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二、 背景與理論介紹

2.1 液相層析儀

2.1.1 液相層析儀器裝置

2.1.1.6 偵測器

液相層析儀的檢測器有兩種類型。第一種是總體積性質偵測器 (bulk property detectors),可以感應移動相的折射系數、介電常數或是密度等性 質。另一種是溶質性質偵測器 (solute - property),只會偵測溶質的 UV 吸收 值、螢光值或是擴散電流值等不受移動相所影響之性質。表 2-1 列出液相層 析儀常使用的偵測器及其性質。

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資料來源:參考自製造商文件;Handbook of Instrument Techniques for Analytical Chemistry, F.

Settle, ed., Upper Saddle River, NJ: Prentice-Hall, 1997;E. S. Yeung and R. E. Synovec, Anal. Chem., 1986, 58, 1237A.

a質量 LOD (偵測極限)受到化合物種類、儀器類型,以及 HPLC 操作條件等各項所影響,但是

在其中所列舉出的數值是,目前市售系統所能達到的一般數值

b其一般性數值來自上述之參考文獻

(1) 紫外線-可見光吸收偵測器 (UV-Vis absorbance detector)

一般紫外線-可見光偵測器的容槽為 Z 字形。圖 2-5 所示是紅外線吸收 值偵測器,為了將通過管柱後沖提物之擴散現象降到最低,此種容槽之體 積必頇盡可能的維持很小的體積量。一般體積量在 1 至 10 μl 之間,而容 槽的光徑約在 2 至 10 mm 之間。

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圖 2-5 可見光-紫外光偵測器容槽示意圖[2]

層析圖譜是以時間函數關係將吸收值繪製成的圖形。早期的 UV 吸收 值偵測器是以汞燈為光源的濾光片型光度計。大多數的偵測器會使用濾光 片分離出 254 nm 的強烈圖譜,某些儀器也可替代濾光片濾出 250、313、

334 與 360 nm 譜線。這種偵測器受限於這些波長中的其一波長處,某些儀 器是雙波長型的裝置,它們也配有數種濾光片的濾光片轉輪,可以快速的 切換,以便於偵測不同的沖提物種。現今,液相層析儀的廠商由光柵光學 元件組成之掃描式分光光譜儀所構成的偵測器,部分僅能使用在紫外光範 圍,部分則是可涵蓋紫外光至可見光的範圍。

(2) 紅外線吸收值偵測器 (IR absorbance detector)

市面上有兩種紅外線偵測器,一種是濾光片型儀器,另一種是類似於 傅立葉轉換儀器 (FTIR),需使用氯化鈉或是氟化鈣作為窗片的材質。紅外 線的容槽類似於此外線的容槽,光徑長度在 0.2 至 1.0 mm 之間,體積約 在 1.5 至 10 μl 之間。

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使用紅外線偵測器的缺點在於,許多使用的溶劑穿透率都很低,並且,

除非使用的是特殊的窗片材質,否則使用水性的移動相很快就會導致窗片 惡化的情形。當質譜儀開始被作為液相層析儀的偵測器時,此方法應用以 減少了許多。

(3) 螢光值偵測器 (Fluorescence detector)

螢光值偵測器是將光電偵測器置放於與激發光束呈現為 90° 的位置

(4) 折射系數偵測器 (Refractive index detector,RI)

折射系數偵測器對所有的溶質幾乎都有感應性。它們的優點是具有可 信度與不會受到流速影響,但它們是高溫度靈敏性的,因此必頇將溫度維 持在一定的溫度,溫度的變動不可以超過攝氏千分之一。折射系數偵測器 的缺點是靈敏度會比大多數的偵測器來得差,並且也無法使用梯度沖提。

大多數被使用在醣類的偵測。

(5) 蒸發式光線散射型偵測器 (Evaporative light scattering detector,

ELSD)

在液相層析儀中,蒸發式光線散射型偵測器是一種較新型的檢測器。

首先經過管柱的沖提物會流入噴霧器中,被氮氣轉化為細霧狀,然後細微 液滴會被導入經溫控的噴出管,使移動相產生蒸發現象。之後分析物顆粒 的雲霧穿過一束雷射光束中,在與移動相成垂直位置使用矽二極體偵測所

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散射之輻射量。此偵測器的優點為對所有非揮發性的溶質都具有感測性,

且靈敏度優於折射偵測器,偵測極限約為 0.2 ng/μg。其缺點是移動相只能 使用揮發性鹽類。

(6) 電化學偵測器 (Electrochemical detector,EC)

電化學偵測器是以電流法、伏安法、庫倫法與電導法為基礎。只要是

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