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實驗模式二:

(a.)對照組(2):以 HLA-DR 基因轉殖豬皮膚移植至於喪失 T/B/NK 細胞功能 之 SCID 小鼠背部,不以 hPBMC 注射入 SCID 小鼠腹腔。於皮膚移植後第十天、

第二十八天各犧牲六隻小白鼠,作切片檢查及血液檢查。對照組(2)目前完成十 二隻 SCID 小鼠之皮膚移植(圖十八)。以 HLA-DR 基因轉殖豬皮膚移植至於喪失 T/B/NK 細胞功能之 SCID 小鼠背部之資料正整理中。

(b.)實驗組:以 HLA-DR 基因轉殖豬皮膚移植於喪失 T/B/NK 細胞功能之 SCID 小鼠背部,三週之後,以 hPBMC(human peripheral blood mononuclear cell)注 射入 SCID 小鼠腹腔,使 SCID 小鼠成為 hPBMC-SCID 小鼠。於皮膚移植後第十 天、第二十八天各犧牲六隻 hPBMC-SCID 小鼠,作切片檢查及血液檢查。預計完 成十二隻 hPBMC-SCID 小鼠之皮膚移植。實驗組尚未完成。

圖十八、以 HLA-DR 基因轉殖豬皮膚移植至於喪失 T/B/NK 細胞功能之 SCID 小鼠 背部,不以 hPBMC 注射入 SCID 小鼠腹腔。上、下圖:於豬皮膚移植後第二十一 天,豬皮膚表面部分因壞死而硬化。

三、後續需要完成之工作項目

1. 皮膚排斥時間:使用短暫免疫抑制劑下,以 HLA-DR 基因轉殖豬皮膚移植於 HLA-DR 基因轉殖鼠背部,皮膚排斥時間應該延長。使用短暫免疫抑制劑 下,HLA-DR 基因轉殖豬皮膚,未被 hPBMC-SCID 小鼠排斥的時間,應該 遠長於非基因轉殖豬皮膚,呈現統計學上顯著差異。

2. 豬皮組織切片檢查:使用短暫免疫抑制劑下,以 hematoxylin and eosin 染色 下觀察,HLA-DR 基因轉殖豬皮膚,應該呈現未被 hPBMC-SCID 小鼠排斥 的圖像,即很少淋巴球細胞侵潤;非基因轉殖豬皮膚,在 hPBMC 重建後 7 至 14 天內可見較明且較多淋巴球細胞侵潤。實驗組與對照組應該呈現統計學 上顯著差異。

3. 豬皮組織切片檢查:使用短暫免疫抑制劑下,以免疫組織化學染色 (Immunohistochemisty Stain),在光學顯微鏡下檢查 CD4、CD8-T 細胞,

HLA-DR 基因轉殖豬皮膚,應該呈現未被 hPBMC-SCID 小鼠排斥的圖像,

即很少 CD4、CD8-T 細胞侵潤,遠少於非基因轉殖豬皮膚。實驗組與對照組 應該呈現統計學上顯著差異。

4. 免疫細胞:使用短暫免疫抑制劑下,CD8+ , 及 CD4+CD25+ T 細胞變化,

使用 Flow Cytometry 方法來檢驗。實驗組 CD8+ T 細胞在豬皮移植後數值應 該都很低,CD4+CD25+ T 細胞應該在豬皮移植後三十天後,數值逐漸增 加。

5. HLA-II 基因轉殖豬皮膚,移植至人體時。應該可以減緩不少急性細胞性排斥 反應程度。

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四、對於學術研究、國家發展及其他應用方面之貢獻:

1. 建立模擬人類單核白血球排斥豬皮的動物試驗,檢驗 HLA-DR 基因轉殖 豬皮膚是否可以預防異體移植之急性細胞性排斥。

2. 多種基因轉殖豬 hDAF, HLA-II 之產製成功,使用基因轉殖豬器官之動物 試驗及前臨床試驗,必刻不容緩地進行,以求證基因遺傳工程產製之豬 器官,可否代替人類器官,普遍地被使用在人體移植上,挽救瀕臨死亡 邊緣之末期器官衰竭病人,並解決人類器官捐贈短缺之問題。

五、對於參與工作人員之訓練:

1. 增進工作人員對異體器官移植(allotransplantation),及異種器官移植

(xenotransplantation)中,急性細胞性排斥反應的認識。

2. 增進工作人員操作 SCID 小鼠實驗之經驗。增進工作人員操作 ELISA、

Flow Cytometry 檢驗,及操作免疫組織化學染色之經驗。

3. 增進工作人員操作 hPBMC 分離之經、及建立 hPBMC-SCID 小鼠實驗糢 式之經驗。

肆、討論 (Discussion)

1. 由上述實驗推論,以 HLA-DR 基因轉殖豬皮膚移植於 HLA-DR、HO-1、

HLA-DR/HO-1 基因轉殖鼠背部(實驗組),或以 HLA-DR 基因轉殖豬皮膚移 植於非基因轉殖鼠背部(對照組),可以以肉眼觀察,加上豬皮組織切片在 hematoxylin and eosin 染色下觀察,可以判定,所有豬皮都在移植後 14 天內被 小鼠排斥,可見明顯淋巴球細胞侵潤。實驗組與對照組沒有明顯差異(圖十 一、十二)。

2. TNF-、IL-2、IL-6 細胞激素的變化,移植後之數值參差不齊,沒有一致的趨 勢,無法區分實驗組與對照組差異,故不是好指標。 Normal Saline Solution 後,大幅減少小鼠術後死亡。

7. 往後實驗,應該增加免疫抑制劑的使用,抑制 CD8+ T 細胞排斥作用,直到

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