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人體服用純瓜拿納能夠增加運動後脂肪代謝,高劑量 2000 mg 瓜拿 納在人體試驗中未有任何不良反應,且脂肪代謝效果優於低劑量 1000 mg。顯示服用瓜拿納對於體重過重者有正面的幫助。

未來建議可以長期服用瓜拿納作為體重控制的研究,探討長期服用 後抗氧化能力是否優於單次服用,或是有更多的效益。

引用文獻

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附錄一 實驗參與者知情同意書

實驗參與者知情同意書

研究單位:國立台灣師範大學運動競技系運動科學碩士班 研究者:劉又嘉,連絡電話:0930-739613

指導教授:謝伸裕,連絡電話:0955-985745

依實驗研究規定,研究者有義務告知參與者,整體的實驗過程及可能發生的 危險,且應維護參與者之健康與權益;實驗過程中,參與者如無意願繼續參與,

可隨時退出實驗且不受任何限制,但事前須告知研究者。

本研究標題為“體重過重者攝取瓜拿納對單次運動脂肪代謝與抗氧化的影 響”,將探討進行單次運動在服用不同瓜拿納劑量下,是否可以增加運動後的脂 肪代謝以及減少運動後的氧化壓力。參與者共需到實驗室四次,第一次將測量身 高、體重與安靜心跳率,計算出 75%HRR 的運動心率後,再以跑步機測量 75%HRR 的對應速度,作為之後每次所進行的固定運動強度。後三次進實驗室,

將攝取不同劑量的瓜拿納後進行運動測試,每次將抽血 5 次。

為了使實驗過程順利並獲得正確的數據,同時維護個人之權益及健康,請參 與者務必配合下列事項:

到實驗前必須至少空腹 8 小時。

實驗前 48 小時內不能有激烈運動及飲用含酒精飲料或其他藥物。

必須紀錄實驗前一天 24 小時的飲食,以提供實驗所需。

請據實題填寫健康情況調查表,得以評估是否適合參與實驗。

本參與者已閱讀參與者須知,且明白實驗相關內容及注意事項,同時自願參與上 述實驗。

參與者: 日期:

聯絡地址: 電話:

附錄二 實驗參與者健康情況調查表

附錄三 脂肪代謝生化分析方法

脂肪代謝生化分析方法 一、 甘油(glycerol)

1. 以採用 Randox(Ulster,Northern Ireland,UK)藥劑,利用比色 法鑑定甘油濃度,機器採用 DYNEX(Chantilly,Virgnia,USA)

的 Spectra MR。

2. 血漿取 6 μl 分別與 200 μl 的 reagent(A sample)和 buffer(A sample blank)藥劑至於 96 well 盤內五分鐘(37 °C)後以波長 520 nm 測定,將其所得反應數值相減(ΔA sample = A sample - A sample blank)。

3. 取 6 μl 的 standard 分別與 200 μl 的 reagent(A standard)和 buffer(A standard blank)藥劑至於 96 well 盤內五分鐘(37 °C)

後以波長 520 nm 測定,將其所得反應數值相減(ΔA standard = A standard - A standard blank)。

4. 甘油濃度(μmol/l)=ΔA sample x standard concentration(97μmol/l)

÷ΔA standard 。 二、 脂解酶(lipase)

1. 以 採 用 維 特 司 脂 酵 素 試 藥 片 ( Vitros chemistry products lipase

slides),測量機器使用全自動生化分析儀 DTSC ll(New York,

USA)。

2. 利用乾式化學法,使用維特司脂酵素試藥片與維特司校正組三號 於維特司化學分析儀上測試。

3. 測量試藥片反應期間的兩個固定時間點,利用 540 nm 波長下的 反光度,並計算出兩個數值間的差異。一旦某一試劑批號完成校 正後,可套用軟體中的兩點速率數學模式及每片式藥劑的反光度 改變值,來計算出某支檢體中的脂肪分解脢活性。

附錄四 抗氧化生化分析方法

抗氧化生化分析方法 一、 製備去血紅素之血球溶胞液

1. 取分裝於微量離心管的紅血球與二次水以 1 : 4(V : V)的體積比,

充分混合脹破,再以 4 °C 下 10000 g 離心 15 分鐘,取得上清液 即為紅血球溶胞液。

2. 再將紅血球溶胞液與乙醇(ethanol): 氯仿(chloroform)(62.5:37.5)

的混合溶液以 5 : 8(V:V)的體積比,震盪混合 30 秒後,於 4 °C 下以 3000 g 離心 5 分鐘後,其上清液即為去血紅素之紅血球溶胞 液,冰存待分析。

二、 脂 質 氧 傷 害 指 標 ( thiobarbituric acid reactive substancesm, TBARS)

1. 以 Cayman TBARS assay kit (Ann Arbor,Michigan,USA)藥劑 進行檢測。

2. 取 2 ml 微量離心管中加入 30 ~ 50 μl 去血紅素之紅血球溶胞液 或標準液、10 μl 溶於甲醇的 4% 二丁基羥基甲苯(butylated hydroxytoluene, BHT)、200 μl 10.1 N 鹽酸(hydrochloric acid, HCl)、 200μl 溶於 PBS 的 0.5% 硫代巴比妥酸(2-thiobarbituric acid,

TBA),充分混勻後,置於 60 °C 之培育箱 1 小時。

3. 再置於 4 °C 下 10 分鐘停止反應,再移置室溫下回溫 5 分鐘後 4. 加入 600μl 正丁醇(n-butanol),均勻混合後,以 10000 g 離心

3 分鐘。

5. 取 200μl 上清液加入微量檢測盤,使用微量盤讀表儀(DYNEX

(Chantilly,Virgnia,USA)的 Spectra MR)以 OD540 進行照 射讀取其吸光值,再依標準曲線計算正確濃度,單位為 μM 或 nmol.gHb¯¹。

三、 超氧化歧化酶(superoxidase dismutase;SOD)

1. 使用 Randox(Ulster,Northern Ireland,UK)藥劑進行檢測,機 器採用 DYNEX(Chantilly,Virgnia,USA)的 Spectra MR。

2. 於 微 量 檢 測 盤 中 加 入 200 μl 稀 世 之 自 由 基 偵 測 劑 ( radical detector)與 10 μl 已稀釋去血紅素之紅血球溶胞液或標準液均勻 混合。

3. 在 5 分鐘 內 快速 加 入 20μl 稀 釋 之 黃 瞟 呤 氧 化 酶 ( xanthine oxidase),於室溫下避免光靜置 5 分鐘。

4. 在震動混合 15 分鐘後,使用微量盤讀表儀以 OD450 進行照射 讀取其吸光值,再依標準曲線計算正確濃度,單位為 U.ml¯¹ 或 U.gHb¯¹。

四、 過氧化氫酶(catalase)

1. 使用 Cayman CAT assay Kit(Ann Arbor,Michigan,USA)進行 檢測,機器採用 DYNEX(Chantilly,Virgnia,USA)的 Spectra MR。

2. 於 微 量 檢 測 盤 中 加 入 100 μl 的 CAT 分 析 液 、 30 μl 甲 醇

(methanol)、20 μl 已稀釋去血紅素之紅血球溶胞液或標準液。

3. 加入 30 μl 0.12% 的過氧化氫(H2O2)啟動反應,於室溫下避免 光線震動均勻混和 20 分鐘後,立即加入 30 μl 10 M 氫氧化鉀

(potassium hydroxide, KOH)終止反應。

4. 再加入 30 μl 22.8 mM Purpald 呈色劑,並於室溫下避免光線震動 均勻混合 10 分鐘。

5. 最後再加入 10 μl 65.2 mM 過碘酸鉀(potassium periodate, KIO4),

再一次於室溫下避免光線震動均勻混合 5 分鐘後,使用微量盤 讀表儀以 OD540 進行照射讀取其吸光值,再依標準曲線計算正 確濃度,單位為 U.ml¯¹ 或 U.gHb¯¹。

五、 穀胱甘肽過氧化酶(glutathione peroxidase;GPx)

1. 使用 Cayman GPx assay Kit (Ann Arbor,Michigan,USA)藥劑 進行檢測,機器採用 DYNEX (Chantilly,Virgnia,USA)的 Spectra MR。

2. 於微量檢測盤中加入 140 μl GPx 分析液、20 μl 10 倍 co-substrate mixture、20 μl 已稀釋去血紅素之紅血球溶胞液或標準液。

3. 再加入異丙苯基過氧化氫(cumene hydroperoxide),使其產生過 氧化氫啟動反應,立即使用微量盤讀表儀以 OD340 進行照射讀 取其每分鐘吸光值,至少 5 個時間點,單位為 U.ml¯¹ 或 U.

gHb¯¹。

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