一 、 酵 素 連 結 免 疫 吸 附 法 （ e n z y m e - l i n k e d i m m u n o s o r b e n t a s s a y , E L I S A ）
（ 一 ）、 血 漿 中 O P G 濃 度 之 分 析
以 酵 素 連 結 免 疫 吸 附 法 （ e n z y m e - l i n k e d i m m u n o s o r b e n t a s s a y , E L I S A ） 分 析 血 漿 中 O P G 濃 度 ， 採 用 商 業 試 劑 組 （ R & D S y s t e m s ） ， 以 抗 原 補 捉 法 （ a n t i g e n - c a p t u r e a s s a y ） 原 理 對 於 人 類 血 漿 中 O P G 濃 度 進 行 定 量 。 加 入 濃 度 為 2 . 0 µ g / m l ， 1 0 0 µ l 的 C a p t u r e a n t i b o d y 於 9 6 孔 盤 w e l l 中 ， 於 室 溫 （ 1 8 - 2 6 ℃ ） 避 光 靜 置 2 4 小 時 。 以 3 0 0 µ l 之 Wa s h B u f f e r 清 洗 4 次 ， 加 入 1 0 0 µ l 血 液 樣 本 與 4 0 0 0 p g / m l 的 r e c o m b i n a n t h u m a n O P G 線 性 等 倍 稀 釋 濃 度 之 標 準 品 ， 避 光 靜 置 兩 小 時 ， 再 以 3 0 0 µ l 之 Wa s h B u f f e r 清 洗 4 次 ， 加 入 濃 度 為 2 0 0 µ g / m l， 1 0 0 µ l 的 D e t e c t i o n a n t i b o d y 避 光 靜 置 兩 小 時 後 以 3 0 0 µ l 之 Wa s h B u f f e r 清 洗 4 次 ， 加 入 二 級 抗 體 s t r e p t a v i d i n c o n j u g a t e d t o h o r s e r a d i s h - p e r o x i d a s e 2 0 分 鐘 ， 以 3 0 0 µ l 之 Wa s h B u f f e r 清 洗 4 次 ， 最 後 加 入 s u b s t r a t e s o l u t i o n 靜 置 2 0 分 鐘 ， 加 入 5 0 µ l S t o p s o l u t i o n （ 1 N H2S O4） ， 以 E L I S A R e a d e r 4 5 0 n m 吸 光 值 測 量 ， R e f e r e n c e r e a d e r 測 量
6 5 0 n m 吸 光 值 。
H u m a n L e p t i n S t a n d a r d 線 性 等 倍 稀 釋 濃 度 之 標 準 品 ， 避 光 靜 置 兩 小 時 後 ， 再 以 2 0 0 µ l 之 Wa s h B u f f e r 清 洗 5 次 ， 加 入 5 0 µ l B i o t i n y l a t e d L e p t i n A n t i b o d y 避 光 靜 置 兩 小 時 後 以 2 0 0 µ l 之 Wa s h B u f f e r 清 洗 5 次 ， 加 入 5 0 µ l S t r e p t a v i d i n - P e r o x i d a s e C o n j u g a t e 避 光 靜 置 3 0 分 鐘 ， 以 2 0 0 µ l 之 Wa s h B u f f e r 清 洗 5 次 ， 最 後 加 入 5 0 µ l C h r o m o g e n S u b s t r a t e 靜 置 1 0 分 鐘 後 ， 加 入 5 0 µ l S t o p s o l u t i o n（ 0 . 5 N h y d r o c h l o r i c a c i d ），以 E L I S A R e a d e r 4 5 0 n m 吸 光 值 測 量 。
二 、 自 動 免 疫 分 析 儀 測 量 （ E l e c s y s 2 0 1 0 ）
（ 一 ）、 B e t a - c r o s s l a p s 的 濃 度 ：
自 動 免 疫 電 子 冷 光 儀 測 量 （ R o c h e E l e c s y s 2 0 1 0 , R o c h e D i a g n s t i c s , M a n n h e i m , G e r m a n y ） 以 電 化 學 發 光 免 疫 分 析 法
（ E l e c t r o c h e m i l u m i n e s c e n c e i m m u n o a s s a y , E C L I A ）針 對 人 類 血 漿 中 第 一 型 膠 原 蛋 白 的 分 解 產 物 （ b e t a - c r o s s l a p s ） 進 行 定 量 測 試 。 分 析 使 用 三 明 治 酵 素 連 結 免 疫 吸 附 法 （ s a n d w i c h E L I S A ） ， 首 先 取 5 0 µ l 的 血 液 樣 本 和 b i o t i n y l a t e d 具
a n t i - b e t a - C r o s s L a p s 的 單 株 抗 體 混 和 反 應 釋 出 血 漿 樣 本 中 的 抗 原 。 其 後 加 入 表 面 包 覆 s t r e p t a v i d i n 的 微 粒 子 和 釕 化 合 物
（ r u t h e n i u m , R u ） 標 記 b e t a - C r o s s L a p s 具 特 異 性 的 單 株 抗 體 之 後 ， 藉 由 生 物 素 （ b i o t i n ） 和 s t r e p t a v i d i n 結 合 的 交 互 作 用 形 成 三 明 治 複 合 物 。 當 樣 本 移 至 測 量 室 中 吸 取 反 應 混 合 物 ， 微 粒 子 會 被 磁 力 吸 引 到 電 極 表 面 ， 由 探 針 （ P r o C e l l ） 移 除 未 被 吸 引 的 物 質 。 之 後 利 用 電 極 電 壓 引 發 化 學 冷 光
（ c h e m i l u m i n e s c e n t ） ， 以 光 電 倍 增 管 （ p h o t o m u l t i p l i e r ） 進 行 偵 測 。 藉 由 儀 器 專 一 性 二 點 校 正 曲 線 及 試 劑 條 碼 所 提 供 的 曲 線 得 到 測 定 結 果 。
（ 二 ）、 副 甲 狀 腺 素 濃 度 ：
自 動 免 疫 電 子 冷 光 儀 測 量 （ R o c h e E l e c s y s 2 0 1 0 , R o c h e D i a g n s t i c s , M a n n h e i m , G e r m a n y ） 以 電 化 學 發 光 免 疫 分 析 法
（ E l e c t r o c h e m i l u m i n e s c e n c e i m m u n o a s s a y , E C L I A ）針 對 人 類 血 液 中 的 P T H 進 行 定 量 檢 測 。 分 析 使 用 三 明 治 酵 素 連 結 免 疫 吸 附 法 （ s a n d w i c h E L I S A ） ， 首 先 取 2 0 µ l 的 血 液 樣 本 和 b i o t i n y l a t e d 具 P T H 特 異 性 單 株 抗 體 混 和 反 應 釋 出 血 漿 樣 本 中 的 抗 原 。 其 後 加 入 表 面 包 覆 s t r e p t a v i d i n 的 微 粒 子 和 釕 化 合 物 （ r u t h e n i u m , R u ） 標 記 P T H 特 異 性 的 單 株 抗 體 之 後 ， 藉 由 生 物 素 （ b i o t i n ） 和 s t r e p t a v i d i n 結 合 的 交 互 作 用 形 成 三 明 治 複 合 物 。 當 樣 本 移 至 測 量 室 中 吸 取 反 應 混 合 物 ， 微 粒 子 會 被 磁 力 吸 引 到 電 極 表 面 ， 由 探 針 （ P r o C e l l ） 移 除 未 被 吸 引 的 物 質 。 之 後 利 用 電 極 電 壓 引 發 化 學 冷 光（ c h e m i l u m i n e s c e n t ），
以 光 電 倍 增 管 （ p h o t o m u l t i p l i e r ） 進 行 偵 測 。 藉 由 儀 器 專 一 性 二 點 校 正 曲 線 及 試 劑 條 碼 所 提 供 的 曲 線 得 到 測 定 結 果 。
（ 三 ）、 骨 鈣 蛋 白 （ O s t e o c a l c i n ）
自 動 免 疫 電 子 冷 光 儀 測 量 （ R o c h e E l e c s y s 2 0 1 0 , R o c h e D i a g n s t i c s , M a n n h e i m , G e r m a n y ） 以 電 化 學 發 光 免 疫 分 析 法
（ E l e c t r o c h e m i l u m i n e s c e n c e i m m u n o a s s a y , E C L I A ）針 對 人 類 血 液 中 的 N - M I D o s t e o c a l c i n 進 行 定 量 測 試。分 析 使 用 三 明 治
酵 素 連 結 免 疫 吸 附 法 （ s a n d w i c h E L I S A ） ， 首 先 取 2 0 µ l 的
進 行 偵 測 。 藉 由 儀 器 專 一 性 二 點 校 正 曲 線 及 試 劑 條 碼 所 提 供 的 曲 線 得 到 測 定 結 果 。
（ 五 ）、 皮 質 醇 （ C o r t i s o l ）
自 動 免 疫 電 子 冷 光 儀 測 量 （ R o c h e E l e c s y s 2 0 1 0 , R o c h e D i a g n s t i c s , M a n n h e i m , G e r m a n y ） 以 電 化 學 發 光 免 疫 分 析 法
（ E l e c t r o c h e m i l u m i n e s c e n c e i m m u n o a s s a y , E C L I A ）針 對 人 類 血 液 中 的 c o r t i s o l 進 行 定 量 檢 測 。 分 析 使 用 三 明 治 酵 素 連 結 免 疫 吸 附 法 （ s a n d w i c h E L I S A ） ， 首 先 取 2 0 µ l 的 血 液 樣 本 和 b i o t i n y l a t e d 具 c o r t i s o l 特 異 性 單 株 抗 體 混 和 反 應 釋 出 血 漿 樣 本 中 的 抗 原 。 其 後 加 入 表 面 包 覆 s t r e p t a v i d i n 的 微 粒 子 和 釕 化 合 物 （ r u t h e n i u m , R u ） 標 記 c o r t i s o l 特 異 性 的 單 株 抗 體 之 後 ， 藉 由 生 物 素 （ b i o t i n ） 和 s t r e p t a v i d i n 結 合 的 交 互 作 用 形 成 三 明 治 複 合 物 。 當 樣 本 移 至 測 量 室 中 吸 取 反 應 混 合 物 ， 微 粒 子 會 被 磁 力 吸 引 到 電 極 表 面 ， 由 探 針 （ P r o C e l l ） 移 除 未 被 吸 引 的 物 質 。 之 後 利 用 電 極 電 壓 引 發 化 學 冷 光
（ c h e m i l u m i n e s c e n t ） ， 以 光 電 倍 增 管 （ p h o t o m u l t i p l i e r ） 進 行 偵 測 。 藉 由 儀 器 專 一 性 二 點 校 正 曲 線 及 試 劑 條 碼 所 提 供 的 曲 線 得 到 測 定 結 果 。
三 、 自 動 生 化 分 析 儀
（ 一 ）、 骨 特 異 性 鹼 性 磷 酸 酶 （ B - A L P ）：
使 用 自 動 生 化 分 析 儀 （ H i t a c h i 7 0 2 0 , H i t a c h i S c i e n c e s y s t e m s , L t d , L b a r a n k i , J a p a n ） 以 骨 特 異 性 鹼 性 磷 酸 酶 商 業 試 劑 組 L - T y p e A L P•J 分 析 採 集 之 血 清 B - A L P，主 波 長 4 0 5 n m，
副 波 長 5 0 5 n m ， 化 學 反 應 原 理 如 下 ：