於 Nikon 解剖顯微鏡（Tokyo, Japan）下進行徒手切片（hand-sectioned），再作 內部結構觀察。標本切片及內部結構的觀察之前，以蘇木精
Japan）觀察之。在進行染色之前，將浸漬標本於鹵素燈下進行脫色，以利內部結 構染色觀察；當使用蠟葉標本時，染色前需浸泡於弱鹼性 1N NaOH 水溶液或清潔 液中 24 小時，使細胞吸水澎大，再進行染色觀察。詳細過程如下：
3.3.1 染劑材料的準備
Wittman’s hematoxylin stock solution（
（（（Wittmann, 1965）
）））材料準備：4g hematoxylin 粉末（注意:取適量裝入打開的瓶中，使其氧化作 為儲存溶液（stock solution））; 1g iron alum, FeNH4（SO4）2.12H2O; 100ml 45
％醋酸。
步驟：
1. 將 hematoxylin 粉末和 1g iron alum 到入瓶中；
2. 加入 45％100 ml 醋酸溶液使其粉末溶解；
3. 放置一到兩週使其成熟後即可使用。
Hematoxylin working solution
材料準備：6ml stock solution; 2g chloral hydrate 結晶體 crystals。
步驟：
1. 加入 6ml 的 stock solution 到 10ml 的離心管；
2. 在 13200 rpm 轉速下，離心 5-8 分鐘；
3. 利用 pipette 小心的將頂端 5ml 的 working solution 取出，不要混肴到底部 1ml 的混濁液，並將底部 1ml 的混濁液丟棄；
4. 將上部乾淨的 5ml 移入乾淨具有螺旋蓋的實驗管（test tube）；
5. 加入 2g 的 chloral hydrate 到 5ml 的 stock solution，並且搖晃使其充分混合；
6. 當所有的 chloral hydrate 完全溶解後，則此染劑便告完成。
備註：完成的 working solution 最佳使用期限為一週，因此完成好的 working solution 需盡量在一週內用完，否則進行染色時細胞質容易過黑，染色液
中也容易氧化產生黑色結晶。
Hoyer’s Mounting medium（
（（（Stevens, 1981）
）））材料準備：30g gum arabic 粉末，200g chloral hydrate 結晶體，16ml glycerine，50ml 蒸餾水。
步驟：
1. 將 Gum Arabic 粉末溶於蒸餾水中；
2. 加入 20g 的 chloral hydrate 結晶體來控制細菌的生長；
3. 靜置 solution 24 小時；
4. 加入 180g 的 chloral hydrate 結晶，並使其完全融解；
5. 再靜置 2-3 天；
6. 加入 glycerine 並充分混合；
7. 使用 Hoyer’s mounting medium 時，需用蒸餾水進行稀釋（50％ Hoyer’s solution，50％蒸餾水）。
3.3.2 染色步驟
Wittmann’s hematoxylin solution 染色法
染色法染色法（染色法（（（Coomans, 1986; Hommersand and Fredericq, 1997）
）））步驟：
除；
2. 添加 hematoxylin working solution （4g Hematoxylin power + 1 g FsSO4˙12H2O + 100ml45% Acetic acid）；
3. 依不同的藻體，染色時間需要 30 分鐘至 4 小時不等；
4. 添加 45% 醋酸去染色，在去染色期間，可再添加 hematoxylin working solution 重新染色，此過程為可逆步驟，直到得到最佳染色效果；
5. 經過去染色步驟，導入 Hoyer`s mounting medium，此 Hoyer`s mounting medium 能夠增強染色效果。根據藻體不同，此過程需要 1-2 小時或更長的 時間；
6. 強色過程之後，以 45%醋酸將 Hoyer`s mounting medium 洗去，染色的藻 體以數位相機（CoolPix 500）拍攝之，而顯微結構則以數位攝影器材（Pixera Penguin 600CL）配合 Automontage 軟體進行拍攝。數位影像以 Photoshop 6.0 軟體剪輯處理，最後以黑白或彩色雷射印表機輸出列印之。
第
析研究（圖六、表四），並自 GenBank 下載來自日本 25 種（Grateloupia asiatica、G. carnosa、G. catenata、G. chiangii、G. divaricata、G. elliptica、G. imbricata、G.
kurogii、G. lanceolata、G. livida、G. patens、G. sparsa、G. subpectinata、G. turuturu、
G. acuminata、Prionitis angusta、P. divaricata、P. elata、P. patens、P. ramossissima、
P. schmitziana、P. scrispata、Polyopes prolifera、P. polyideodes 和 P. lancifolus）、美 國 5 種（G. americana、G. filicina、Prionitis filiformis、P. lanceolatac 和 P. lyalii）、
義大利 1 種（G. filicina）、墨西哥 2 種（G. huertana 和 G. versicolor），南非 5 種（G.
capensis、G. filicina、G. longifolia、Prionitis nodifera 和 Polyopes constrictus）、澳洲 1 種（G. filicina var. luxurians），巴西 1 種的（G. dichotoma），秘魯 1 種（G.
doryphora），西印度 1 種（G. filicina）、波利尼西亞 1 種（G. filicina）、法國 1 種（G.
minima）、智利 1 種（G. schizophylla）， Berggren 1 種（G. stipitata）、西班牙 1 種
（G. filiformis），共 47 種屬於 Grateloupia、Polyopes 和 Prionitis 屬的相關序列，進 行 rbcL 親源關係分析。本分析並採用來自斯里蘭卡的 Halymenia floresia 和西班牙 的 Halymenia durvillei 作為分析的外群。RbcL 序列總長 1467 個核苷酸，由於 5´端 的前 60 個核苷酸在許多序列中有定序不完整的情形，因此在本研究的分析中排 除，只有 1407 個鹼基用於序列的分析（maximum-parsimony analysis；Bayesian analysis），其中有 412 個形質（characters）為具有意義訊息（informative characters）。