95 年 07 月 31 日 執行單位： 臺北醫學大學寄生蟲學科
計畫主持人： 范家范 共同主持人： 蘇霩靄
計畫參與人員： 范家堃； 蘇霩靄 高定昌 廖建維
報告類型： 精簡報告
報告附件： 出席國際會議研究心得報告及發表論文 處理方式： 本計畫可公開查詢
中 華 民 國 95 年 5 月 26 日
行政院國家科學委員會專題研究計畫期中報告
計畫名稱： TGF-β s , TG2, Apopt os i s , GFAP, NF, P s ubs t a nc e 和Dopamine參與鼠腦 部犬蛔蟲症神經系統病變之分子免疫病理機制之研究(1/2)
計畫類別：個別型計畫
計畫編號： 94-2320-B-038-025
執行期間：94.08.01-95.7.31
計畫主持人： 范家堃 副教授
共同主持人： 蘇霩靄 副教授
執行單位： 臺北醫學大學寄生蟲學科
成果報告類型(依經費核定清單規定繳交)：■期中報告 □期末報告
中 華 民 國 九十五 年 五 月 二十九 日
行政院國家科學委員會專題研究計畫期中報告
計畫編號：94-2320-B-038-025
執行期限：94 年 8 月 1 日至 95 年 8 月 31 日
主持人：范家堃 副教授 單位名稱：臺北醫學大學寄生蟲學科 共同主持人：蘇霩靄 副教授 單位名稱：臺北市立萬芳醫院消化內科
一、摘要
本計劃欲以兩年時間探討細胞激素轉型生長因子、組織麩胺酸轉胺脢、神經傳導化學物 質與細胞凋亡(apoptosis)於神經性犬蛔蟲症病變中的基因與蛋白質層次的表現情形，以探究
「腦部犬蛔蟲症之神經系統病變」之分子免疫病理機轉。
每個實驗組包含5隻感染鼠與2隻未感染控制組鼠。鼷鼠感染約250-300個犬蛔蟲感染性蟲 卵(約11個月齡)後，於第3天、第7天、第28天、第56天、第84天與112天，以乙醚深度麻醉後，
用心臟採血至死亡後，摘取腦部，將腦部分成4部分：第1部分腦部組織用以進行「幼蟲回收 實驗」，以確認幼蟲是否成功入侵小鼠腦部；第2部分腦部組織包埋成蠟塊，以製作成切片，
用以進行「組織病理染色與判讀」和「組織免疫化學染色」研究；第3,4部分腦部組織則以液 態氮儲存，用以進行「RT-PCR」和「Western blotting」分析，以探究TGF-βs、TG 2、apoptosis、
NF、GFAP、Substance P 和DP於基因與蛋白質層次的表現情形。
目前初步的結果顯示：腦屏蔽通透組(BBB Gr.)和腦屏蔽功能損傷組(Injury Gr.)實驗鼷鼠 於感染犬蛔蟲蟲卵後，於第3天、第7天、第28天與第56天以乙醚深度麻醉心臟採血致死後，
取出腦部進行腦屏蔽通透和腦屏蔽功能損傷分析。BBB Gr.鼠自尾部靜脈打入Evans blue後1 小時進行解剖，取出腦部後以1ml PBS於冰上研磨後，加以離心將上清液置於96孔微量滴定盤 中於595 nm下檢測吸光值，每組共7隻鼠進行檢測(duplicate/mouse)，結果顯示自感染後第3天 至第56天感染組鼠吸光值皆較控制組高(P < 0.001)；離心後之腦部沈積物進行幼蟲回收計數，
結果顯示：於感染後第第28天與第56天可自腦部看到幼蟲。以上結果顯示犬蛔蟲幼蟲入侵腦 部後的確可導致腦屏蔽通透性增加。由腦屏蔽功能損傷指標Ratio of CSF/serum albumin的數值 於感染後第7天與第56天皆較未感染組高(P < 0.001)，顯示受感染的小鼠腦屏蔽發生損傷；組 織病理切片顯示：第3與第4腦室之脈絡叢(choroid plexus)可見犬蛔蟲幼蟲入侵，但並不見發炎 反應。組織免疫化學染色顯示各種腦部細胞皆可見TGF-β1的表現，而只有astrocyte可見明顯 的GFAP的表現，而S100於各種腦部細胞皆可見，顯示被幼蟲入侵的脈絡叢(choroid plexus)週 邊腦組織發生astrogliosis現象。西方墨點分析顯示：不論TGF-β1、GFAP和S100皆較未感染的 控制組鼠相對高1.5至4倍 (P < 0.001)。
結果與討論
壹、感染後第 28 天(A)與第 56 天(B)鼠腦部病變，幼蟲(箭頭)侵犯脈絡叢(choroid plexus)
A
B
貳、感染鼠腦屏蔽通透性於感染後第 3、7、28 與第 56 天皆較控制組高(P < 0.001)。此外於感染後第 28 天開始可見入侵腦部的幼蟲。
0.30 0.60.9 1.21.5 1.82.1 2.42.73 3.33.6 3.94.2 4.54.8 5.15.4 5.76 6.36.6 6.97.2 7.57.8 8.18.4 8.79 9.39.6 10.29.9 10.510.8
3 7 28 56 Ctrl
Days after infection
OD595nmorno.oflarvaerecovered
OD 595 nm value Recovery of larvae
** ** ** **
參、感染鼠於 CSF 中 total protein 於感染後第 3、7、28 與第 56 天皆較控制組高(P < 0.05)。而血清中 total protein 於感染後第 3、28 與第 56 天皆較控制組高(P < 0.05)。顯示鼠腦屏蔽受損。
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
3 7 28 56 Ctrl
Days after infection
T o ta l p ro te in co n ce n tr at io n s (g /D L )
CSF TP Serum TP
*
** **
**
** ** **
肆、感染鼠於 CSF 中 albumin 於感染後第 7 與第 56 天皆較控制組高(P < 0.05)。而血清中 albumin 則只於感染後第 3、天皆較控制組高(P < 0.05)。
顯示鼠腦屏蔽受損。
0 1 2 3 4 5 6 7 8
3 7 28 56 Ctrl
Days after infection
Albuminconcentrations(g/dL)
CSFAlb SeraAlb
*
*** **
伍、感染鼠於 CSF/serum 中 albumin 比值於感染後第 7 與第 56 天皆較控制組高(P < 0.05)。而 CSF/serum 中 total protein 比值於感染後第 7 與 第 28 天皆較控制組高(P < 0.05)。顯示鼠腦屏蔽受損。此外於感染後第 7 天開始即可見入侵腦部的幼蟲且隨感染時間增加而增加。
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7 7.5 8 8.5 9 9.5 10
3 7 28 56 Ctrl
Days after infection
Ratio/1000orno.oflarvaerecovered
Ratio CSF/serum albumin Ratio CSF/serum protein Larvae recovered from brain
**
** *
**
陸、感染後第 28 與第 56 天鼠腦部可見明顯 TGF-β1 表現。
柒、感染後第 28 與第 56 天鼠腦部可見明顯 GFAP 表現。顯示腦部出現 astrogliosis 現象，此意味腦部受到損傷後的自我修復現象。
捌、感染後第 28 與第 56 天鼠腦部可見明顯 S100 表現。顯示腦部受到損傷。
玖、感染後第 3、7、28 與第 56 天鼠腦部 TGF-β1、GFAP 和 S100 西方墨點分析顯示：感染後第 28 與第 56 天此 3 項蛋白質明顯較控制組異 常增加。
