分析類固醇參數探討

結合微胞液相層析法，為了找尋分析最適合條件，因此在移動相中探討 以下參數包括界面活性劑(SDS)的濃度、有機修飾劑種類及比例、溫度和流速，

比較各參數之影響並建立本研究最適合之分析條件。

(a) SDS 濃度

移動相中本研究選擇使用最廣泛的界面活性劑SDS，並配製不同SDS濃度，

因須超過其臨界微胞濃度(SDS=0.0082M)，SDS濃度範圍則選擇從0.045至 0.01M SDS來做探討；圖3.2為使用不同SDS濃度分析類固醇之滯留時間與解 析度，從層析圖譜中可明顯看到改變SDS的濃度確實對於分離類固醇成分有 所影響，研究中發現當SDS濃度越高，則會降低類固醇成分中HYD及PL間的 解析度，且高過於0.01 M SDS 濃度時解析度皆在1.0 以下；研究結果顯示使 用0.01M SDS 濃度時類固醇成分中HYD及PL 兩者間之解析度達到1.5以上，

因此最後選擇0.01 M SDS 作為最適合之移動相溶液之濃度。

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圖3.2 使用不同SDS濃度分析類固醇之滯留時間與解析度

SDS (M)

0.00 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05

Retent ion time

0.00 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05

Resolution

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(b) 有機修飾劑及其比例

使用不同有機修飾劑種類分析類固醇之滯留時間與解析度，選擇最常添加 異丙醇、丁醇及戊醇三種有機修飾劑來做探討，使用不同有機修飾劑分離四種 類固醇成分中，圖 3.3 結果顯示使用異丙醇及丁醇在類固醇成分 HYD 和 PL 間 分離效果沒有使用戊醇來的效果好，且使用戊醇時分離類固醇中 HYD 和 PL 成 分間解析度有達到 1.5 以上，相較之下戊醇分離效果更好。因此，以戊醇做為 移動相中最適當添加的有機修飾劑。

另外，改變有機修飾劑戊醇比例從 1-5%探討分離四種類固醇成分之影響，

圖 3.4 為改變有機修飾劑比例分析類固醇之滯留時間與解析度，結果顯示，當 有機修飾劑比例增加則會降低滯留時間，添加 5%戊醇時雖可大幅縮短滯留時 間，卻對於類固醇成分中 PS、HYD 與 PL 分離效果卻不佳，當戊醇比例降低 即可改善類固醇成分間的分離效果，但降至 1%戊醇時分離效果也不佳且導致 滯留時間延長；研究結果發現在添加 3%戊醇時可同時分離四種類固醇成分且 解析度達到 1.5 以上，因此最後選擇添加 3%戊醇作為最佳化條件。

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圖3.3 使用不同有機修飾劑分析類固醇之滯留時間與解析度

HPLC 層析條件如 3.3，移動相為 SDS：有機修飾劑=97：3，流速：1.0 mL/min

圖3.4 改變有機修飾劑比例分析類固醇之滯留時間與解析度

Pentanol (%)

sovlent

PeOH BuOH PrOH

Retention time

PeOH BuOH PrOH

Resolution

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(c) 溫度及流速

文獻指出溫度對於微胞液相層析則會影響其分離效果，研究中選擇在不同 溫度(室溫、40℃、50℃)分析類固醇之滯留時間與解析度，圖 3.5 結果顯示提高 溫度則會導致延長滯留時間，解析度並沒有比室溫分離效果來的好，還是以室 溫時分離效果最佳，因此，最後選擇室溫做為最佳化之分析條件。

另外，在不同流速(0.5、0.8、1.0 mL/min) 分析類固醇之滯留時間與解析度，

探討流速的改變對於分析物之分離效果，圖 3.6 結果顯示降低流速則會導致滯 留時間延長且無法改善類固醇成分 HYD 及 PL 間的分離效果，因此還是以 1 mL/min 做為最佳化之分析條件。

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flow rate (mL/min)

0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 1.1

flow rate (mL/min)

0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 1.1

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