本實驗利用 AutoCAD 2010 設計光罩圖檔，設計兩組微流道結構，3D 結構 出入口端半徑 1.5 mm，中間流道寬 100 um，如圖 2-2-1 及圖 2-2-2，而承襲 2-1 節模擬結果推論，沉積血液處寬度縮小除了附載血液的量減少，分離血液的效果 並不會因此消失，所以有了 2D 結構的構想，首先確保拍攝螢光尺度能一致，過 濾出的微流道部分也是設計 100 um，如圖 2-2-3 及圖 2-2-4，並且在 2D 結構設計 一系列中間沉積血液分離部分能有不同尺度的容量，長度從 1 mm-5 mm 共 5 種 尺寸，深度也從 1 mm-5 mm 共 5 種尺寸，利用實驗數據得到此結構的分離血液 效果，建立出適用此 2D 結構的流速對照表。
圖 2-2-1、3D 微流道結構光罩圖。
圖 2-2-2、3D 微流道結構 OM 圖。
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上述兩種結構感測部分的微流道寬度皆為 100 um，差別在於操作方式以及 結構，3D 微流道結構如圖 1-2-7，為三層結構，利用重力於中間挖洞處沉積，而 2D 的概念則在於，結構的流道高度即為沉積血液處的寬度，因此造就整體 2D 結構在同一流道高度中完成，而其尺度極小，若看成忽略一軸，即為 2D 微流道 結構，而且本設計的製程較簡單，只有兩層結構，如圖 2-2-5。
圖 2-2-3、2D 微流道結構光罩圖。
圖 2-2-4、2D 微流道結構 OM 圖。
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圖 2-2-5、重力分離血液系統 2D 結構圖。
至於操作方式，兩者結構卻不盡相同，由於都以重力驅使血球與血漿分離，
因此結構中都有使血液進行沉積的空間，差別在於 2D 結構中必須將元件直立，
如圖 2-2-6，才可使血液流動時，依靠重力在經過此空間時，進行血液沉積進而 分離。
圖 2-2-6、2D 結構實景圖。
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(4) 玻璃-PDMS 接合
分別將經處理後的玻璃及 PDMS 要接合的面，進行氧電漿處理，氧電漿機 台型號 PCD 150 Plasma Cleaner 為在材料表面產生一些-OH 基，以提升表面 親水性及浸潤性，來增加表面接合度，首先通入 750 mtorr 氧氣，反應瓦數 為 50 W，時間為 2 分鐘，處理完畢後，將兩物接合並以重物加壓於溫度 90
℃維持 1-2 小時。
圖 2-3-1、旋光阻機。
表 2-3-1、SU8-2050 實驗參數。
(單位:分鐘)
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表 2-3-1、SU8-2050 實驗參數。
圖 2-3-2、SU8 厚度 SEM 圖。
圖 2-3-3、高解析度光罩直接對準曝光機。
32 (Thermoelectric Cooling Module)，以 LabVIEW 軟體程式控溫，介面如圖 2-4-5 而藉上下層壓克力以螺絲栓緊擠壓，造成適合水熱法生成的環境條件，接著 接以鐵氟龍管用微量注射器控制流速，流進誘導溶液使晶種生長氧化鋅奈米 柱結構，實驗參數為控溫於 65℃，流速 750 uL/hr，生長時間 30 分鐘，以此 參數生長之氧化鋅奈米柱，外觀形貌為針柱狀，可有效增加生物分子沾附的 表面積，並使感測效率提高。
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圖 2-4-1、氧化鋅 SEM 圖(X10,000)。
圖 2-4-2、氧化鋅 SEM 圖(X50,000)。
圖 2-4-3、氧化鋅 EDS(Energy Dispersive Spectrometer)圖。
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圖 2-4-4、生長氧化鋅奈米柱結構實驗裝置圖。
利用水熱法機制生長氧化鋅時，必須給予溫度，以轉換氧化鋅生長的能量，
本實驗利用 LabVIEW 軟體寫一套控溫的程式，如圖 2-4-5，藉著 Agilent e3646a 電源供應器施給電壓，如圖 2-4-6，透過程式調控參數，再外接至 TEC 板上，溫 度則直接反映於面板表面，在透過與鍍有 ZnO 晶種層的玻璃直接接觸，達到溫 度傳遞的效果，如圖所示，操作介面上在 Setpoint 處設定所欲調控的溫度，單位 為℃，Proportional 為 10，Integral 為 0.05，Derivative 為 0.001，設定完成後，於 操作介面中間座標處，橫軸為時間(秒)，縱軸為溫度(℃)，其中紅線為期望溫度，
本實驗預設為 65℃，綠線則為實際溫度，溫度會隨著時間逼近期望溫度，實驗 會在溫度達到期望溫度並且穩定時，才進行計時 30 分鐘，以此控制氧化鋅生長 的時間，以此參數製程氧化鋅結構可獲得最大的體表面積，有助於修飾上提升螢 光強度之目的。
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圖 2-4-5、LabVIEW 控溫程式介面。
圖 2-4-6、電源供應器。
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2-5 表面修飾 Biotin- Streptavidin
根據前幾小節，過濾血漿以及氧化鋅奈米柱結構，皆是為了使感測的靈敏度 提升，本研究利用的生物分子修飾為鍵結力強的 Biotin-Streptavidin，運用有接附 螢光的 Streptavidin 驗證，若分子間成功鍵結，利用螢光偵測原理便能以螢光顯 微鏡觀察螢光分子之激發光，並利用像素強度大小定義其螢光強度值，以下為實
(2) 修飾 APTES(Amino Propyl Triethoxy Silane)
以體積比 1：50 將 APTES 溶於去離子水當中，將清洗乾淨之玻璃試片浸泡
將有接合螢光(波長 546/488 nm)之 Streptavidin 溶於全血當中，其中全血的保 存是放置在含有 EDTA 抗凝血劑的紫頭管當中，如圖 2-5-1，EDTA 為乙二 胺四乙酸(C10H16N2O8)，EDTA 不會破壞血球結構，適合用來做為分離血液