一、肝臟生化值分析
本研究利用 CCl4誘導小鼠肝纖維化，CCl4在肝臟代謝過程中，
會形成攻擊肝臟組織的自由基，造成肝臟的受損和發炎，進一步使得 肝臟儲存的酵素釋放到血液中，因此測定儲存於肝臟中較高含量的
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AST、ALT 就能對應肝臟的受損程度。在採集小鼠的血液後，測得經 由 CCl4組的小鼠與控制組相比較，其 AST、ALT 在血漿中的含量有 顯著上升的趨勢，在本研究中 HJE 的投與，能夠顯著的降低小鼠血 中 AST、ALT 的的表現 (Fig.1, Fig.2)。
二、Hydroxyproline 含量測定
在 CCl4誘導小鼠肝纖維化實驗中，單純投與 CCl4組別和控制組 相比，其肝臟 hydroxyproline 的含量有顯著上升，而在給予 HJE 之後，
在 HJE 低劑量 400 mg/kg 和高劑量 1200 mg/kg 上，hydroxyproline 在 肝臟的含量和 CCl4組相較都有顯著降低，分別下降約 25%以及 30%
(Fig.3)。
三、肝臟脂質過氧化產物分析
CCl4誘導小鼠肝纖維化實驗中，結果顯示 CCl4組脂質過氧化產 物和控制組相比，有顯著的增高。在給予 HJE 後，低劑量 400 mg/kg 和高劑量 1200 mg/kg 組別中，相較 CCl4組，脂質過氧化產物都有顯 著的降低(Fig.4)。
四、肝臟病理切片的分析
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由 CCl4 誘導小鼠肝纖維，經由蘇木青及伊紅染色，觀察在投與 四氯化碳組中，其肝臟組織與控制組相比，浸潤及壞死的程度有顯著 的差異。而在給予 HJE 低劑量和高劑量組中，就其組織壞死的程度 而言，能觀察到肝臟受損的情況有較為改善(Fig.5)。
在膠原蛋白染劑天狼星紅染色後，利用 Image-Pro plus 軟體進行 分析，比對肝纖維化及膠原蛋白分佈的情形。可發現四氯化碳組與控
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而活化相關發炎路徑。在組織 RT-PCR 的結果中顯示，給予 HJE 後 可降低經由 CCl4造成 CD14 及 TNF-α mRNA 的表現。肝臟巨噬細胞
(庫氏細胞) 活化聚集也會直接造成肝臟星狀細胞的分化和增生，造 成 α-SMA、膠原蛋白和細胞外基質的堆積。HJE 的給予能降低庫氏 細胞生物標記 CD68 及單核球趨性蛋白(MCP-1)在肝組織中的 mRNA 表現。此外還降低了星狀細胞α-SMA 的表現，因此可以推斷 HJE 能 降低 CCl4誘發小鼠肝臟纖維化程度的產生 (Fig.8, Fig.9 )。
六、一氧化氮(Nitric Oxide, NO)檢測分析結果
巨噬細胞在遭受外來物如毒性物質、藥物或抗原時會活化並產生 發炎反應。本實驗中以 LPS 誘發小鼠巨噬細胞株 RAW264.7 的急性 發炎，並造成 NO 的釋出。在檢測結果中，單純給予 LPS 組與控制 組相比，其 NO 的濃度有顯著的上升。而分別從 HJE 乙醇初萃物、
BuOH 分層、EtOAc 分層和 HJE-EA13 中發現各分層的 IC50 分別是 1 μg/ml, 200 mg/ml, 120 mg/ml 及 50 mg/ml。HJE-EA13 是其中最能顯著 抑制 NO 釋放的分層。藉由 HJE-EA13 三種不同濃度(15、30、50 μg/ml) 的投予有明顯劑量關係並有效的降低其 NO 的釋出。顯示其藥物具有 抑制 RAW264.7 發炎的功能(Fig. 10, Fig. 11, Fig. 12) 。
33 七、MTS 存活率分析結果
MTS 的檢測結果，發現單純投予 HJE-EA13 不同濃度劑量後(最 高 50 μg/ml)，對 RAW264.7 並沒有造成死亡，顯示此藥物對細胞在 此劑量關係中並無細胞毒性 (Fig. 13)。
八、HJE 對 LPS 誘發 RAW264.7 NF-κB 蛋白表現之影響
RAW264.7 在加入 1 μg/ml LPS 培養 1 小時後，因為發炎現象的 產生而活化 NF-κB 訊息傳遞路徑，使得 NF-κ B P65/P50 蛋白表現大 量增加，給予 HJE-EA13 因抑制細胞發炎，及阻斷上游訊息傳遞路徑 而減少訊息傳遞因子 NF-κ B P65/P50 進入細胞核，進行之後的發炎 等免疫反應 (Fig. 14)。
九、HJE-EA13 對 LPS 誘發 RAW264.7 小鼠巨噬細胞株 iNOS 蛋白表 現之影響
iNOS 是由 Nitric oxide synthases (NOSs) 酵素合成系統所生成的 三種酵素之一，主要為發炎反應後所產生。RAW264.7 在加入 1μg/ml
LPS 培養 24 小時後，因為細胞發炎現象的產生而活化發炎訊息傳遞 路徑產生 iNOS。給予 HJE-EA13，因抑制細胞發炎而直接抑制 iNOS 蛋白的表現 (Fig. 15)。
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