移動相由 70/30 跳動至 100/0(甲醇/水)

圖 4-8 為等位沖堤的管外時圖，移動相為甲醇、水以體積比 70 比 30 的比例混合，流速為 2 mL/min，根據圖 4-1 的滯留因子計算方法，可計算 出圖 4-8 中，層析波峰的 k 值，如式 4-5 所示:

k = 23.6133−2.3167

2.3167 = 9.19 (4-5)

圖 4-8 移動相為體積比 70/30(甲醇/水)的管外時圖

等位沖堤的管外時圖，移動相為甲醇、水以體積比 70 比 30 的比例混合，

流速為 2 mL/min，根據圖 4-1 的滯留因子計算方法，可計算出圖 4-8 中，層 析波峰的 k 值為 9.19。

之後，以圖 4-8 等位沖堤中的移動相為基礎，即初始動相，分別在不同 的層析時間變換移動相，變換成純甲醇為移動相，其管外時圖為圖 4-9，分 別在 4、7、9、11、15、17、20、22、23.6 分鐘時變換移動相為純甲醇。圖 4-15 中各層析圖譜皆有基線飄移的問題，因為 UV/Vis 訊號強度在初始移動 相沖堤的狀態下歸零，而變換移動相為甲醇時，新移動相便會造成一背景 吸收值，為了排除移動相吸收背景值的影響，所以需要做基線校正曲線來

- 54 - 形也產生跳動的現象(peak jump phenomenon)，此現象相當特殊。

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4min 7min

9min 11min

15min 17min

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20min 22min

23.6min

圖 4-9 分別在不同層析時間變換移動相為甲醇

以甲醇、水體積比 70:30 為初始移動相，流速 2 mL/min，分別在不同的層 析時間變換移動相，在 4、7、9、11、15、17、20、22、23.6 分鐘時變換移 動相為純甲醇。

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4min 7min

9min 11min

15min 17min

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20min 22min

23.6min

圖 4-10 移動相由 70/30(甲醇/水)跳至純甲醇基線飄移校正曲線

因為 UV/Vis 訊號強度在初始移動相沖堤的狀態下歸零，而變換移動相為甲 醇時，新移動相便會造成一背景吸收值，為了排除移動相吸收背景值的影 響，所以需要做基線校正曲線來解決基線飄移的問題。除了不注入樣品之 外，其餘條件參數都和圖 4-15 的實驗相同。此法，可獲的只含移動相吸收 訊號強度的管外時圖。

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4min 7min

9min 11min

15min 17min

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20min 22min

23.6min

圖 4-11 基線校正過後的管外時圖

圖 4-9 中，各種不同時間變換移動相之階梯式沖堤(stepwise elution)皆出現 因變換移動相而造成的背景吸收值，即基線飄移的現象，故將圖 4-9 中的各 圖分別扣除圖 4-10 中相對應的基線校正曲線，便可得到此無背景值干擾的 管外時圖。

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一般認為滯留時間(retention time)越長，波峰應該越寬越矮，因為樣品 在流析的過程中會受擴散效應(diffusion effect)影響，使波形持續變寬，但在 圖 4-12 中卻顯示有一段區間波峰高度隨著滯留時間變長而上升後又下降，

此部分須結合 WCD(whole-column detection)收集的管內空圖來觀察，圖 4-13 為圖 4-11 中各管外時圖所對應的管內空圖。

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增加的波高則會被擴散效應抵消，使此管柱中的壓縮現象無法為管外時圖 所觀察。反之，在管柱後端才遭遇變換移動相者，其波峰雖無前段遭壓縮 者高，但隨即流出管柱，還來不及被擴散效應所掩蓋。表 4-2 中,較晚換移 動相的三組數據(11、15、17 分鐘)其壓縮波峰最高值相去不遠，也應證了上 述理由。

而 4.3.1 中討論的移動相由 85/15(甲醇/水)變換為純甲醇的實驗中，並 沒有發生波峰壓縮的現象，是因為移動相的沖堤能力變化不夠大，所以仍 然以樣品在管柱中的擴散作用為主。

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4 min 7 min

9 min 11 min

15 min 17 min

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圖 4-13 各管外時圖所對應的管內空圖

分別在 UV/Vis 偵測器開始取點之後的第 4、7、9、11、15、17、20、22、

23.6 分鐘時，將移動相瞬間跳動至移動相 B，由 A 移動相跳至 B 移動相之 過程設定在 0.6 秒內完成，由上述不同改變動相時間所對應的管內空圖可以 看到樣品在管柱中的沖堤過程。

圖 4-14 等位沖堤(圖 4-8)實驗中的管內空圖

20 min 22 min

23.6 min

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4 min 7 min

9 min 11 min

15 min 17 min

圖 4-15 變換移動相時間為第 4、7、9、11、15、17 分鐘之管柱中段管內空 圖

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等位沖堤圖形相似，由圖 4-13 對應的空圖可以明白，太晚變換移動相的關 係，變換的移動相無法追趕上即將流出管柱的樣品，故樣品空間波峰不受 變換移動相影響，和等位沖堤無異。

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