圖1.是nabumetone和testosterone的PFPH-衍生物在正、負離子APCI條件 下所得到的質譜圖，由圖中看來，PFPH-衍生物無論在正、負離子APCI下都可 以得到不錯的離子訊號。在正離子APCI下，nabumetone-PFPH和
testosterone-PFPH生成訊號很強的[M+H]+離子(圖1. (a), (c))，顯見PFPH-衍生物 具有不錯的質子親和力，此[M+H]+ 的準分子離子亦確認了PFPH-衍生物的存 在。在負離子APCI下，nabumetone-PFPH和testosterone-PFPH主要生成 [M-20]-的離子，參考文獻上有關pentafluoropropioic 衍生物在傳統ECNCI的結果，我
們推測此[M-20]-的離子可能是由PFPH-衍生物進行解離式電子捕捉反應，先生
成[M]–後再脫去一HF分子而得到[M-HF]-的離子圖2. 是nabumetone-PFPH及 testosterone-PFPH在選擇離子偵測模式下的偵測極限，其中nabumetone-PFPH的 偵測極限約 0.5 pg (m/z 388)而testosterone-PFPH的偵測極限約 1.0 pg (m/z 448)。
PFPH-衍生化不僅引入電子捕捉基團到分析物的結構上，同時亦引入了高質
子親和力的官能基到分析物的結構上，我們在動相中加入1 mM的甲酸以促進
PFPH-衍生物在正離子APCI下的質子化反應，同時並測試其在正離子APCI下
的偵測極限。表1.列出了未衍生nabumetone、testosterone及其PFPH-衍生物在
不同模式下，我們所測得的偵測極限。比較PFPH-衍生物在負離子APCI下和未 衍生分析物在正離子APCI下的偵測極限，nabumetone-PFPH/APCI-比
nabumetone/APCI+低了近300倍而testosterine-PFPH/APCI-比testosterone/APCI+ 低了近25倍。和未衍生分析物在正離子ESI下的偵測極限相比，
nabumetone-PFPH/APCI-比nabumetone/ESI+低了近30倍而
testosterine-PFPH/APCI-比testosterone/ESI+低了近5倍。PFPH-衍生物在正離子 APCI下的偵測極限約比PFPH-衍生物在正離子APCI下的偵測極限高了約3倍， 設定為m/z 388>164，其中在5 ng/ml的濃度時，可看出nabumetone-PFPH的結 構異構物被層析管柱分開為兩支訊號峰(圖3. (b))，方法的偵測極限可達0.1 ng/ml(圖3. (c))，同時以分析物面積對添加濃度製作標準曲線，在0.1-12.5 ng/ml 的範圍得到不錯的線性關係。圖4. 是分析血漿中testosterone的質量層析圖(m/z 448>448)，在澧度12.5 ng/ml時可見到testosterone-PFPH的異構物被分開成為兩 支訊號峰分別在8.8 min及9.4 min的滯留時問，圖4. (d)是我們所使用空白血漿 的質量層析圖，在8.76 min及9.4 min測得兩支訊號峰，其中8.76 min的訊號可 能主要來自內生性的干擾物，而9.4 min的訊號則可能是來自內生性的
testosterone。我們以9.4 min訊號峰的面積對所外加的testosterone濃度製做標準
曲線，在0.1-12.5 ng/ml的範圍亦得到不錯的線性。
四、計畫成果自評
1. 合成nabumetone和testosterone的PFPH-衍生物(hydrazones)在負離子APCI下 可進行電子捕捉反應生成[M-20]-離子，在正離子APCI下亦可進行一般的質子 化反應生成[MH]+離子。
2. nabumetone和testosterone的PFPH-衍生物(hydrazones)在負離子APCI下的偵 測極限約0.5 -1 pg，在正離子APCI下的偵測極限約1.6 -3.3 pg。
五、參考資料
1. A. P. Bruins, Trends Anal. Chem., 1994, 13, 37.
2. S. Bajic, D. R. Doerge, S. Lowes, and S. Preece, Am. Lab., 1993, 25(2), 40B.
3. R. A. Zubarev, D. M. Horn, E. K. Fridriksson, N. L. Kelleher, N. A. Kruger, M. A.
Lewis, B. K. Carpenter, F. W. McLafferty, Anal. Chem., 2000, 72, 563.
4. R. King, R. Bonfiglio, C. Fernandez-Metzler, C. Miller-Stein, T. Olah, J. Am. Soc.
Mass. Spectrom., 2000, 11, 942.
5. S. Terabe, K. Ishikawa, K. Utsuka, A. Tsuchiya and T. Ando, Proceedings of the 26th Internal
Liquid Chromatography Symposium, Kyoto, Jan. (1983) 25-26.
6. Legrand, C.; Dousset, B.; Tronel, H.; Belleville, F.; Nabet, P. J. Chromatogr. B, 1995, 663, 187-192.
7. Choi, M. H.; Chung, B. C.; Kim, M.; Choi, J.; Kim, Y. Rapid Commun. Mass Spectrom. 1998, 12, 1749-1755.
MH
+(a) Nabumetone-PFPH in positive APCI.
(b) Nabumetone-PFPH in negative APCI.
(c) Testosterone-PFPH in positive APCI.
(d) Testosterone-PFPH in negative APCI.
300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 m/z 0
100
%
poslinear034 111 (1.163) Scan AP+
4.94e6
poslinear032 122 (1.277) Scan AP+
3.26e6 469
470
testo-pfph
320 340 360 380 400 420 440 460 0 m/z
100
%
poslinear028 287 (2.993) Scan AP-
2.42e6
poslinear029 370 (3.856) Scan AP-
6.93e5
-0 .5 -0 1 .0 0 1 .5 0 2 .0 0 2 .5 0 3 .0 0
圖2. Nabumetone-PFPH及testosterone-PFPH之負離子 APCI偵測極限(SIM mode)，(a) nabumetone-PFPH、 (b) testosterone-PFPH。
0.1 ppb 5 ppb
blank
6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 Time
82
0.1 ppb 5 ppb
blank
6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 Time
82
3.33 pg 1 pg
Testosterone-PFPH
5 pg 25 pg
Testosterone-STD
1.67 pg 0.5 pg
Nabumentone-PFPH
15 pg 150 pg
Nabumentone-STD
ESI+ APCI+
APCI
-表1. 未衍生藥物及其PFPH-衍生物在不同離子化模式下之偵測極限。