30 個肺腺癌檢體中，12 個檢體的癌組織有 Cry1 甲基化。而這 12 個癌
組織經免疫組織化學染色CRY1 分析，8 個檢體呈陰性染色，3 個檢體表現
異質性陽性染色，1 個檢體呈現均質性陽性染色【表四】。
另外 18 個癌組織 Cry1 無甲基化的檢體中，經免疫組織化學染色
CRY1，9 個檢體呈陰性染色，7 個檢體呈現異質性陽性染色，2 個檢體呈現
均質性陽性染色。30 個肺腺癌檢體中，有 7 個檢體其癌組織與非癌組織 Cry1
均有甲基化現象。這7 個檢體經免疫組織化學染色 CRY1 分析，癌組織部份
5 個呈現陰性染色，1 個呈現異質陽性，1 個呈現均質陽性。
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第五章 討論
無法全部解釋Cry1 基因活性升降的現像，必然還有其他未知的因子在做調控。
一級的基因，此環環相扣正負回饋，造成週邊組織生物時鐘的節律會較視叉上核
CLOCK-BMAL1 異二聚體可與Per1、 Per2、 Per3、Cry1、Cry2、Tim 及 Rev-Erb α基因的強化子E-box 相結合。同時此 CLOCK-BMAL1 異二聚體也抑制 Bmal1
基因轉錄。REV-ERBα蛋白質進到細胞核內會抑制 Bmal1 與 Cry 基因轉錄
[36-39]。PER-CRY-CKIε複合體及 PER-TIM 異二聚體的作用抑制Per、Cry、Tim 與 Rev-Erbα基因的轉錄。Rev-Erbα基因轉錄減少，會造成 Bmal1 基因的去抑 制 （derepression），最終造成 Bmal1 基因轉錄。如此週而復始，構成一細胞內 的晝夜節律[36,40]。
Casein Kinase Iε（CKIε）是生物時鐘運作非常重要的調節因子，CKIε能
磷酸化 CRY1、CRY2、BMAL1 與 TIM 蛋白質。而這些蛋白質被磷酸化後不穩
定易被代謝掉，所以CKIε會影響細胞內生物時鐘的運作。另一個激酶 CKIδ 也
被發現會影響生物時鐘[41]，CKIδ與 CKIε同源性很高(在人類二個激酶 76%的 胺基酸是相同的)，在體外實驗發現 CKIδ 會磷酸化 PER1、PER2、CRY1、CRY2 與BMAL1 蛋白質[42.43]。另外 MAPK (Mitogen-activated Protein Kinase) 在體外 實驗也會磷酸化BMAL1 蛋白質[44]。
畫夜節律與細胞分裂是生物體內兩大基本功能。近來研究顯示，哺乳類動物 畫夜節律會影響細胞分裂的進行[45.46]。細胞週期包括染色體複製，細胞核分裂
及細胞質分裂。細胞週期的準備及控制主要在 G1 及 G2 期末[47]。這段期間特
稱為G1/S 檢查站與 G2/M 檢查站（chockpoint），在這段期間細胞要檢查，分裂
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所需的酶及材料是否完備，細胞大小是否適當，染色體有否異常，染色體複製是
CDK2，G2/M 階段的調節蛋白是 Cyclin B，它專屬的調節蛋白激酶是 CDK1，要 讓細胞週期順利進行足夠的CDK 活性是必需的。Matsuo 與 Okamura 在動物實驗 發現有mCry 基因缺陷的老鼠，在肝臟再生的過程中，細胞週期無法正常的由 S
期進入M 期[20]。這表示有效率的細胞週期需要正常的生物時鐘運作。WEE1 蛋
白質會磷酸化 CDK1，使 CDK1 處在不活性狀態[50.51]。Wee1 基因轉錄減少則 相當於CDK1 活化增加。Cyclin B、Cdk1、Wee1 基因轉錄階段的調節可影響細胞 何時進入分裂期。CLOCK-BMAL1 異二聚體會加強Wee1 轉錄[52]，而 PER/CRY 復合體則會抑制Wee1 轉錄[53]。
夜節律是混亂不同步的，畫夜節律混亂則新陳代謝機能及細胞週期同樣也失去良 好的調控，這提供了「癌症時間治療學」的理論基礎。而我們在生物時鐘基因甲 基化的研究，發現肺腺癌畫夜節律的混亂無法用基因起動子是否發生甲基化來做 一合理的解釋，而其後面真正的原因探討已超出本研究設計範圍，不過是我們未 來研究探索的方向。
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