1.水黃皮野外帶節莖段之表面消毒
先以流水處理2 h再以安期消毒液稀釋300倍置於超音波震盪器震盪30 sec，然 後再於70％酒精震盪30 sec，兩步驟皆以二次蒸餾水沖洗4次，而後以次氯酸鈉 (NaOCl) 消毒。比較次氯酸鈉溶液 (含0.1％ (v/v) tween 20) 1-5%濃度於10及20 min的消毒效果 (表6) ，於培養第10天記錄汙染率，且考慮到消毒藥劑過量可能造 成細胞喪失誘導活性，故於1個月後記錄芽體誘導率，共10個處理，每瓶放1個培 殖體，重複7次。
表 6 水黃皮帶節莖段之表面消毒試驗組合
Table6. Surface sterilization of nodal stems of P. pinnata by using different combined test for disinfectants
Test code NaOCl Time (%) (min)
A1 1 10
A2 1 20
A3 2 10
A4 2 20
A5 3 10
A6 3 20
A7 4 10
A8 4 20
A9 5 10
A10 5 20
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2.無菌種子苗之培養與生長
以MS、1/2MS及WPM為基礎培養基，並以MS或WPM添加1 mg/L BA或0.35 mg/L GA3的組合進行試驗，如下表 (表7) ，以125 mL三角瓶分裝，每瓶50 mL。2 個月後記錄發芽率、發根率與根莖平均長度，7種處理，每瓶放入1個培殖體，重 複5次。
表 7 水黃皮無菌種子苗誘導在 MS、1/2MS 及 WPM 之組合
Table7. Aseptic seedlings induction of P. pinnata in MS 、 1/2MS and WPM compositions
Medium＼PGRs Test code
1/2MS 1
MS 2
WPM 3
MS+0.35 mg/L GA3 4
WPM+0.35 mg/L GA3 5
MS+1 mg/L BA 6
WPM+1 mg/L BA 7
3.水黃皮之微體繁殖
(1) 水黃皮芽體誘導試驗 a、無菌苗為培殖體
Purohit 及 Singhvi 於 1998 指出水黃皮的微體繁殖，以 MS 培養基較常被使用，
故以 MS 為基礎培養基添加不同濃度的 TDZ：0.1、1、2、3 mg/L 及 BA：0、0.5、
1、2 mg/L 並另外添加 NAA：0、0.5、1、2 mg/L，並以較佳結果再以 MS 加入 IBA：
0、0.5、1、2 mg/L 的組合誘導芽體，每錐形瓶放入 4 個培殖體，重複 3 次。
b、野外材料
為維持萌蘗活性，材料皆為當天早上約七點採回直接使用，選取健康無病蟲 害之野外萌蘗，以清水沖洗表面並將萌蘗切成約 1 cm 帶腋芽之莖段及葉片，流水
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處理 2 h 後，進行表面消毒後，以 MS 為基礎培養基添加 0.1 mg/L 及 0.5 mg/L NAA 與 1-5 mg /L BA 的組合，葉片每瓶接種 1 個培殖體，每組做 10 瓶，重複 3 次；側 芽生長點，每瓶放入 1 個培殖體，重複 5 次。誘導芽體結果皆為 1 個月後計算其 芽體數量，並觀察紀錄之。
(2) 水黃皮之芽體伸長試驗
取 3 種培殖體：A 帶節莖段 B 子葉節所誘導的芽體 (將 3-5 個芽體為一個培殖 體)C 生長點作芽體伸長試驗。放入 MS 添加不同濃度的 BA 及 GA3之組合 (表 8) ， 使用 125 mL 三角瓶，每瓶裝 50 mL 培養基，每錐形瓶放入 4 個培殖體，重複 3 次，
1 個月後記錄芽體伸長長度。
表 8 水黃皮芽體伸長在 MS 添加 BA 與 GA3之試驗組合
Table 8. Shoot elongation of P. pinnata in MS with different combination of BA and GA3
Medium code
GA3 (mg/L)
0 0.1 0.5 1 1.5
BA(mg/L)
0 BG1 BG2 BG3 BG4 BG5
0.1 BG6 BG7 BG8 BG9 BG10
0.2 BG11 BG12 BG13 BG14 BG15 0.5 BG16 BG17 BG18 BG19 BG20
(3) 水黃皮芽體誘導發根之試驗
以子葉節誘導出之芽體為培殖體，將已抽長約 2-3 cm 的芽體放入 1/2MS 或 MS 添加 IBA 組合 (表 9) 進行發根試驗，以 100 mL 試管分裝，每管含 25 mL 培 養基，共 8 個處理，每瓶放 1 個培殖體，重複 11 次。1 個月後記錄發根數及發根 長度。
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表 9 水黃皮發根試驗在 MS 或 1/2MS 添加 IBA 之組合
Table 9. Root induction induction of P. pinnata in MS or 1/2MS with compositions of IBA
Medium (strength) + auxin (mg/L) Test code
MS (½ ) 1
MS 2
MS (½ ) + IBA (0.5) 3
MS (½ ) + IBA (1) 4
MS (½ ) + IBA (1.5) 5
MS + IBA (0.5) 6
MS + IBA (1) 7
MS + IBA (1.5) 8
(4) 水黃皮組培苗之馴化
選取發根試驗中已完全展葉且根長達 2-4 cm 植株作出瓶馴化，先以自來水徹 底清洗後再移植到經過高溫高壓殺菌的蛭石/泥炭土/土壤=1：1：1 的混合介質中。
介質保持完全濕潤而不積水，培殖容器置於簡易網室，並將容器以透明塑膠袋罩 住，每 2 週剪去塑膠袋一邊的角落，於第 6 週移除塑膠袋並記錄其存活率及莖平 均長度，共馴化 85 盆植株。
4.水黃皮體胚之誘導
考慮種子為未成熟階段，不宜使用熱水 (60℃) 處理種子，故試驗材料材料皆 為當天早上約七點採回直接使用，將各種發育階段的種子進行表面消毒後，以解 剖刀及鑷子去除種皮，以未成熟胚之帶子葉之胚及半成熟胚之胚及子葉為培殖 體，培養於 Kn 及 BA 與 2,4-D 之組合表 (表 10) 及 TDZ：0.5、1、2 及 3 mg/L 中 進行培養。以 125 mL 三角瓶分裝，每瓶 50 mL，共 22 種處理，每錐形瓶放入 8 個培殖體，重複 3 次，2 個月後記錄誘導結果。
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表 10 水黃皮體胚誘導在 MS 添加 Kn、BA 與 2,4-D 之組合
Table10. Somatic embryogenesis induction of P. pinnata in MS with Kn、BA and 2,4-D
Medium code
2,4-D (mg/L)
1 2 3
Kn (mg/L) 0.1 KD1 KD2 KD3
0.5 KD4 KD5 KD6
1.5 KD7 KD8 KD9
BA (mg/L) 0.5 BD1 BD2 BD3
1.5 BD4 BD5 BD6
2.5 BD7 BD8 BD9