波羅蜜葉與益生菌共發酵之單因子條件探討

測 L. plantarum subsp. plantarum BCRC 10069 生長曲線得到最適培養時間 如圖十四所示，在將波羅蜜葉與 L. plantarum subsp. plantarum BCRC 10069 共發 酵之最適 pH 、溫度和時間因子條件分別為表七、表八和表九。首先，取 20 克 波羅蜜葉粉末先以 37 ℃ 、發酵 3 天作為條件而 pH 值為變因。表七為波羅 蜜葉於 pH 4.5 、 6.5 、 8.5 之不同發酵 pH 值發酵後其 squalene 和 lanosterol 含量之變化。由表中發現 pH 4.5 、 pH 6.5 和 pH 8.5 發酵後的樣品重和萃取 物重差異不大，可知在 37 ℃ 、發酵 3 天的環境下， L. plantarum subsp.

plantarum BCRC 10069 的生長速率是一樣的，且二氧化碳超臨界萃取結果，其 萃取物重並無明顯的誤差，而在 HPLC 分析 squalene 的含量中可發現於 pH 4.5 的含量為 2676.510 μg/mL 和 pH 6.5 的含量為 2644.612 μg/mL 相差不大 但高於 pH 8.5 的 2139.803 μg/mL ，由此可知 L. plantarum subsp. plantarum BCRC 10069 適合在較酸的環境下產生 squalene ，但在 lanosterol 的含量上，

pH 4.5 為 0.858 μg/mL 、 pH 6.5 為 1.004 μg/mL 和 pH 8.5 的 1.111 μg/mL 三者之間無明顯差異，而以總和來說 pH 4.5 含量最多， pH 8.5 含量最少。因 此，以 pH 4.5 為最適發酵波羅蜜葉之發酵 pH 值。

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圖十四、L. plantarum subsp. plantarum BCRC 10069 之生長曲線 Fig 14. L. plantarum subsp. plantarum BCRC 10069 of the growth curve.

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表七、起始pH 值對經 L. plantarum subsp. plantarum BCRC 10069 發酵波羅蜜葉 之 squalene 和 lanosterol 含量變化

Table 7. The initial pH change of squalene and lanosterol concentration during the Artocarpus heterophyllus leaf fermentation by L. plantarum subsp. plantarum BCRC 10069

pH

發酵後樣品重 ( g )

萃取物重 ( g )

squalene ( μg/mL )

lanosterol ( μg/mL )

總生成量 ( μg/mL ) 4.5 20.14 ± 0.15 1.87 ± 0.12 2676.510 0.858 2677.369 6.5 20.23 ± 0.08 1.71 ± 0.08 2644.612 1.004 2645.616 8.5 20.27 ± 0.02 1.58 ± 0.03 2139.803 1.111 2140.914

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以表七為基準確定最適發酵 pH 值為 pH 4.5 後，表八為培養溫度對經 L.

plantarum subsp. plantarum BCRC 10069 發酵波羅蜜葉的 squalene 和 lanosterol 之含量變化，取 20 克波蘿蜜葉粉末以 pH 4.5 、發酵三天的條件測試 25 ℃ 、 37 ℃ 和 50 ℃ 三個溫度的溫度變因。由發酵後的樣品重發現在溫度上 L.

plantarum subsp. plantarum BCRC 10069 的生長速率有差異但不明顯，而二氧化 碳超臨界萃取結果，其萃取物重隨著溫度提高而變低，但由表八中可以明顯發現 25 ℃ 的 squalene 生成量僅有 3106.019 μg/mL ， 顯著低於 37 ℃ 和 50

℃ ，而 25 ℃ 、 37 ℃ 和 50 ℃ 的 lanosterol 生成量分別為 0.938 μg/mL 、 1.366 μg/mL 和 1.497 μg/mL ，其無太大差異。總和之後 25 ℃ 的生成量明顯 低於 37 ℃ 和 50 ℃ ，而 37 ℃ 的總生成量略高於 50 ℃ ，因此選擇 37 ℃ 為最適發酵波羅蜜葉之發酵溫度。

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表八、培養溫度對經 L. plantarum subsp. plantarum BCRC 10069 發酵波羅蜜葉之 squalene 和 lanosterol 含量變化

Table 8. The culture temperature change of squalene and lanosterol concentration during the Artocarpus heterophyllus leaf fermentation by L. plantarum subsp.

plantarum BCRC 10069

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依表七和表八決定最適發酵 pH 值為 pH 4.5 和最適發酵溫度為 37 ℃ 後，表九為培養時間對經 L. plantarum subsp. plantarum BCRC 10069 發酵波羅蜜 葉的 squalene 和 lanosterol 含量變化，取 20 g 波蘿蜜葉粉以 pH 4.5 、 37 ℃ 測試 24 hr 、 72 hr 、 120 hr 、 168 hr 何者為最適發酵時間。以表九中的發 酵後樣品和萃取物重量發現 24 hr 、72 hr 、 120 hr 、 168 hr 的重量皆沒有太 大差異，但在 squalene 生成量的部分發現 72 hr 可生成 5376.193 μg/mL 顯著 高於 24 hr 的 2346.670 μg/mL 、 120 hr 的 2498.518 μg/mL 和 168 hr 的 2325.942 μg/mL ，且 lanosterol 的生成量並無太大差異，因此，依據 squalene 的 生成量選擇含量最高的時間 72 hr 作為最適發酵時間。

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表九、培養時間對經 L. plantarum subsp. plantarum BCRC 10069 發酵波羅蜜葉之 squalene 和 lanosterol 含量變化

Table 9. The culture time change of squalene and lanosterol concentration during the Artocarpus heterophyllus leaf fermentation by L. plantarum subsp. plantarum BCRC 10069

53 降，由此可知經 L. plantarum subsp. plantarum BCRC 10069 發酵後會大幅提升其 抗氧化活性。