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3-1 自組式毛細管電泳/雷射誘導螢光分析儀(CE-LIF)

圖 3-1 為自組式毛細管電泳/雷射誘導螢光分析儀裝置圖,由光電倍 增管(PMT)收光。以藍光雷射作為誘導雷射的光源,選用內徑為 50 µm 或是 75 µm 的石英熔矽毛細管柱分離待測物。當毛細管內注滿緩衝溶 液後,以抬高虹吸進樣的方式注入待測樣品,接著施加以高壓電,跑電 泳分離。

實驗中所使用的光源為 100 mW,波長為 473 nm 的藍光雷射,利 用光學顯微鏡的聚焦鏡聚光,聚焦於毛細管上作為誘導螢光的光源。在 與入射光約 90 度角的位置上架設一個倍率為 20 倍的光學顯微鏡接 物鏡,用以收集產生的螢光,再由聚焦鏡聚光,經由單光器(ARC Model sp-300i)分光後,再經由兩片聚焦鏡使光平行再聚焦,經由單光器(ARC Model sp-500i)分光後,最後再藉由光電倍增管放大產生電位差,經過 訊號轉換器(PCI-6221)轉換,連接至電腦搭配 LabVIEW 程式讀取實 驗數據,或是分光後直接由 Charge-coupled device(CCD)連接至電腦 做偵測。

第三章 儀器、藥品與實驗方法

圖 3-1 自組式毛細管電泳/雷射誘導螢光分析儀

(使用光電倍增管偵測分析物產生的螢光)

3-2 儀器及周邊設備列表

毛細管螢光電泳相關儀器

名稱 製造廠商 型號 示意圖及規格

Diode Laser

BIO-ACCORD SCIENTIFIC &

INSTRUMEN T CO.,

Class III laser

Output power <100 mW Wavelength 430-490 nm

Monochromator

Acton Research Corporation

(ARC)

Model SP-500i

Monochromator

Acton Research Corporation

Acton Research Corporation

(ARC)

Model PD-438

第三章 儀器、藥品與實驗方法

Focal Length 8.5 mm

三向微動平台 Thorlabs, Ltd, UK 25 mm Travel

Post and holder Onset Electro-optics

EP01N EP02N EP03N

Base and holder Onset Electro-optics

ESB03S ESB01 ESB02S

毛細管 J&W Scientific, Silica .075

(.05)

I.D. 75µm I.D.

DAQ 介面卡 National

Instruments PCI-6221 Shielded I/O

Connector Block for DAQ

Devices with 68-Pin Connectors

National

Instruments SCB-68

LabVIEW National Instruments

LabVIEW 2010 類比/數位

轉換器 訊華 ADC-9724 supply power 110 V output signal ±10 V

資料處理系統 訊華 SCSI 32 ---

第三章 儀器、藥品與實驗方法 Lamp、Flash Lamp 波長:220 ~ 850 nm

Speed : 6000 rpm/min 1.5 mL

過濾器 Basic Life PL-6054541 13 mm syringe filter with 0.45 µm nylon membrance 微波爐 SAMPO RE-081M1 功率範圍:160 - 800 W

震盪頻率:2450 MHz

3-3 藥品列表

第三章 儀器、藥品與實驗方法

(2C-B) 刑事鑑識中心

isothiocyanate isomer I

(FITC)

Methyl alcohol

(MeOH)

Sodium dodecyl sulfate

(SDS)

NaC12H25SO4

(Acros)

藥 Sodium tetraborate

Na2B4O7

(Acros)

Sodium hydroxide

NaOH

第三章 儀器、藥品與實驗方法

3-4 FITC 衍生物製備

3-4-1 安非他命衍生

衍生步驟是取 100 µL 溶於去離子水中的分析物溶液(六種鹵化安 非他命的藥物濃度各為 20 mg/L),加入 50 µL 的基質,基質溶液為 10 mM 的 sodium tetraborate 水溶液,將分析物與基質混合均勻之後,再 加入 50 µL 500 mg/L 的 FITC 溶於丙酮中的衍生試劑,在室溫下之暗 處靜置 12 小時衍生或是以 160 W 的微波爐加熱 5 分鐘微波衍生,待 衍生完成後,以 10 mM 的 sodium tetraborate 水溶液稀釋 20 倍,最 後得到的六種安非他命的濃度各為 0.5 mg/L。

100 µL 分析物溶液

50 µL Matrix

(10 mM sodium tetraborate)

50 µL FITC

放置或微波衍生

以 10 mM 的 sodium tetraborate 稀釋 20 倍

3-4-2 苯乙胺 2C 系列衍生

衍生步驟是取 50 μL 溶於乙醇的分析物溶液(五種苯乙胺 2C 系 列藥物濃度各為 2 × 10-5 M 之混合溶液),加入 100 μL 的基質,基質 組成為 20 mM 硼酸與 20 mM 四硼酸鈉混合水溶液,將分析物與基質 混合均勻之後,再加入 100 μL 的 FITC 衍生試劑,濃度為 5 × 10-4 M,最後於室溫下之暗室中靜置 10 小時,即衍生完成,衍生後溶液中 五種衍生物的濃度各為 4 × 10-6 M。

50 µL 分析物溶液

100 µL Matrix

(20 mM sodium tetraborate)

100 µL FITC

放置或微波衍生

以 20 mM 的 sodium tetraborate 稀釋 20 倍

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