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熔點283-285℃,可溶於 pyridine,TLC 片以溶媒(CHCl3:EtOAc=7:

1)展開後,Rf值為 0.48,噴 vanillin/硫酸乙醇溶液,加熱後呈色變化

COOH

Figure 5-1 betulinic acid 之質譜(MS)斷裂方式

1H-NMR 圖譜(Chart 12)顯示 δ 0.82, 0.84, 0.93, 1.07, 1.20, 1.98 (s)

Table 5-2: 化合物 C-1 碳譜數據與文獻[39-41] betulinic acid 碳譜數據比

【四】C-2: 2-methoxyjuglone

(5-hydroxy-2-methoxy-1,4-naphthoquinone)

O

O OH

O CH3

1 2

4 3 6 5

7 8

化合物C-2 氯仿層中得到,為橘黃色針晶,以甲醇再結晶,熔點 149-151℃,可溶於氯仿、甲醇,其 TLC 片經溶媒(n-Hexane:CHCl3 = 1:4)展開後,Rf值為 0.4,噴 10% H2SO4溶液,加熱後呈黃色。

IR 圖譜(Chart 15)顯示 3420 cm-1有-OH 基的吸收訊號,1678 cm-1 有carbonyl group 的特性吸收,1596, 1470, 1443cm-1有芳香環之共軛 雙鍵特性吸收。

MS 圖譜(Chart 16) M+ ( m/z %)顯示分子量為 204.2,推測分子式 為C11H8O4

1H-NMR 圖譜(Chart 17)顯示 δ 12.23 (1H, s, OH)為 C-5 連接-OH 的訊號。δ 7.69 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 7.61 (1H, dd, J =8.0 and 2.0 Hz, H-7), 7.28 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6)為 Vicinal Naphthalene Hs 的原子訊 號。另外,δ 3.93 (3H, s, OCH3)為甲氧基之訊號。

13C-NMR 圖譜(Chart 18)中顯示共有十一個碳原子吸收訊號,其 中δ 179.1, δ 190.5 為 1,4-naphthoquinone 上 carbonyl group 的碳原子吸 收訊號,δ 160.8 為 C-5 上接 hydroxyl group 之碳原子吸收訊號,δ 56.4 為C-2 上甲氧基之碳原子訊號。

13C-NMR 圖譜(Chart 18) DEPT 圖譜(Chart 19)中顯示共有十一 個碳原子吸收訊號,其中有一個碳原子訊號是屬於CH3,為δ 56.4 (2- OCH3)。有四個碳原子訊號屬於 CH,分別為 δ 135.4 (C-7), 125.1 (C-8), 119.5 (C-6), 109.4 (C-3)。其餘的六個碳原子訊號屬於四級碳,分別為 δ 160.8 (C-5), 190.5 (C-4), 179.1 (C-1), 100.1 (C-2), 130.8 (C-9), 113.9 (C-10)。另外,δ 56.4 為 C-2 上之-OCH3基之吸收訊號。

綜 合 上 述 資 料 與 文 獻[43-45]比 對 , 確 認 此 化 合 物 之 結 構 為 2-methoxyjuglone(5-hydroxy-2-methoxy-1,4-naphthoquinone)。

【五】C-3: mixture of betulinic acid and ursolic acid

結晶,熔點 285-290℃,可溶於 pyridine,TLC 片以溶媒(CHCl3: EtOAc=7:1)展開後,Rf值為0.4,噴 vanillin/硫酸乙醇溶液,加熱後 呈色變化為紅色→紫紅色→褐色,推測可能為三萜類化合物。

1H-NMR 圖譜(Chart 22)顯示 δ 0.76, 0.79, 0.85, 0.94, 1.20, 1.88 (s) 分別為六個四級碳上甲基之質子訊號,δ 4.60, 4.73 (2H, br. S)為雙鍵 上H-29 之質子訊號;δ 3.49 (1H, m)為 C-3 連接-OH 之次甲基的質子 訊號;5.17 (1H, s)為環上雙鍵 H-12 之質子訊號,2.12 (dd)則為 H-18 的質子訊號。

13C-NMR 圖譜(Chart 23)顯示 δ 150.1, 109.3 分別為環外雙鍵 C-20, C-29 之碳原子訊號;δ 78.14, 80.71 為帶有-OH 基 C-3 之碳原子訊號;

δ 170.6 為 carbonyl group 之碳原子訊號;δ 138.3, 125.4 分別為環上雙 鍵碳原子訊號。

綜合以上光譜資料並與文獻[42,46-48]比對,推測其結構應為 mixture of betulinic acid and ursolic acid。

【六】C-4:

β

-sitosterol-3-O

-glucoside

1H-NMR 圖譜(Chart 27)顯示 δ 5.36 (1H, br)為雙鍵上 H-6 之質子 訊號;δ 5. 05 (2H, d)為 glucose 上 H-1’之質子訊號;δ 0.61-2.31 (m)為 植物固醇特有訊號,δ 3.95-4.53(m)為糖基上質子的吸收訊號。

13C-NMR 圖譜(Chart 28)顯示δ 140.4 (C-5), 121.5 (C-6)分別為環 上雙鍵C-5 及 C-6 之碳原子訊號,δ 79.2 (C-3)為帶有-OH 基的 C-3 之 碳原子訊號,δ 102.0, 77.8, 74.7, 71.1, 62.2, 59.9 為 glucose 上之碳原子 訊號。

綜 合 以 上 光 譜 資 料 經 與 文 獻 [40] 比 對 推 測 其 結 構 應 為 β-sitosterol-3-O-glucoside。

【七】E-1: astilbin (dihydroquercetin 3-O-rhamnoside)

1H-NMR 圖譜(Chart 32)顯示在 δ 4.64 (dd, J=10Hz)、δ 5.20 (d, J=10 Hz)為 C-ring 上 H-2, H-3 之訊號;δ 6.17 (d, J=2.0 Hz), 6.37(d, J=2.0 Hz)分別為 A 環上 H-6, H-8 的質子訊號,且彼此間相互遠程偶 合形成雙峰;δ 6.89 (d, J = 8.8 Hz), 7.73 ( dd, J = 8.8 and 2.1 Hz), 7.29 ( d, J = 2.1 Hz)為一組 ABX 型式之訊號,將其歸屬為 B-ring 上 H-5’, H-6’, H-2’的質子訊號,其中 H-6’分別與 H-5’有產生鄰位偶合( J = 8.8 Hz),而與 H-2’產生遠程偶合( d, J = 2.1 Hz),符合 5, 7, 3’, 4’取代 flavonol 之結構特徵,推測具有 dihydroquercetin 之基本骨架。另外,

δ 1.04 (d, J=6.0 Hz, H-6’’)及 δ 3.06-3.96 (m)為糖基上質子的吸收訊 號。

13C-NMR 圖譜(Chart 33)中顯示 δ 194.2 (C-4)為黃酮類之 carbonyl carbon 吸收訊號,δ163.7 (C-5), 167.3 (C-7), 144.8 (C-3’), 145.6 (C-4’),

分別為帶有-OH 基之 C-5, 7, 3’, 4’的吸收訊號。δ 82.2 (C-2), 76.9 (C-3) 為C-ring 上碳之吸收訊號。

13C-NMR 及 DEPT 圖譜(Chart 33, Chart 34)中顯示 1 個甲基 (CH3),12 個三級碳(CH)及 8 個四級碳(C)等 21 個碳原子訊號。

Table 5-3:化合物 E-1 碳譜數據與文獻[49-50,54]astilbin 碳譜數據比對表

C-1’’ (anomeric carbon) 100.48 100.02 C-2’’ 70.50 70.39

【八】E-2: kaempferol 3-O-rhamnoside

1H-NMR 圖譜(Chart 37)顯示在 δ 6.16 (d, J=2.0 Hz)、 6.36 (d, J=2.0 Hz)分別為 A 環上 H-6, H-8 的質子訊號,且彼此間相互遠程偶 合形成雙峰;δ 7.74 ( d, J = 8.8 Hz, H-2’ and H-6’)及 δ 6.90 (d, J = 8.8 Hz, H-3’ and H-5’)有偶合關係,分別為 B-ring 上 H-2’, H-6’及 H-3’, H-5’之吸收訊號,為一對 A2X2型式之芳香族訊號,符合5, 7, 4’取代 flavonol 類之結構特徵,推測具有 kaempferol 骨架。另外,δ 0.78 (d, J=6.0 Hz, H-6’’)及 δ 3.09-3.96 (m)為糖基上質子的吸收訊號。

13C-NMR 圖譜(Chart 38)中顯示 δ 177.8 (C-4)為黃酮類(flavonoids) 之carbonyl carbon 吸收訊號,δ161.4 (C-5),164.9 (C-7),160.1 (C-4’),

分別為帶有-OH 基之 C-5, 7, 4’的吸收訊號。δ 130.8 (C-2’), 130.8 (C-6’) 及115.6 (C-3’), 115.6 (C-5’)為 B-ring 上碳之吸收訊號。δ 99.0 (C-6), 94.0 (C-8)為 A-ring 上碳之吸收訊號。另外,δ 156.7 (C-2), 134.3 (C-3) 為C-ring 上碳之吸收訊號。

13C-NMR 及 DEPT 圖譜(Chart 39, Chart 40)中顯示 1 個一級碳 (CH3),11 個三級碳(CH)及 9 個四級碳(C)等 21 個碳原子訊號。

Table 5-4:化合物 E-2 碳譜數據與文獻[49-50]kaempferol 3-O-rhamnoside

C-1’’(anomeric carbon) 101.88 102.5 C-2’’ 70.5 71.6

第二節 臺灣黃杞之藥理活性試驗討論

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