第一章 緒論
1.3 文獻回顧
1.3.2 類固醇
「類固醇」(Steroids)又稱「腎上腺皮質固醇」(Corticosteroids)，存在 人體內腎上腺(adrenalgland)、睪丸(testis)、卵巢(ovary)中並於正常情況下 所分泌的一種荷爾蒙，有抗發炎及調節新陳代謝等作用，因此被廣泛用於 治療哮喘和關節炎等症狀[35]。
人體中腎上腺皮質所分泌「腎上腺皮質素」可區分三類(1)糖皮質類固 醇(glucocorticoids)：維持血壓及心臟血管功能，減緩免疫發炎反應；(2) 礦物皮質類固醇(mineralocorticoids)：調節鹽和水分的代謝；(3)雄性素 (androgens)：在男性體內主要維持第二性徵的發育。
類 固 醇 在 體 內 扮 演 很 重 要 的 角 色 ， 多 半 是 指 糖 皮 質 類 固 醇
（glucocorticoids），腎上腺產生如情緒、運動、手術、疾病或飢餓等壓力 [17]或人工合成的類似物[36]；最初用於治療腎上腺功能不全，至現今已 有許多化學合成藥物供臨床應用[37]。類固醇除了根據我們的生理需求，
適當調節醣類與鹽份的代謝來維持體內正常生理運作外，還可衍生為各種 不同的性荷爾蒙來促使男女不同性徵的表現，是維持生命不可或缺的重要 荷爾蒙，在醫學上被廣泛用於抗炎藥物[36, 38, 39]，臨床上也被應用於治 療許多炎症、過敏及腎上腺皮質功能不全相關的疾病並且預防不良免疫反 應[40-42]。
13
因此，本研究同時分析常見違法添加於化粧品中的荷爾蒙物質-類固醇 之分析方法開發，普賴松(Prednisone，PS) 、氫皮質酮(Hydrocortisone，
HYD)、
地塞米松(Dexamethasone，DEX) 和普力多寧(Prednisolone，PL) 及
其理化性質如表1.3所示。(a) 分析類固醇之相關研究
文獻中已有許多分析類固醇之方法，主要以高效能液相層析儀連接紫 外 / 可 見 光 偵 測 器 (HPLC-UV) 、 高 效 能 液 相 層 析 儀 連 接 螢 光 偵 測 器 (HPLC-FL)、高效能液相層析儀連接質譜儀(HPLC–MS)及微胞液相層析 (MLC)等分析方法如表1.4所示。
而化粧品原料種類繁多，許多配方中主要以許多油脂類、蠟類所組成，
若使用傳統逆相層析方式，在樣品進樣前需經繁瑣的前處理步驟且使用大 量有機溶劑；近年來，因微胞液相層析(Micellar Liquid Chromatography，
MLC)的興起已取代傳統液相層析法的另一種方式，MLC有許多的優點如 低成本、低毒性、揮發性低、可使用直接管柱注射法分析生理性流體樣品、
同時分離帶電和不帶電的溶質、用等度沖提就有梯度沖提的效果、避免前 處理的損失及安全性等優點[43, 44]。
14
外觀 White powder White powder White powder White powder
溶解度b 可溶於水、丙酮、
aHydrocortisone(HYD), Dexamethasone(DEX), Prednisolone(PL), Prednisone(PS)
b Martha Windholz, The Merck Index (1976)
15
表1.4 分析類固醇(Steroids)之相關研究
a Triamcinolone(TRI)、Cortisone(CS)、Prednisolone(PL)、Dexamethasone (DEX)、Prednisone(PS)、Hydrocortisone(HYD)、Cortisol(CL)、Corticosterone(CT)、Deflazacort(DF)、
Fludrocortisone(FL)、 Fludrocortisone acetate(FLA)、 betamethasone(BM)、Deoxy-corticosterone(DOC)、Methyl-prednisolone(MPL)、Triamcinolone acetonide(TRA)、Imipenem (IMP)、Paracetamol (PAR)、Dipyrone (DPR)、Vancomycin (VCM)、Amikacin (AMK)、Fluconazole (FZ)、Cefazolin (CFZ)、Furosemide (FUR)、 Ketoprofen (KET)、
Beclomethasone(BMA)、Budenoside(BD)、Fluocinolone(FL)
分析方法 分析物a 樣品 參考文獻
LC BM, DEX plasma [45]
LC, GC/MS DEX bovine, porcine, ovine liver, muscle [46]
MLC TRI, PS, CS, PL, CL, DEX, CT, DF,
FL, FLA, BM, DOC, MPL, TRA human urine [47]
LC DEX human plasma [48]
MLC BMA, BD, DEX ,FL, FL, HYD, TRI creams, gels, ointments [49]
LC-DAD/FL IMP, PAR, DPR, VCM, AMK, FZ, CFZ,
PL, DEX, FUR, KET human urine [50]
MLC BM, DEX tablets [51]
LC-MS/MS PL, HYD, BM, DEX, TRA cream, emulsion, essence lotions [52]
LC–MS3 PL, CT, MPL human urine [53]
16
(b) 微胞液相層析法
微胞液相層析(Micellar Liquid Chromatography，MLC)技術於 1980 年首 次 被 提 出 並 應 用 ， 是 一 種 逆 相 液 相 層 析 (Reversed-phase liquid chromatographic，RPLC)的模式，主要在移動相的組成中加入界面活性劑 (Surfactant)並且濃度需高於其臨界微胞濃度(Critical micellar concentration，
CMC)時才會形成微胞如圖 1.2 所示，因有微胞的存在才會改變移動相的溶
解能力，而產生不同的交互作用，影響分析物的滯留行為和選擇性 [54-56]。
DeLuccia 等人研究證實可應用於生理樣品且直接分析如尿液、血清及血漿 等[57]，不用經過特殊前處理步驟。
關於微胞液相層析的文獻中大多都應用在藥物的分析上，至今甚少應 用於化粧品中。其中，有W. Thogchai 等人開發出操作簡單方便、快速並 具有精密及準確性的方法，同時測定於化粧產品中熊果素及對苯二酚，回 收率介於95.5–99.0%，呈現良好的靈敏度[43]。
17
圖1.2 移動相中含SDS界面活性劑於C
18管柱中之作用機制
陰離子界面活性劑 SDS 的疏水端 C12烷基鏈與 C18結合於靜相鏈結上，因此 修飾了靜相性質，SDS 親水性硫酸根在靜相外緣產生帶負電荷的親水層而影 響分析物進入鏈結的深度，進而產生不同交互作用且影響分析物滯留時間及 其分離程度18
界面活性劑應用於化粧品配方有清潔、起泡、溶解、乳化、潤滑、懸 浮及分散等目的，分為陽離子型、陰離子型、非離子型及兩性離子型界面 活性劑四種類型，表1-5為MLC中常使用的界面活性劑，使用最廣泛為十 二烷基硫酸鈉（SDS）屬陰離子，另外有聚氧乙烯月桂醚(Brij-35)屬中性、
溴化十六烷三甲基銨(CTAB)屬陽離子以及triton X-100 屬非離子型。界面 活性劑會吸附於靜相而影響分析物在液相層析之滯留，造成許多靜相表面 的性質變化，因此界面活性劑吸附於靜相的量會影響到分析物的滯留行為 及層析效率。文獻指出在微胞層析中加入有機修飾劑會改變微胞性質且結 合至靜相也會改變其結構和性質，因此改變分析物的時間，減少滯留因子 [58]。當界面活性劑吸附在靜相表面而修飾了靜相性質，SDS的疏水性C12
烷基鏈和逆相管柱C18碳之間結合在靜相鏈結的C18烷基鏈上。SDS親水性 硫酸根朝向靜相表面外，因此在靜相外緣產生帶負電荷的親水層而影響溶 質穿透入鍵結相的深度[59, 60]。
19
a Sodium dodecyl sulfate(SDS)、Cetyltrimethylammonium bromide (CTAB)、Cetyl trimethylammonium chloride (CTAC)、Dodecyl trimethylammonium bromide (DTAB)、
Polyoxyethylene (23) dodecanol (Brij 35)、p-Octylbenzene polyoxyethylene 9.5 alcohol (Triton X-100)、N-Dodecyl-N,N-dimethyl-3-ammonio-1-propanesulfonate (SB-12)、
3-[(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propanesulfonate (CHAPS)
20