3-1 實驗藥品
藥品名稱 來源 備註
幾丁聚醣(Chitosan, CS) Aldrich 去乙醯度由 1H NMR 測得 為 79.7%，平均分子量為 215.8K，黏度為 286 cps 冰醋酸(Acetic Acid) TEDIA 99.97 %
醋酸鈣 Aldrich Ca(CH3COOH)2 磷酸 Riedel de-Haën H3PO4
氨水 Riedel de-Haën 25 %
三 聚 磷 酸 鹽
(Tripolyphosphate,TPP)
Sigma
Vitamin B12 Sigma Mw 1355 聚丙烯酸
(Polyacrylic acid,PAA)
Aldrich (CH2CHCOOH)n
Mw2000、Mw4500000
3-2 實驗步驟
3-2-2 CS-CDHA 奈米複合溶液的製備
將 CS 溶於 10%醋酸水溶液中，配成濃度為 1%CS 溶液，經 2 小時 攪拌均勻後，過濾雜質得 CS 溶液備用。CDHA 之鈣、磷前驅物為醋酸 鈣、磷酸，將其濃度分別配製成 0.25M、0.167M 備用(Ca/P 比＝1.5)。
CS-CDHA 奈米複合材料製備方法分為 in-situ 與 Non-in-situ 聚合。
在 in-situ 聚合部分，可分為兩種程序，程序 A 中，先將 CS 溶液加 入磷酸溶液中，最後加入醋酸鈣溶液；於程序 B，CS 溶液加入醋酸鈣 溶液，最後才加入磷酸溶液。在 Non-in-situ 聚合之程序 C，則是先 使醋酸鈣溶液、磷酸溶液反應合成 CDHA 後，再加入 CS 溶液。在這三
薄膜
滲透實驗
＊傅立葉轉換紅外線光譜儀分析(FTIR)
＊X 光繞射分析(XRD)
＊熱重分析儀(TGA)
＊動態機械性質分析(DMTA)
＊掃描式電子顯微鏡(SEM)
＊穿透式電子顯微鏡(TEM) 實驗第一部分 實驗第二部分
種製備方法中，在每個添加溶液階段，都將 pH 值調至 9，最終 pH 值 為 9 使其共沉，得到 CS-CDHA 奈米複合溶液。接著選擇程序 A 之製程，
藉由改變不同 CS 溶液的含量，得到不同比例之 CS-CDHA 奈米複合溶 液。
3-2-3 CS-CDHA-PAA 奈米複合溶液的製備
在此部分中，為改變 CS-CDHA 界面而添加 PAA 溶液，先合成 CDHA-PAA 複合材料最後才加入 CS 溶液，形成 CS-CDHA-PAA 奈米複合 溶液，在合成 CDHA-PAA 複合材料時，也分為 in-situ 與 Non-in-situ 聚合，於程序 D(in-situ 聚合)，先將 PAA 溶液加入醋酸鈣溶液中，
再加入磷酸溶液，先合成 CDHA-PAA 複合材料，最後再加入 CS 溶液；
程序 E(Non-in-situ 聚合)，則是先合成 CDHA，再加入 PAA 溶液，最 後加入 CS 溶液即成。在此部分變數，為不同 PAA 溶液濃度、PAA 分 子量。
3-2-4 薄膜的製備
配製好上述溶液後，使其攪拌均勻，調整好其固/液比例，取溶 液 25 克倒入直徑 9 公分塑膠培養皿中，平放於通風櫥櫃中使其水分 揮發，待 7 天後，將薄膜撕下得之。
3-2-5 藥物擴散實驗 3-2-5-1 事前準備
薄膜前處理：將製備好的薄膜浸置於 10%TPP 溶液中，待交聯 20 小時後取出，以去離子水清洗 3 次，將殘存的 TPP 溶液除去，靜置乾 燥 12 小時後待用。
檢量線的量测：配製不同已知濃度的維他命 B12 溶液，測其吸收 度 之 改 變 ， 以 藥 物 濃 度 對 吸 收 值 作 圖 求 得 檢 量 線 ( 線 性 回 歸 值 R2>0.99)。
3-2-5-2 滲透實驗
將交聯後的薄膜架於擴散槽上(如圖示)，於兩邊的擴散槽分別加 入 90 毫升的 PBS 溶液以及維他命 B12 溶液(0.2 毫克/毫升)，每隔 15 分鐘、連續測 6 小時，取出 PBS 溶液，以 UV 測量其吸收度，紀錄數 值，利用檢量線換算為藥物濃度，繪圖得其擴散曲線，利用公式求其 滲透係數。
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晶相結構、確認無機相 CDHA 之存在。使用的儀器為 MAC Science M18XHF，操作條件為：以銅靶(Cu，λkα1=1.5405Å)為 X 光源，操作電 壓為 50 kV，操作電流為 100 mA，掃描範圍(2θ)由 15°至 60°，掃描 速率為 4℃/min。
3-3-2 傅立葉轉換紅外線光譜儀分析(FTIR)
使用傅立葉轉換紅外線光譜儀(Fourier Transform Infrared Spectrometer)判斷複合材料有何官能基，取 100mg KBr 與 1-2mg 樣 品混合壓成錠，掃描範圍為 400 至 4000 cm-1，解析度為 4.00 cm-1， 掃描次數為 32 次。
3-3-3 熱重分析儀(TGA)
利用熱重分析儀(Thermogravimetry Analysis)判斷熱降解溫 度、反應相，使用儀器為 TA 2950，操作條件為：先於 30℃持溫 1 分 鐘後，以 10℃/min 的升溫速率至 900℃為止。
3-3-4 動態機械性質分析(DMTA)
利用動態機械性質分析儀器(Dynamic mechanical analysis)分 析玻璃轉換溫度、非晶區分子運動情況，使用儀器為 TA Q-800，操 作條件為：溫度範圍為-130 至 250℃，升溫速率為 3℃/min，頻率為 1Hz。
3-3-5 掃描式電子顯微鏡(SEM)
藉 由 場 發 射 掃 描 式 電 子 顯 微 鏡 (Field emission scanning electron microscope,FESEM)觀察試片表面以及截面狀況，實驗儀器 為 Hitach S-4000，操作電壓為 25 keV，操作電流為 10μA。
3-3-6 穿透式電子顯微鏡(TEM)
藉 由 Philips Tecnai 穿 透 式 電 子 顯 微 鏡 (Transmission electron microscope)觀測 CDHA 之分散情況以及粒徑大小，操作電 壓為 200 keV。