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至目前文獻資料,尚未有樟芝對乙型肝炎病毒影響之研究,故本實 驗擬研究樟芝多醣體對抗乙型肝炎病毒之活性。下文就乙型肝炎病毒 加以介紹。

一、乙型肝炎病毒之構造及其感染性

屬於肝病毒科(Hepadnaviridae)的人類乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,簡稱 HBV),是已知最小的 DNA 病毒。它含有環狀 DNA 長 (負)[L(-)]股及短(正)股[S(+)]的環狀 DNA (54,55,56)。此 DNA 包在核心顆 粒(core particle)中(57,58),核心顆粒內有 DNA 聚合? (Polymerase),與其 長股 5’端 DNA 結合在一起(59),。核心顆粒中亦含有蛋白質激? (protein kinase)活性(60)。核心顆粒外圍則由病毒的表面抗原(HBsAg)及宿主的脂 質所組成的外套(envelope)覆蓋,形成 42nm 具有感染性的鄧氏顆粒 (Dane particle) (61,62)。除了鄧氏顆粒外,尚有不具感染性的次病毒顆粒 (subviral particle),如直徑為 22nm 的球型顆粒,及直徑亦為 22nm 但具 不同長度的長柱型顆粒(63),因顆粒內不含病毒核酸,故不具感染性。

感染乙型肝炎病毒,會引起急性肝炎外,可能會變成慢性肝炎、

肝硬化,且與肝癌的形成有密切的關係(64,65,66)。台灣的乙型肝炎之感染 率大約為 85%,而其中有 15%左右的人會轉變成為帶原者。乙型肝炎 帶原者,極大多數發展成肝癌。表面抗原陽性者獲得肝癌比表面抗原

二、乙型肝炎病毒轉錄(transcription)及訊息 RNA

乙型肝炎病毒感染了宿主後,主要的轉錄產物為 3.5Kb 及 2.1Kb RNA(67),其中 3.5Kb RNA 可分為兩種,較長的 3.5Kb RNA、又稱前核 心 RNA(precore RNA),並經轉譯後 process 成為可釋出之 e 抗原 (HbeAg) , 可 作 為 轉 錄 RNA(mRNA) 以 產 生 前 核 心 抗 原 (precore protein)。較短的 3.5Kb 轉錄 RNA,又稱為前基因體 RNA(prenomic RNA),它作為轉錄 RNA 以產生核心抗原及 DNA 聚合? ,同時可被包 入病毒核心顆粒中,而被用來作為合成 DNA 之模版,以保存病毒之基 因訊息。這兩種 3.5Kb RNA 的 3’端都結束於 HBV 基因群上僅有的 polyadenylation site。2.1Kb RNA 之 5’端起點有三處,一處位於 pre-S2 區域上游,可用以合成中型表面抗原(middle HBsAg);另兩群位於 pre-S2 區域中間,只能用以合成主要表面抗原(Major HBsAg) (68,69)。 乙型肝炎病毒轉染的細胞中(69)或是在病毒感染的組織中(68),可見 到一種含量較少的 2.4Kb 訊息 RNA,它的 5’端起點只有一處,位於 pre-S1 區域上游,可以合成大型表面抗原(large HbsAg) (70)

三、乙型肝炎病毒之轉譯(translation)及其抗原(antigen)

長股的 DNA 共有四個開放式編閱結構(open reading frame, ORF) 即 S、C、P 及 X 區域,分別譯製(encoded)表面蛋白、核心蛋白、DNA 聚合體及 X 蛋白,在血清中可測到表面抗原、核心抗原和 e 抗原。

1. 表面抗原(Hepatitis B Surface Antigen, HBsAg)

表面抗原有三種,即主要表面抗原,中型表面抗原和大型表面抗 原(71)。由 S 基因合成主要抗原,pre-S2 加上 S 基因可合成中型表面抗 原,pre-S1,pre-S2 與 S 基因合起來可合成大型表面抗(72,73,74,75)

(1)主要表面抗原(the major HBsAg)

主要表面抗原,以 p24 蛋白和 gp27 醣蛋白兩種型式存含有 226 個 胺基酸部分的 p24 及 gp27 並以雙硫鍵(disulfide bond)結合成二聚體 (dimer)存在,若雙硫鍵分解,抗原性也劇降(73)

(2)中型表面抗原(the middle HBsAg)

中型表面抗原以單醣基的 gp33 醣蛋白和雙醣基的 gp36 醣蛋白兩 種型式存在,含有 281 個胺基酸(76)

(3)大型表面抗原(the large HBsAg)

大型表面抗原以 p39 蛋白和 p42 醣蛋白兩種型式存在,含有 389 個胺基酸(ay 亞型)或 400 胺基酸(ad 亞型) (75)。可與肝細胞細胞膜結合

(77)。對於 pre-S2 基因譯製的抗原決定基(antigenic determinant)和 pre-S1 基因譯製的抗原決定基(21-47 位置的胺基酸)若以可結合這些區域的單 株抗體注射入黑猩猩,可使黑猩猩避免受 B 型肝炎病毒的感染(88)

2. 核心抗原(HbcAg)與 e 抗原(HBeAg)

核心抗原(HBcAg)含 183 個胺基酸,可自行組合成具正二十面體結 構之核心顆粒。實為 180 個 p21 的蛋白顆粒(為水溶性),可直接刺激 B 細胞產生抗體,而不需要依賴 T 細胞(79)

乙型肝炎病毒 e 抗原(HBeAg)為 Pre-C 基因和基因 C 所譯製的兩個 次單位 p17 組成,(71,80,81,82)。 e 抗原具水溶性,它並不像核心抗原一 般形成顆粒,因此抗原性強度就不如核心抗原,而需仰賴 T 細胞的幫 忙去刺激 B 細胞產生抗體(79)

四、乙型肝炎病毒之生活史(life cycle) 乙型肝炎病毒之生活史,可分成:

1.附著(attachment):乙型肝炎病毒進入宿主體內,具有趨肝性

2.貫穿(penetration)和去外套(uncoating):目前相信 HBV 是經由接

4.轉錄(transcription)和轉譯(translation):以 cccDNA 為模板,利用 宿主轉錄系統,開始轉錄出病毒 RNA。這些 RNA 包括 3.5Kb 的前基 因體 RNA(pregenomic RNA)及次基因體 RNA(subgenomic RNA)。病毒 RNA 再利用宿主轉錄系統,轉譯出病毒蛋白,包括各種表面抗原、核 心蛋白、e 抗原、DNA 聚合體以及 X 蛋白。

5. 包 裹 (packaging) 、 核 套 體 形 成 (encapsidation) 和 組 合 (assembling):當病毒的核心蛋白、DNA 聚合體以及前基因體 RNA 的 量足夠時,病毒蛋白開始聚集,進行包裹作用,將 3.5Kb 的前基因體 RNA 及 DNA 聚合體包裹核心顆粒內,形成核套體。此核套體與排列 在內質網上的病毒表面抗原組合成帶有宿主脂質為外套的病毒體 (virion)。

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