第一節：描述性統計分析

對於小檗鹼在不同的濃度下，如何影響人類乳癌細胞(MCF-7)的氮 -乙醯轉移酵素的活性，我們可由圖 1 及圖 2 中看出。隨著小檗鹼濃度 的增加，二胺螢素的氮－乙醯化作用也隨之降低。對照組（berberine 濃度為 0）所產生的二乙醯胺螢素濃度為 9.45±1.74 nmol/10⁶ cells，

由 0.8μM 到 320μM 的小檗鹼，二乙醯胺螢素濃度由 8.76±1.14 nmol/10⁶ cells 減少為 0.96±0.20 nmol/10⁶ cells，二胺螢素的氮－

乙醯化作用被抑制了 7 到 90%。

2.

1（ a）對照組

3.

4.

1（b）. 0.8 μM berberine

5.

1（c）. 8μM berberine

1（d）. 80μM berberine

1（ e） . 160μM berberine

1（f）. 320μM berberine

圖 1. 24 小時時，人類乳癌細胞(MCF-7)中，不同濃度的小檗鹼對二胺 螢素乙醯化反應的影響。二胺螢素及其代謝物二乙醯胺螢素的量，皆 以高效液相層析(HPLC)來測量。（1-a: control, 1-b: 0.8 μM, 1-c:

8 μM, 1-d: 80 μM , 1-e: 160 μM, 1-f: 320 μM 小檗鹼）圖形 的點皆為三次測量的平均值。

圖 2.

2

. 24 小時時，人類乳癌細胞(MCF-7)中，不同濃度的小檗鹼對 二乙醯胺螢素產生反應的作用。二乙醯胺螢素的量以高效液相層析 (HPLC)來測量。每一點皆為三次測量的平均值。數值以平均值±±標準

標

準差差 來

來

表

表

示

示

(n

(

n＝＝3)

3

)。。＊

＊

代

代

表

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p

p

值<0.05。

值

。

在時間方面，由圖 3 可知，隨著時間的增加，二乙醯胺螢素（2-AAAAFF）

的濃度也一直增加，此作用一直持續至少 24 小時。在 6 到 24 小時這 一段時間，我們發現 160μM 的 berberine 明顯造成 2-AF 的氮乙醯化 作用的抑制。在 6 小時時，2-AAF 濃度由 1.59 ± 0.27 nmol/10⁶ cells 減少為 0.34 ± 0.09 nmol/10⁶ cells；在 24 小時時，2-AAF 濃度由 9.47

± 1.56 nmol/10⁶ cells 減少為 2.86 ± 0.54 nmol/10⁶ cells。由上述 可知， 2-AF 的氮乙醯化作用被抑制了 70 到 79％。

圖 3. 160μM 的小檗鹼，於人類乳癌細胞(MCF-7)中，在不同時間 下，對產生二乙醯胺螢素的作用。二乙醯胺螢素的量以高效液相層析 (HPLC)來測量。每一點皆為三次測量的平均值。數值以平均值±±標準

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我們再以 160μM 的 berberine（固定濃度），24 小時的時間（固 定時間），以不同濃度的 2-AF（11.25、22.5 及 45.0μM）來做，由圖 4 我們發現 AAF 的產量分別減少了 56﹪、59﹪及 59%。

圖 4. 24 小時時，160μM 的小檗鹼，於人類乳癌細胞(MCF-7)中，在 不同濃度的二胺螢素下，對產生二乙醯胺螢素的作用。二乙醯胺螢素 的量以 高效液相層析(HPLC)來測量。每一點皆為三次測量的平均值。

數值以平均值±

±

標

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準

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差

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。

酵素動力學的平衡常數方面（圖 5），不同濃度的 2-AF(2.70, 2.25, 1.80, 1.35, 0.90, 0.45 μM)被加入細胞質中，在有小檗鹼及無小檗 鹼 (160 μM)的情況下，我們發現，以 1/AF 為 X 軸，1/V 為 Y 軸做線 性迴歸圖時，形成兩條平行線。當 160μM 的小檗鹼被加入時，Km 及 Vmax 分別減少了 54％到 50％。

圖 5. 人類乳癌細胞(MCF-7)中，氮-乙醯轉移酵素的

Lineweaver-Burk 酵素動力線性迴歸圖。使用不同濃度的二胺螢素 (0.45, 0.90, 1.35, 1.80, 2.25 and 2.70 μM)的倒數為 x 軸，以反 應速度的倒數為 y 軸畫出的線性迴歸圖。

氮-乙醯轉移酵素的量受到影響的程度是如何？我們由圖 6 的西方 墨點法分析，發現氮-乙醯轉移酵素的量隨著小檗鹼濃度的增加，氮-乙醯轉移酵素的量也隨之降低。而由圖 7 我們發現，當 160μM 的小檗 鹼被加入時，隨著時間的增加，氮-乙醯轉移酵素的量也顯著隨之降低。

圖 6，人類乳癌細胞(MCF-7)中，加入不同濃度的小檗鹼，於 24 小時時，產生氮-乙醯轉移酵素的量的作用。

圖 7，人類乳癌細胞(MCF-7)中，加入 160μM 濃度的小檗鹼，於 不同的時間下，產生氮-乙醯轉移酵素的量的作用。

由圖 8 的聚合酵素連鎖反應圖，我們發現氮-乙醯轉移酵素 mRNA 的基 因表現，隨小檗鹼濃度的增加而依次降低，由 8、80、160 至 320 μM 的小檗鹼，氮-乙醯轉移酵素 mRNA 依次下降了 2﹪、23﹪、35﹪及 56%。

Concentration of berberine (µM)

C 8 80 160 320

在文檔中 小檗鹼誘導的二胺螢素的氮-乙醯化於人類乳癌細胞株(MCF-7)中，所牽涉到的氮-乙醯轉移酵素活性作用及基因表現; Effects of N-acetyltransferase activity and gene expression involved in berberine-induced N-acetylation of 2-aminofluorene in human breast cell line (MCF-7) (頁 26-45)