日本鰻人工催熟實驗開始前,我們測量每隻鰻魚的體重。催熟實驗結 束後也分別再次測量其體重,並將其體重變化率分析後繪製成圖表 (Fig.
10)。由圖中可發現 Cilostazol (-4.8 ± 2.3%) 及 SPE +Cilostazol 轉 SPE 組 (-4.4 ± 7.4%) 體重下降最多;而 control (-2.4 ± 3.4%)、SPE (-2.0 ± 4.7%)、
SPE +Cilostazol (-1.6 ± 8.2%) 以及 SPE 轉 SPE +Cilostazol (-1.7 ± 3.0%) 組下降較少。
3.2.2 生殖腺 生殖腺 生殖腺 生殖腺體重 體重 體重指數與血糖濃度 體重 指數與血糖濃度 指數與血糖濃度 指數與血糖濃度
在生殖腺體重指數方面,SPE 轉 SPE +Cilostazol 組有顯著提升 (5.4 倍);SPE 組 (1.68 倍) 與 SPE +Cilostazol 轉 SPE 組 (1.11 倍) 有提升 (無 顯著差異)。而 Cilostazol 組 (0.55 倍) 與 SPE +Cilostazol 組 (0.83 倍) 則 低於 control 組 (無顯著差異) (Fig. 11)。
而血糖濃度方面,SPE +Cilostazol 組有高血糖的情況發生,其平均值 為 control 組的 1.52 倍 (Fig. 12)。
3.2.3 紅體 紅體 紅體 紅體體重 體重 體重 體重指數與眼重指數 指數與眼重指數 指數與眼重指數 指數與眼重指數
紅體指數方面,相較於 control 組,SPE +Cilostazol 組增加 1.72 倍、
SPE (1.6 倍) 及 Cilostazol 組 (1.17 倍) 皆有提昇,但無顯著差異 (Fig.
13)。
眼重指數方面,相較於 control 組,SPE +Cilostazol (1.37 倍)、SPE (1.34 倍) 及 Cilostazol 組 (1.31 倍) 皆有提昇,但無顯著差異 (Fig. 14)。 perinucleolus stage) (Fig. 16)。SPE +Cilostazol 組的卵則有明顯卵徑大小不 一的結果,其中較小的卵屬於周邊仁前期 (early perinucleolus stage),而 較大的卵則屬於卵黄胞期 (yolk vesicle stage) (Fig. 17)。SPE 組的卵較成 熟,已達到第一次卵黄球期 (Primary yolk stage) (Fig. 18)。SPE 轉 SPE +Cilostazol 組的卵發育較前四組好上許多,其卵已達第二次卵黄球期 (Secondary yolk stage) (Fig. 19)。而 SPE +Cilostazol 轉 SPE 組效果不若前 者佳,其卵多屬第一次卵黄球期 (Primary yolk stage) (Fig. 20)。由組織切
片的圖片可觀察到,施打 SPE 可使卵發育更成熟 (相較於 control 組);而 施打 Cilostazol 會抑制卵的成熟 (相較於 control 組);同時施打 SPE 與 Cilostazol 則使得卵成熟度差異大,卵徑大小不均。此外,SPE 轉 SPE +Cilostazol 組卵徑變大且卵發育更好;而 SPE +Cilostazol 轉 SPE 組的效 果則不如前者。
由圖表可以發現,與 control 組相比,施打 Cilostazol 會使卵面積分佈 向左移 (變小),顯示 Cilostazol 對卵巢成熟有抑制效果;而與 control 組 相比,施打 SPE 會使卵面積分佈向右移 (變大),顯示 SPE 對卵巢成熟有
促進效果。而 SPE +Cilostazol 組的卵面積分佈則有兩極化的趨勢。SPE 轉 SPE +Cilostazol 組的卵面積較前四組大上許多。而 SPE +Cilostazol 轉 SPE 組也會使卵面積變大,但效果不若前者佳。將上述結果整理成表 (表
Control 組最大卵徑為 280 µm,平均為 180 ± 36 um (Fig. 27)。Cilostazol 組最大卵徑為 300 µm,平均為 153 ± 29 µm (Fig. 28)。SPE 組最大卵徑為 340 µm,平均為 153 ± 29 µm (Fig. 29)。SPE +Cilostazol 組最大卵徑為 340 µm,平均為 174 ± 83 µm (Fig. 30)。SPE +Cilostazol 轉 SPE 組最大卵徑為 630 µm,平均為 269 ± 123 µm (Fig. 31)。SPE +Cilostazol 轉 SPE 組最大卵 徑為 400 µm,平均為 208 ± 76 µm (Fig. 32)。
由圖表可以發現,與 control 組相比,施打 Cilostazol 會使卵徑分佈向 左移 (變小),顯示 Cilostazol 對卵巢成熟有抑制效果;而與 control 組相 比,施打 SPE 會使卵徑分佈向右移 (變大),顯示 SPE 對卵巢成熟有促進 效果。而同時施打 SPE +cilostazol 使卵徑分佈範圍變大,呈兩極分佈。
SPE 轉 SPE +Cilostazol 組的卵徑較前四組大上許多。而 SPE +Cilostazol 轉 SPE 組也會使卵徑變大,但效果不若前者佳。將上述結果整理成表 (表 二)。之後將測量卵徑所得數據與測量組織切片截卵面積的數據互相比較,
發現其結果具有一致性。
3.2.8 卵面積與 卵面積與 卵面積與 卵面積與菲列直徑 菲列直徑 菲列直徑 菲列直徑 (Feret’s diameters) 之關係 之關係 之關係 之關係
為了確認卵面積與其菲列直徑是否呈正相關性,我們將每個測量的卵 之卵面積與菲列直徑繪製圖表 (Fig. 33)。由圖表中可發現,其 r2 = 0.96,
所以卵面積與菲列直徑之間呈高度正相關。
3.2.9 卵巢基因表現量 卵巢基因表現量 卵巢基因表現量 卵巢基因表現量 (qRT-PCR)
在卵巢方面 (Fig. 34、35),以 qRT-PCR 測得基因相對表現量結 果顯示 PTEN long 在各組處理下的表現分別為:control (58 ± 88U)、SPE (25 ± 24U)、SPE +Cilostazol (40 ± 21U)、Cilostazol (197 ± 253U)、SPE 轉 SPE +Cilostazol (10U)、SPE +Cilostazol 轉 SPE (2U),其中 Cilostazol 組最 高,其他組較低。PTEN short 在各組處理下的表現分別為:control (108 ± 180U)、SPE (29 ± 29U)、SPE +Cilostazol (31 ± 16U)、Cilostazol (148 ± 238U)、SPE 轉 SPE +Cilostazol (16U)、SPE +Cilostazol 轉 SPE (0.8U),其 中 Cilostazol 組最高,其他組較低。由結果可看出 PTEN long 與 PTEN short 之在各處理下表現量趨勢一致。VEGF 在各組處理下的表現分別為:
Cilostazol (0.12 ± 0.11U)、SPE 轉 SPE +Cilostazol (0.16U)、SPE +Cilostazol 轉 SPE (0.13U),其中 SPE 組最高,其他組較低。Flk 在各組處理下的表 現分別為:control (17 ± 28U)、SPE (5.3 ± 2.7U)、SPE +Cilostazol (7.8 ± 10U)、Cilostazol (30 ± 37U)、SPE 轉 SPE +Cilostazol (1.05U)、SPE +Cilostazol 轉 SPE (1.59U),其中 Cilostazol 組最高,SPE 組、SPE +Cilostazol 組次之,SPE 轉 SPE +Cilostazol 組及 SPE +Cilostazol 轉 SPE 組較低。
Angpt1 在各組處理下的表現分別為:control (0.56 ± 0.38U)、SPE (0.31 ±
0.25U)、SPE +Cilostazol (0.35 ± 0.09U)、Cilostazol (13.36 ± 22.85U)、SPE 轉 SPE +Cilostazol (0.20U)、SPE +Cilostazol 轉 SPE (0.36U),其中 Cilostazol 組最高,其他組較低。Tie2 在各組處理下的表現分別為:control (0.63 ± 0.56U)、SPE (1.85 ± 3.12U)、SPE +Cilostazol (1.07 ± 0.65U)、Cilostazol (2.15
± 2.31U)、SPE 轉 SPE +Cilostazol (0.25U)、SPE +Cilostazol 轉 SPE (0.02U),
其中 Cilostazol 組、SPE 組較高,control 組、SPE +Cilostazol 組次之,SPE 轉 SPE +Cilostazol 組、SPE +Cilostazol 轉 SPE 組較低。LHR 在各組處理 下的表現分別為:control (10.19 ± 13.66U)、SPE (2.30 ± 3.63U)、SPE +Cilostazol (7.35 ± 11.39U)、Cilostazol (10.17 ± 16.47U)、SPE 轉 SPE +Cilostazol (1.33U)、SPE +Cilostazol 轉 SPE (0.83U),其中 control 組、SPE +Cilostazol 組、Cilostazol 組較高,SPE 組次之,SPE 轉 SPE +Cilostazol 組及 SPE +Cilostazol 轉 SPE 組較低。FSHR 在各組處理下的表現分別為:
control (3.70 ± 3.48U)、SPE (1.13 ± 1.32U)、SPE +Cilostazol (3.25 ± 3.37U)、
Cilostazol (10.38 ± 11.98U) 、 SPE 轉 SPE +Cilostazol (0.43U) 、 SPE +Cilostazol 轉 SPE (1.84U),其中 Cilostazol 組較高,control 組、SPE +Cilostazol 組、SPE 組次之,SPE 轉 SPE +Cilostazol 組及 SPE +Cilostazol 轉 SPE 組較低。
3.2.10 紅體基因表現量 紅體基因表現量 紅體基因表現量 紅體基因表現量 (qRT-PCR)
在紅體方面 (Fig. 36、37),以 qRT-PCR 測得基因相對表現量結 果顯示 PTEN long 在各組處理下的表現分別為:control (0.30 ± 0.31U)、
SPE (0.63 ± 0.76U)、SPE +Cilostazol (0.09 ± 0.11U)、Cilostazol (0.18 ± 0.06U)、SPE 轉 SPE +Cilostazol (0.06U)、SPE +Cilostazol 轉 SPE (0.11 ± 0.04U),其中 SPE 組最高,control 組次之,其他組較低。PTEN short 在 各組處理下的表現分別為:control (1.47 ± 1.42U)、SPE (8.52 ± 13.55U)、
SPE +Cilostazol (0.66 ± 0.40U)、Cilostazol (1.65 ± 0.13U)、SPE 轉 SPE +Cilostazol (1.10U)、SPE +Cilostazol 轉 SPE (3.18 ± 4.02U),其中 SPE 組 最高,SPE +Cilostazol 轉 SPE 組次之,其他組較低。由結果可看出 PTEN long 與 PTEN short 之在各組處理下表現量趨勢略同。VEGF 在各組處理
下的表現分別為:control (9.48 ± 9.22U)、SPE (11.18 ± 7.98U)、SPE +Cilostazol (3.83 ± 2.58U) 、 Cilostazol (7.06 ± 3.11U) 、 SPE 轉 SPE +Cilostazol (2.49U)、SPE +Cilostazol 轉 SPE (4.60 ± 0.19U),其中 control 組、SPE 組、Cilostazol 組較高,其他組較低。Flk 在各組處理下的表現分
別為:control (0.09 ± 0.19U)、SPE (0.07 ± 0.11U)、SPE +Cilostazol (0.32 ± 0.73U)、Cilostazol (0.39 ± 0.65U)、SPE 轉 SPE +Cilostazol (0.003U)、SPE +Cilostazol 轉 SPE (0.024 ± 0.031U),其中 SPE +Cilostazol 組、Cilostazol 組較高,SPE 組、control 組次之,SPE 轉 SPE +Cilostazol 組、SPE +Cilostazol 轉 SPE 組較低。Angpt-1 在各組處理下的表現分別為:control (2.66 ± 1.08U)、
SPE (11.27 ± 13.97U)、SPE +Cilostazol (0.58 ± 0.42U)、Cilostazol (11.04 ± 16.17U)、SPE 轉 SPE +Cilostazol (1.33U)、SPE +Cilostazol 轉 SPE (1.06 ± 0.09U),其中 SPE 組、Cilostazol 組較高,其他組較低。Tie2 在各組處理 下的表現分別為:control (0.23 ± 0.39U)、SPE (0.10 ± 0.11U)、SPE +Cilostazol (2.80 ± 6.20U) 、 Cilostazol (0.06 ± 0.08U) 、 SPE 轉 SPE +Cilostazol (0.005U)、SPE +Cilostazol 轉 SPE (0.01 ± 0.003U),其中 SPE+Cilostazol 組最高,其他組較低。
3.2.11 卵巢血管新生基因表現量與 卵巢血管新生基因表現量與 卵巢血管新生基因表現量與 卵巢血管新生基因表現量與 GSI 的關係 的關係 的關係 的關係
由實驗結果發現 (Fig. 38),在卵巢發育過程中,VEGF 表現量會隨 GSI 大小增大而上升 (r2 = 0.320)。而其餘的基因表現量與 GSI 相關性較 低,分別為 Flk (r2 = 0.159)、PTEN long (r2 = 0.157)、PTEN short (r2 = 0.093)、
Angpt-1 (r2 = 0.107)、Tie2 (r2 = 0.022)、LHR (r2 = 0.186)
、
FSHR (r2 = 0.277)。3.2.12 紅體血管新生基因表現量與 紅體血管新生基因表現量與 紅體血管新生基因表現量與 紅體血管新生基因表現量與 RMSI 的關係 的關係 的關係 的關係
由實驗結果發現 (Fig. 39),在紅體成長過程中,VEGF (r2=0.00184) 、 Flk (r2 = 0.0076)、PTEN long (r2 = 0.094)、PTEN short (r2 = 0.080)、Angpt-1 (r2 = 0.026) 與 Tie2 (r2 = 0.013) 表現量與 RMSI 大小相關性較低。
四
在預備實驗與日本鰻實驗中皆可發現,施打 SPE +Cilostazol 會使得血 液中血糖值明顯高於其他處理。有文獻指出,服用 Cilostazol 會使得病人 的心跳速率提高,並有三名糖尿病二型病人服用 Cilostazol 後,其血糖值 與心跳速率一併增加 (Aoki et al, 2014)。Aoki 等人推測,Cilostazol 會使 得肝臟過度生產葡萄糖,並且超出體內分泌之胰島素 (insulin) 所能處理 的量,使得高血糖的發生。而本實驗中單獨施打 Cilostazol 催熟並不會提