本實驗結果主要分為高效液相層析測定維生素 C 與維生素 C 葡萄 糖苷之儀器條件尋找結果，並以所尋找之適用儀器條件，分析維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷置放安定性試驗之結果，與經皮滲透研究之結 果。
一.高效液相層析測定維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷之儀器條件尋找 結果：
﹝一﹞.使用 Lichrospher 5 RP18e，4x250 mm 層析管柱：
此 Lichrospher 5 RP18e，4x250 mm 層析管柱屬 C18 逆相層 析管柱，移動相採水、甲醇或磷酸二氫鉀水溶液按不同設計比例而配 製，皆為一般分析實驗室常用之方法。
1.移動相為 H2O：Methanol=90：10 之結果：
在此儀器條件下，從維生素C 之滯留時間為 2.0 分 鐘；維生素 C 葡萄糖苷之滯留時間也為 2.0 分鐘，兩者過於接近，故 此分析條件不佳。
2.移動相為 H2O：Methanol=80：20 之結果：
在此儀器條件下，從維生素C 之滯留時間為 2.0 分 鐘；維生素 C 葡萄糖苷之滯留時間也為 2.0 分鐘，兩者過於接近，故 此分析條件不佳。
21
3.移動相為 0.01M 磷酸二氫鉀水溶液之結果：
在此儀器條件下，從維生素 C 之滯留時間為 2.3 分 鐘；維生素 C 葡萄糖苷之滯留時間也為 2.4 分鐘，兩者也過於接近，
此分析條件也算不佳，但此移動相似乎有使維生素 C 與維生素 C 葡萄 糖苷分開之現象，故值得以此移動相嘗試其他層析管。
﹝二﹞.使用 Partisil 10 SAX-250A，4.6x250mm 層析管柱，使用移 動相為 0.01M 磷酸二氫鉀水溶液之結果：
此 Partisil 10 SAX-250A，4.6x250mm 層析管柱屬逆相 層析管柱，填充介質表面有修飾 quaternary ammonium groups
(-NR3+)，配合磷酸二氫鉀水溶液為移動相，常用於分析有機酸、無機 酸與核酸等。維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷於酸性環境帶負電荷，此 層析管柱之填充介質帶正電荷，可以使維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷 有效分離。
在此儀器條件下，從維生素 C 之滯留時間為 10.4 分 鐘；維生素 C 葡萄糖苷之滯留時間為 7.4 分鐘，兩者已完全分開，滯 留時間相差超過 3 分鐘以上，如圖 5，此分析條件可視為適用。
22
圖 5、維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 100 ppm 混合標準生理食鹽水 溶液之分析圖
uV
M in ut e
0 5 10
0 20 40 60 80
1) 3.353 2) 7.368 3) 10.466
二.採用 Partisil 10 SAX-250A，4.6x250 mm 層析管柱，移動相為 0.01 M
23
磷酸二氫鉀水溶液為儀器條件，以高效液相層析法進行維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷置放安定性試驗，與經皮滲透研究，結果如 下：
﹝一﹞.維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷置放安定性試驗結果：
1.高效液相分析儀分析維生素 C 標準檢量線之結果
維生素 C 標準檢量線係由 25, 50, 100, 200,400 ppm 與 五個不同濃度之標準溶液所組成，以高效液相層析法分析各個濃度，
每個濃度分析三次，見圖 6、圖 7、圖 8、圖 9、圖 10，加入原點，求 取其回歸方程式，其結果如圖 11。
2.高效液相分析儀分析維生素 C 葡萄糖苷標準檢量線之結 果
維生素 C 葡萄糖苷標準檢量線係由 25, 50, 100 , 200 , 400 ppm 五個不同濃度之標準溶液所組成，以高效液相層析法，分析 各個濃度，每個濃度分析三次，圖譜見圖 6、圖 7、圖 8、圖 9、圖 10，
加入原點，求取其回歸方程式，其結果如圖 12。
24
圖 6、維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 25 ppm 混合標準生理食鹽水 溶液檢量線HPLC 分析
uV
Min ute
0 5 1 0
0 5 10 15 20
1) 3.350 2) 7.256 3) 10.377
25
圖 7、維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 50 ppm 混合標準生理食鹽水 溶液檢量線HPLC 分析
uV
Min ute
0 5 10
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
1) 3.356 2) 7.313 3) 10.421
26
圖 8、維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 100 ppm 混合標準生理食鹽水 溶液檢量線HPLC 分析
uV
Min ute
0 5 10
0 20 40 60 80
1) 3.353 2) 7.368 3) 10.466
27
圖 9、維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 200 ppm 混合標準生理食鹽水 溶液檢量線HPLC 分析
uV
Min ute
0 5 10
0 50 1 00 1 50
1) 3.351 2) 7.381 3) 10.472
28
圖 10、維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 400 ppm 混合標準生理食鹽 水溶液檢量線HPLC 分析
uV
Min ute
0 5 1 0
0 50 1 00 1 50 2 00 2 50 3 00 3 50
1) 3.365 2) 7.421 3) 10.497
29
圖 11、維生素 C 標準檢量線圖
30
圖 12、維生素 C 葡萄糖苷標準檢量線圖
31
32
33
圖 14、維生素 C 葡萄糖苷 100 ppm 標準食鹽水溶液儲存置放安定性分 析結果
5.高效液相分析儀分析維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 100 ppm 混合標準溶液置放安定之結果：
維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 100 ppm 生理食鹽水 標準溶液置放安定試驗，是以維生素C 與維生素 C 葡萄糖苷各 100 ppm 生理食鹽水標準溶液置放於 25 ºC 恆溫箱中，在不同的天數取樣，以 高效液相層析法分析，所採樣品濃度，每個樣品分析三次，求取其波 峰平均面積，其結果如表 3。
表 3、維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 100 ppm 標準生理食鹽水溶液 儲存置放安定性分析結果
34
35
(6.21 mg) 356.5 ppm
(4.15 mg) 364 ppm
(5.97 mg) 363.7 ppm
(4.23 mg) 380.3 ppm
(5.79 mg) 339.4 ppm
(3.95 mg) 360.1 ppm
36
附註維生素C 與維生素 C 葡萄糖苷各 400 ppm 混合生理食鹽水溶液比重 為 1.0023 g/ml，樣品接收瓶注入樣品量為 2 ml，皮膜打碎萃取注入空 白生理食鹽水量為 4 ml，皮膜面積為 0.54 cm3。計算數值四捨五入至 小數點後二位。
經豬腸衣皮膜滲透，可由精算注入擴散前樣品總量，擴散後擴散 瓶總量，擴散後接收瓶總量，與擴散後皮膜總量，導出以下關係程式：
程式 1：擴散前樣品總量(擴散前擴散瓶樣品總量)=擴散後樣品總量 程式 2：擴散前樣品總量=擴散後擴散瓶總量+擴散後接收瓶總量+擴散
後皮膜總量
程式 3：擴散前擴散瓶樣品總量-擴散後擴散瓶總量=擴散後接收瓶總 量+擴散後皮膜總量
以經皮滲透定義而言，經皮滲透總量=擴散後接收瓶總量+擴散後皮膜 總量，然而皮膜總量由於萃取無法達到完全，萃取所得之量往往低於 應有皮膜總量，因此經皮滲透總量改採擴散前擴散瓶樣品總量減掉擴 散後擴散瓶總量表示之。
本實驗設計不同滲透時間，而且經皮滲透總量與滲透皮膜面積有關，
為相互比較不同滲透時間之經皮滲透總量，因而定義經皮滲透速率：
程式 4：經皮滲透速率=擴散前擴散瓶樣品總量-擴散後擴散瓶總量 滲透時數×滲透皮膜面積
37
經皮滲透速率單位為 mg/ cm2․hr，計算數值四捨五入至小數點後二 位。
從表4 維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 400 ppm 混合溶液經腸衣皮滲 透試驗結果分析表中，計算各不同滲透時間之經皮滲透速率如表 5。
表 5、維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 400 ppm 混合標準生理食鹽水 溶液經腸衣滲透計算之經皮滲透速率結果，單位為 mg/ cm2․hr 滲透時數
分析項目
一小時 二小時 三小時 四小時
維生素 C 0.33 0.28 0.27 0.07
維生素 C 葡萄糖苷 0.33 0.26 0.17 0.05 表 4 之分析結果整理成圖 16。
圖 16、維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 400ppm 混合生理食鹽水溶液 經腸衣滲透計算經皮滲透速率結果
2.高效液相分析儀分析維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 400
38
(6.39 mg) 382.7 ppm
(4.45 mg) 395.5 ppm
(5.46 mg) 358.5 ppm
(4.38 mg) 392.0 ppm
(5.61 mg) 363.7 ppm
(4.45 mg) 380.3 ppm
39
白生理食鹽水量為 4 ml，皮膜面積為 0.54 cm3。計算數值四捨五入至 小數點後二位。
經豬表皮膜滲透，可由精算注入擴散前樣品總量，擴散後擴散瓶 總量，擴散後接收瓶總量，與擴散後皮膜總量，導出以下關係程式：
程式 1：擴散前樣品總量(擴散前擴散瓶樣品總量)=擴散後樣品總量 程式 2：擴散前樣品總量=擴散後擴散瓶總量+擴散後接收瓶總量+擴散
後皮膜總量
程式 3：擴散前擴散瓶樣品總量-擴散後擴散瓶總量=擴散後接收瓶總 量+擴散後皮膜總量
以經皮滲透定義而言，經皮滲透總量=擴散後接收瓶總量+擴散後皮膜 總量，然而皮膜總量由於萃取無法達到完全，萃取所得之量往往低於 應有皮膜總量，因此經皮滲透總量改採擴散前擴散瓶樣品總量減掉擴 散後擴散瓶總量表示之。
本實驗設計不同滲透時間，而且經皮滲透總量與滲透皮膜面積有關，
為相互比較不同滲透時間之經皮滲透總量，因而定義經皮滲透速率：
程式 4：經皮滲透速率=擴散前擴散瓶樣品總量-擴散後擴散瓶總量 滲透時數×滲透皮膜面積
經皮滲透速率單位為 mg/ cm2․hr，計算數值四捨五入至小數點後二 位。
40
從表4 維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 400 ppm 混合溶液經腸衣皮滲 透試驗結果分析表中計算各不同滲透時間之經皮滲透速率如表 7。
表 7、維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 400ppm 混合標準生理食鹽水 溶液經豬皮滲透計算經皮滲透速率結果，單位為 mg/ cm2․hr 滲透時數
分析項目
一小時 二小時 三小時 四小時
維生素 C 1.01 0.27 0.03 0.08
維生素 C 葡萄糖苷 0.22 0.23 0.01 0.01 表 7 之數值整理成圖 17。
圖 17、維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 400ppm 混合生理食鹽水溶液 經豬皮滲透計算經皮滲透速率結果
3.效液相分析儀分析維生素 C 與維生素 C 葡萄糖苷各 100 ppm 混合生理食鹽水溶液經超音波震盪之結果：
定經皮滲透後，以超音波震盪方式萃取皮內含物，恐
41
42