3-1 自組式毛細管電泳/雷射誘導螢光分析儀(CE-LIF)
圖 3-1 為自組式毛細管電泳/雷射誘導螢光分析儀裝置圖,由光電倍 增管(PMT)收光。以藍光雷射作為誘導雷射的光源,選用內徑為 50 µm 或是 75 µm 的石英熔矽毛細管柱分離待測物。當毛細管內注滿緩衝溶 液後,以抬高虹吸進樣的方式注入待測樣品,接著施加以高壓電,跑電 泳分離。
實驗中所使用的光源為 100 mW,波長為 473 nm 的藍光雷射,利 用光學顯微鏡的聚焦鏡聚光,聚焦於毛細管上作為誘導螢光的光源。在 與入射光約 90 度角的位置上架設一個倍率為 20 倍的光學顯微鏡接 物鏡,用以收集產生的螢光,再由聚焦鏡聚光,經由單光器(ARC Model sp-300i)分光後,再經由兩片聚焦鏡使光平行再聚焦,經由單光器(ARC Model sp-500i)分光後,最後再藉由光電倍增管放大產生電位差,經過 訊號轉換器(PCI-6221)轉換,連接至電腦搭配 LabVIEW 程式讀取實 驗數據,或是分光後直接由 Charge-coupled device(CCD)連接至電腦 做偵測。
第三章 儀器、藥品與實驗方法
圖 3-1 自組式毛細管電泳/雷射誘導螢光分析儀
(使用光電倍增管偵測分析物產生的螢光)
3-2 儀器及周邊設備列表
毛細管螢光電泳相關儀器名稱 製造廠商 型號 示意圖及規格
Diode Laser
BIO-ACCORD SCIENTIFIC &
INSTRUMEN T CO.,
Class III laser
Output power <100 mW Wavelength 430-490 nm
Monochromator
Acton Research Corporation
(ARC)
Model SP-500i
Monochromator
Acton Research Corporation
Acton Research Corporation
(ARC)
Model PD-438
第三章 儀器、藥品與實驗方法
Focal Length 8.5 mm
三向微動平台 Thorlabs, Ltd, UK 25 mm Travel
Post and holder Onset Electro-optics
EP01N EP02N EP03N
Base and holder Onset Electro-optics
ESB03S ESB01 ESB02S
毛細管 J&W Scientific, Silica .075
(.05)
I.D. 75µm I.D.
DAQ 介面卡 National
Instruments PCI-6221 Shielded I/O
Connector Block for DAQ
Devices with 68-Pin Connectors
National
Instruments SCB-68
LabVIEW National Instruments
LabVIEW 2010 類比/數位
轉換器 訊華 ADC-9724 supply power 110 V output signal ±10 V
資料處理系統 訊華 SCSI 32 ---
第三章 儀器、藥品與實驗方法 Lamp、Flash Lamp 波長:220 ~ 850 nm
Speed : 6000 rpm/min 1.5 mL
過濾器 Basic Life PL-6054541 13 mm syringe filter with 0.45 µm nylon membrance 微波爐 SAMPO RE-081M1 功率範圍:160 - 800 W
震盪頻率:2450 MHz
3-3 藥品列表
第三章 儀器、藥品與實驗方法
(2C-B) 刑事鑑識中心
isothiocyanate isomer I
(FITC)
Methyl alcohol
(MeOH)
Sodium dodecyl sulfate
(SDS)
NaC12H25SO4
(Acros)
試
藥 Sodium tetraborate
Na2B4O7
(Acros)
試
Sodium hydroxide
NaOH
第三章 儀器、藥品與實驗方法
3-4 FITC 衍生物製備
3-4-1 安非他命衍生衍生步驟是取 100 µL 溶於去離子水中的分析物溶液(六種鹵化安 非他命的藥物濃度各為 20 mg/L),加入 50 µL 的基質,基質溶液為 10 mM 的 sodium tetraborate 水溶液,將分析物與基質混合均勻之後,再 加入 50 µL 500 mg/L 的 FITC 溶於丙酮中的衍生試劑,在室溫下之暗 處靜置 12 小時衍生或是以 160 W 的微波爐加熱 5 分鐘微波衍生,待 衍生完成後,以 10 mM 的 sodium tetraborate 水溶液稀釋 20 倍,最 後得到的六種安非他命的濃度各為 0.5 mg/L。
100 µL 分析物溶液
50 µL Matrix
(10 mM sodium tetraborate)
50 µL FITC
放置或微波衍生
以 10 mM 的 sodium tetraborate 稀釋 20 倍
3-4-2 苯乙胺 2C 系列衍生
衍生步驟是取 50 μL 溶於乙醇的分析物溶液(五種苯乙胺 2C 系 列藥物濃度各為 2 × 10-5 M 之混合溶液),加入 100 μL 的基質,基質 組成為 20 mM 硼酸與 20 mM 四硼酸鈉混合水溶液,將分析物與基質 混合均勻之後,再加入 100 μL 的 FITC 衍生試劑,濃度為 5 × 10-4 M,最後於室溫下之暗室中靜置 10 小時,即衍生完成,衍生後溶液中 五種衍生物的濃度各為 4 × 10-6 M。
50 µL 分析物溶液
100 µL Matrix
(20 mM sodium tetraborate)
100 µL FITC
放置或微波衍生
以 20 mM 的 sodium tetraborate 稀釋 20 倍