(一)、 台灣鋏蠓的大量飼養
1. 建立小球藻培養最適條件，提供台灣鋏蠓幼蟲足夠食物。
自嘉義大學淡水生物資源中心購入小球藻 (Chlorella vulgaris，CHL)，另外由中央研究院 生物多樣性研究中心吳俊宗博士贈送魚腥藻 (Anabaena sp.) 種源，修改 Arnon 培養液培 養(圖 1)，再以離心機分離濃縮藻液的沉澱物。混合兩種藻液可誘引台灣鋏蠓產卵並做為 幼蟲的飼料，單獨使用小球藻可順利提供台灣鋏蠓幼蟲取食，並完成發育。
圖 1、小球藻培養，提供台灣鋏蠓幼蟲食物
2. 確認台灣鋏蠓飼養、交配、產卵、繼代繁殖的流程。
(1) 已完成台灣鋏蠓 (Forcipomyia taiwana) 飼養及繁殖技術。首先製作飼育杯，取 75 cm3經 滅菌乾燥處理的土壤，置於內徑 8.2 cm、高 6.3 cm 之塑膠飼養盒內，加入 12 ml 水，將土 壤夯實後備用。於夯實的土壤滴加混合濃縮的綠藻液，取飽食血餐的雌性台灣鋏蠓，置於 飼養盒內產卵，餵血後三天即可產卵。卵期約 3 天，孵化幼蟲以綠藻液餵食至化蛹，幼蟲 期在 28℃約 7 天，冬季溫度較低約需 9-10 天。蛹期約 3 天(圖 2-3)。將飼育杯內完成化蛹 的台灣鋏蠓放到養蟲籠內，待成蟲羽化後進行相關試驗(圖 4)。研究過程曾分別以濕棉花 墊襯濾紙、洋菜及石膏進行雌成蟲誘引產卵及幼蟲飼育，濕度不易控制。以土壤做為誘引 產卵及幼蟲飼育效果最佳，可適當控制濕度。低溫對小黑蚊生長發育有很大的影響，容易 因為低溫造成死亡，無法產卵繁衍後代。本團隊可成功大量累代飼養小黑蚊，單次成功飼 養成蟲數量可達 15000 隻，唯可再簡化誘引雌性小黑蚊產卵的流程，減少飼養照顧花費的 時間。
圖 2、台灣鋏蠓幼蟲飼養 圖 3、台灣鋏蠓幼蟲飼養
圖 4、台灣鋏蠓成蟲羽化籠
(2) 台灣鋏蠓交尾行為觀察。觀察不同大小養蟲籠（邊長分別為 20 公分、30 公分及 40 公分）， 台灣鋏蠓皆會進行交尾，只是交尾率有差異(圖 5)。觀察台灣鋏蠓的交尾行為，雌蟲羽化 後 2 天，雄蟲羽化後 1 天即可進行交尾。交尾高峰在開燈後 2 小時，中午過後僅零星台灣 鋏蠓進行交尾(圖 6)。分別以雌蟲/雄蟲比例為 100/20、100/100 及 20/100 進行交尾行為觀
察，5 次重複觀察的平均交尾次數分別為 54.0、56.4 及 10.4。三種不同組合雌蟲的平均交 尾率分別為 54.0%、56.4%及 52.0%(圖 7)。三種不同組合雄蟲的平均交尾率分別為 270.0%、
56.4%及 10.4%(圖 8)。本觀察發現雄性小黑蚊會有重覆的交尾行為，光線會明顯影響小黑 蚊的交尾行為。
圖 5、台灣鋏蠓的交尾觀察，紅色箭頭所指都是交尾的成蟲。
圖 6、台灣鋏蠓交尾行為
圖 7、雌性台灣鋏蠓在不同雌雄比的交尾率 圖 8、雄性台灣鋏蠓在不同雌雄比的交尾率
(3) 台灣鋏蠓人工餵血試驗。以人血餵飼小黑蚊雌成蟲平均吸血率為 67%，以新鮮豬血飼小黑 蚊雌成蟲的平均吸血率為 69.9%，以人工血液餵飼小黑蚊雌成蟲(圖 9)的平均吸血率為 72.7%，三者間不具顯著差異(圖 10)。小黑蚊的吸血率受交尾率影響，高交尾率會提高小 黑蚊的吸血率，野外剛採集回來族群的吸血率可高達 81%。吸食人血台灣鋏蠓的平均產卵 數、孵化幼蟲數、化蛹數及羽化成蟲數分別為 40.9, 36.3, 35.0 及 33.0，吸食人工血液台灣 鋏蠓的平均產卵數、孵化幼蟲數、化蛹數及羽化成蟲數分別為 42.9, 32.6, 32.0 及 31.5(圖 11)。另外還觀察到以人血餵飼，產卵後的雌成蟲再次供血，觀察到可連續產卵至第四次，
第 2 次、第 3 次及第 4 次平均產卵數分別為 48 顆、65 顆及 43 顆。
圖 9、台灣鋏蠓人工餵血系統
Feeding rate (%)
值分別為 0、-0.088 及 0.025。化學傳訊素的作用需改進測試條件進行誘引效果的試驗才能有 具體結果。
圖 12、以 Y 型管進行進行台灣鋏蠓化學傳訊素的生物活性分析
(三)、 以 GC-MS(氣相色譜質譜) 分析台灣鋏蠓的化學傳訊素
以二氧化碳昏迷 2400 隻雄蟲及 2400 隻雌蟲，分別以 5 毫升正己烷及甲醇分別萃取 1200 隻雄蟲及 1200 隻雌蟲，濃縮乾燥後，分別以 500ul 正己烷及 500ul 甲醇溶解，再以 GC-MS(氣 相色譜質譜)進行分析。GCMS 小黑蚊/Hexane 萃取物，小黑蚊/hexane 萃取物，雄、雌蚊，其 成分差異如下列 3 個 peak(圖 13)。GCMS 小黑蚊/MeOH 萃取物小黑蚊/MeOH 萃取物，雄、
雌蚊，其成分幾乎一致，只是比例上的差異(圖 14)。相關鑑定出的化合物，將再進行生物活 性誘引試驗。
圖 13、GCMS 小黑蚊/Hexane 萃取物
圖 14、GCMS 小黑蚊/MeOH 萃取物