A. B.
D.
C.
Platelet
CD62P+/ PAC-1+ 2.85%
PAC-1+ 4.84%
CD62P+ 19.24%
CD62P+ 17.21%
Platelet
Flow Cytometry Human Platelet Activation Analysis
Insulin resistance
Cell: FL83B (mouse hepatocyte, BCRC 60325)
2-NBDG (MW. 342.26, Invitrogen)
Ex: 487 nm, Em: 542 nm
(Etxeberria et al., 2005)
Kojima et al., 2010)
(Presley et al., 2010)
Regulation of Hematopoiesis by Cytokines -Human
http://cgap.nci.nih.gov/Pathways/BioCarta/stemPathway
Regulation of Hematopoiesis by Cytokines -Mouse
http://cgap.nci.nih.gov/Pathways/BioCarta/m_stemPathway
Apoptosis analysis
細胞凋亡
細胞凋亡又稱為程序化細胞死亡，是某些
生理或病理條件下，細胞接受某種信號的 觸發後主動發生一連串連續性細胞變化，
最終導致細胞死亡而不引起炎症的細胞死 亡過程。細胞凋亡現象是由 Kerr Whyuie 等人於1972 年首次提出，1980 年他們在 對細胞凋亡進行長期觀察和分析後提出細 胞凋亡不同於細胞壞死。
細胞凋亡的生物學意義
細 胞 凋 亡 被 認 為 是 與 細 胞 增 生 相 反 的 方 式 ， 來 調 節 細 胞 群 體 ， 它 不 僅 對 胚 胎 發 生、器官發育、分化作用、及保持機體的 平衡穩定等過程至為重要，而且對控制細 胞的增殖、腫瘤發生和發展極為重要。通 過細胞凋亡，機體及時清除受損及危險的 細胞，因此細胞凋亡對機體的正常發展具 有十分重要的生物學意義。
細胞凋亡的生物學意義
細胞凋亡可經由
Deprivation of growth factors
-irradiation
Oxygen free radical (OFR) production
Receptor-ligand interaction
Inhibition protein kinase
…
凋亡細胞的特徵
細胞會喪失微絨毛、偽足等胞膜結構，隨後，細
胞會皺縮、核質濃縮，細胞密度增大。
細胞核離散，呈現月牙形凝集在核膜下。
隨著細胞膜和細胞核分離，會裂解形成凋亡小體
(Apoptotic body)。
凋亡過程的最後階段發生細胞核的 DNA 降解，
降解後產生的 DNA 片段由185-200 bp 多聚體組 成。在瓊脂凝膠上呈現特徵性凋亡“梯型”。
凋亡細胞的特徵
程序性死亡
程序性死亡 - - 凋亡的活化 凋亡
粒線體
膜電位的失衡
Apaf-1/cyt. c/AIF release
Bcl family regulation
TNFR/FAS superfamily
P53/Rb cell cycle checkpoint pathway
Toll-Like receptor pathway
Nicotinic acetylcholine receptors pathway
Cell-cell interaction
Growth factor/cytokine pathway
…
程序性死亡
程序性死亡 - - 凋亡程序訊息傳遞 凋亡
Caspase pathway (Mit., TNFR, P53…)
PI3K-Akt pathway
Activate cytokine/growth factor release
程序性死亡-DNA fragmentation
Endo G
CAD/DFF
Lamin B1/Lamin degradation
粒腺體在凋亡程序中所扮演的角色
能量代謝失衡
Produce OFR
Alter the redox state of the cell
Cause cycling of Ca2+ ions
Release cyt c, Apfa-1, AIF
Regulate protooncogene Bcl-2 family
Release endonuclease
粒腺體在凋亡程序中所扮演的角色
粒腺體膜電位的偵測
5,5',6,6'-tetrachloro-1,1', 3,3'-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide (JC-1; CBIC2(3))
粒腺體膜電位的偵測
NIH 3T3 fibroblasts stained with JC-1 showing the progressive loss of red J-aggregate fluorescence and
cytoplasmic diffusion of green monomer fluorescence following exposure to hydrogen peroxide.
Images show the same field of cells viewed before H2O2 treatment, and 5, 10 and 20 minutes after treatment.
(Images contributed by Ildo Nicoletti, Perugia University Medical School.)
粒腺體膜電位的偵測
Bivariate JC-1 analysis of mitochondrial membrane potential in HL60 cells by flow cytometry. The sensitivity of this technique is demonstrated by the response to valinomycin-induced depolarization for two hours. Figure courtesy of Dr Andrea Cossarizza, University of Modena and Reggio Emilia.
粒腺體膜電位的偵測
粒腺體能量代謝異常-PS presentation
Figure from North American Scientific, Inc.
http://www.nasi.net/ProductCenter/mi/mi_howapoptosis.html
粒腺體能量代謝異常
-PS presentation/Annexin V-FITC/PI
Biotechnol. Appl. Biochem. 2001, 33: 127–132
粒腺體能量代謝異常
-PS presentation/Merocyanine 540/7-AAD
細胞凋亡-活化TNFR superfamily路徑
細胞凋亡-活化TNFR superfamily路徑
Caspase pathway
Caspase pathway-reagents
Ac-LEHD-AFC FAM-LEHD-FMK
Ac-LEHD-AMC Ac-LEHD-pNA
Caspase 9
Gentaur
FAM-LETD-FMK FAM-YVAD-FMK FAM-VEID-FMK FAM-DEVD-FMK (E/M=490/520)
Fluorimetric-2
Roche Sigma
Sigma
Ac-LETD-AFC Ac-LETD-AMC
Ac-LETD-pNA Caspase 8
Ac-YVAD-AFC Ac-YVAD-AMC
Ac-YVAD-pNA Caspase 1
Ac-VEID-AFC Ac-VEID-AMC
Ac-VEID-pNA Caspase 6
Ac-DEVD-AFC (E/M=400/505) Ac-DEVD-AMC
(E/M=360/460) Ac-DEVD-pNA
(405) Caspase 3
Fluorimetric-3 Fluorimetric-1
Colorimetric Caspase