圖 4.5 寒證氣喘組(CY5)vs熱證氣喘組(CY3)晶片影像
上排由左至右為 chip2 、 chip3 ,下排左至右為 chip4 、 chip5 。 雜合後呈色偏紅的點所對應的基因為寒證氣喘樣本表達較強的基因;
反之,呈色偏綠的點所對應的基因為熱證氣喘樣本表達較強的基因。
4.4 微陣列晶片數據分析
寒證氣喘組比對正常體質對照組的晶片數值經比對其比值大於 2 或小於 0.5 者的基因大於2800個 , 基因個數太大,故不列出。 t-test 檢定後,得到 P 值小於 0.05 者 170 個。(如表 4.7 所示;在第
66頁)。
在表 4.7 中所示的寒證氣喘組比對正常體質對照組有顯著差異 的表達基因共170 個,透過 internet 資料庫搜尋出 5 個基因(基因 編 號 Accession Number : X68550 、 NM 000284 、 M12824 、 L15006 、 Y15723 )及其調控路徑,其餘 165 個基因並未在此資 料庫中搜尋出相關路徑。 M12824 與alanine代謝路徑相關,表 4.8 列出與中醫寒證氣喘臨床表現的可能基因及其調控路徑。
表 4.8 寒證氣喘的可能基因及其調控路徑 Accession
Number 調控路徑 路徑說明
X68550 h asbcell pathway 由抗原活化B Cell h bbcell pathway B Cell 活化
h cd40 pathway CD40L 訊息傳遞路徑 h nkt pathway
h th1th2 pathway
在T-cell 的極化中選擇表達 chemokine receptors
Th1/Th2 的分化
M12824 h il17 pathway IL 17 訊息傳遞路徑
h shm pathway 藉cytokine 調節造血功能 h tcytotoxic pathway T Cytotoxic Cell 的表面分子 L15006 h ctla4 pathway T Cell 的活化訊息傳遞路徑 Y15723 h racc pathway 血管內皮系統的離子通道
其中 M12824 在寒證氣喘組基因表現量明顯高於正常體質對照 組; X68550 、NM 000284、 L15006 、 Y15723 在寒證氣喘組基
因表現量明顯低於正常體質對照組。
熱證氣喘組比對正常體質對照組比值大於2 的差異基因共80個
(如表 4.9 所示;在第71頁),比值小於 0.5 的差異基因共21個
(如表4.10 所示;在第73頁);經t-test檢定後表達上有顯著差異的 基因共266 個(如表 4.11 所示;在第11頁),透過 internet 資料庫 搜 尋 出17 個 基 因 ( 基 因 編 號 : AF090318 、 AF188747 、 NM 000362、 Y14768 、 NM 017617 、 NM 004530 、 M96577 、 NM 001324 、 AX023365 、 X93499 、 NM000734 、 L42542 、 NM 006267、 Y15723 、 U72649 、 AJ271408 、 X04688 )及其調控 路徑,其餘 249 個基因並未在此資料庫66 中搜尋出相關路徑。表 4.12 列出與熱證氣喘臨床表現的可能基因及其調控路徑;其中 NM 001324 、 X93499 、 NM000734 、 NM 006267、 AJ271408 、 X04688 在熱證氣喘組基因表現量高於正常 體 質 對 照 組 ; AF090318 、 AF188747 、 NM 000362 、 Y14768 、 NM 017617 、 NM 004530、 M96577 、 AX023365 、 L42542 、 Y15723 、 U72649 在熱證氣喘組基因表現量低於正常體質對照組(如表4.13 所示)。
表4.12 熱證氣喘的可能基因及其調控路徑
Accession Number
調控路徑 路徑說明
Y14768 h cdMac pathway 鎘金屬誘發DNA 合成 及macrophage 複製
h Lair pathway 與局部急性發炎反應相關 h cytokine pathway Cytokine Network
h inflam pathway Cytokines 及發炎反應 h il10 pathway IL-10 的抗發炎訊息傳導 h nthi pathway NFκB 活化
h nfkb pathway NFκB 訊息傳遞路徑
Y14768 h pml pathway 藉PML 調節轉錄的活化 h il1r pathway 藉IL 1 R 訊息轉譯
M96577 h g1 pathway 細胞週期:G1/S 限制點
h fbw7 pathway Cyclin E Destruction pathway: 細 胞週期G1/S 過渡相關
h cellcycle pathway 細胞週期G1/S 過渡相關
h skp2e2f pathway E2F1 Destruction pathway:轉錄因 子與細胞週期G1/S 過渡相關 h RacCycD pathway 細胞週期 G1/S 過渡相關
h p27 pathway 調節p27 磷酸化表現與細胞週期 G1/S 過渡相關
h il2rb pathway IL-2 Receptor Beta Chain: 活化 T cell
h ets pathway Macrophage 分化時上調 h CSK pathway T Cell Receptor 訊息轉錄
MN 000734 h ctl pathway Cytotoxic T lymphocytes (CTLs) 相關的免疫反應
h il17 pathway IL 17 訊息傳遞路徑
h il12 pathway Th1 中 IL 12 訊息傳遞路徑 h tob1 pathway 調節T Cell 的活化
h tcr pathway T Cell Receptor 訊息傳遞路徑 h tcytotoxic pathway T Cytotoxic 表面分子
h thelper pathway T Helper Cell 表面分子 AX023365 h inflam pathway Cytokines 及發炎反應
h dc pathway 藉 Dendritic cell 調控 TH1、TH2 的發展
h nkt pathway 在 T-cell 的 極 化 中 選 擇 表 達 chemokine receptors
h eosinophils
pathway 過敏反應中Eosinophils 的角色 表4.13 熱證氣喘組比對正常體質對照組顯著差異基因表現量 基因表現量
熱證氣喘 > 正常體質 熱證氣喘 <正常體質 NM 001324 AF090318
X93499 AF188747
NM000734 NM 000362 NM 006267 Y14768 AJ271408 NM 017617
X04688 NM 004530
M96577 AX023365 L42542
Y15723 U72649
寒證氣喘組比對熱證氣喘組比值大於2 或比值小於 0.5 的差異 基因共11個(如表 4.14 所示;在第82頁);經t-test檢定後有顯著差 異 的 表 達 基 因 共 137 個 ( 如 表 4.15 所 示 ; 在 第 83 頁 ) , 透 過 internet 資 料 庫 搜 尋 出 8 個 基 因 ( 基 因 編 號 : NM 004355 、 M96577 、 AJ293866 、 NM 006164、 M15330 、 AF147204 、 L13616 、NM 004417)及其相 關路徑(如表4.16 所示),其餘 129 個基因並未在此資料庫中搜尋 出相關路徑。
其中 L13616 、 AJ293866 、 M15330 、 AF147204 在寒證氣 喘 組 中 基 因 表 現 量 明 顯 高 於 熱 證 氣 喘 組 ; NM 004355、 M96577 、NM 006164、NM 004417在寒證氣喘組基因表 現量明顯低於熱證氣喘組(如表4.17 所示)。
表4.16 寒熱證型的可能基因及其調控路徑 Accession
Number 調控路徑 路徑說明
M96577 h g1 pathway 細胞週期:G1/S 限制點67
h fbw7 pathway Cyclin E Destruction pathwa:細胞週 期G1/S 過渡相關
h cellcycle
pathway 細胞週期G1/S 過渡相關
h skp2e2f pathway E2F1 Destruction pathway:轉錄因子
h il2rb pathway IL-2 Receptor Beta Chain:活化 T cell h ets pathway Macrophage 分化時上調
L13616 h CCR3 pathway
CCR3 signaling in Eosinophils h cxcr4 pathway CXCR4 訊息傳遞路徑
h pten pathway 細胞週期的阻斷及細胞凋亡 h ach pathway 調節細胞凋亡
h tff pathway 肌肉細胞修復
NM 004417 h vegf pathway 組織缺氧及血管內皮生長因子 h cd40 pathway CD40L 訊息傳遞路徑
h nthi pathway NFκB 活化
h tnfr2 pathway TNFR2 訊息傳遞路徑 M15330 h il5 pathway IL 5 訊息傳遞路徑
h nthi pathway NFκB 活化
h il1r pathway 藉IL 1 R 訊息轉譯 AF147204 h cxcr4 pathway CXCR4 訊息傳遞路徑
h Ccr5 pathway Macrophage 中 CCR5 訊息傳遞 h nkt pathway 在T-cell 的極化中選擇表達
chemokine receptors
表 4.17 寒證氣喘組比對熱證氣喘組顯著差異基因表現量比較 基因表現量
寒證氣喘 > 熱證氣喘 寒證氣喘 < 熱證氣喘
L13616 NM 004355
AJ293866 M96577
M15330 NM 006164
AF147204 NM 004417