化合物之性質與光譜數據

化合物 I stigmasterol 及 ß-sitoterol 之混合物

白色針狀結晶(acetone)；m.p.：154~156 ℃。

Molecular weight：414、412。

[α]D：-144.4°(c0.03, CHCl3)。

TLC：Rf＝0.35 (chloroform)。

EIMS (70 ev) m/z (%)：

414 (M^＋) 15.9、412 (M⁺) 46.8、300 (22.3)、270 (30.5)、254 (38.6)、212 (25.0)、172 (19.2)、162 (24.1)、158 (51.5)、107 (63.7)、81 (97.7)、68 (89.5)、54 (100.0)。

IR ν

max

(KBr) cm

^-1

：

3457、3148、3117、1659、1458、1242、1049、964。

1

H-NMR (200 MHz, CDCl

₃

)：

0.68 (3H, s)、0.76~2.28 (m)、3.52 (1H, m, H-3)、5.10 (1H, dd, J＝15.2, 8.0 Hz)、5.14 (1H, dd, J＝15.2, 8.2 Hz)、5.33 (1H, d, J＝5.0, 8.0 Hz, H-6)。

13

C-NMR (50 MHz, , CDCl

₃

)：

11.6、11.8 (C-18)、12.0 (C-29)、18.0、18.7 (C-21)、19.2 (C-19)、19.9、

20.8 (C-26)、22.8 (C-28)、24.1 (C-15)、25.2 (C-28)、27.9、28.6 (C-16)、

30.0 (C-25)、31.2 (C-25)、31.4 (C-7)、31.6 (C-8)、32.2 (C-2)、35.9 (C-20)、36.4 (C-10)、37.0 (C-1)、39.5 (C-12)、40.3 (C-20)、42.1 (C-13)、

42.2 (C-4)、45.5 (C-24)、49.9 (C-9)、51.0 (C-24)、56.1 (C-14)、71.6 (C-3)、121.4 (C-6)、129.1 (C-23)、138.1 (C-22)、140.5 (C-5)。

化合物 II

白色片狀結晶(ethanol)；m.p.：61~62 ℃。

Molecular weight：256

TLC：Rf＝0.4 (n-hexane：chloroform＝10：1)

IR ν

_max

(KBr) cm

^-1

：

2916、2851、1909、1701、1473、1292、891、721。

1

H-NMR (200 MHz, CDCl

₃

)：

0.88 (3H, t)、1.26 (24H, s.br)、1.62 (2H, m)、2.35 (2H, t)。

13

C-NMR (50 MHz, CDCl

3

：

13.8 (-CH3)、22.4~33.7 (14 × CH2)、179.6 (-COOH)。

化合物 III

白色片狀結晶；m.p.：80~82 ℃。

Molecular weight：368

TLC：Rf＝0.35 (n-hexane：chloroform＝10：1)

IR ν

_max

(KBr) cm

^-1

：

3340、3132、2916、2847、1709、1473、1234、1211。

1

H-NMR (200 MHz, CDCl

₃

)：

0.88 (3H, t)、1.26 (40H, s.br)、1.64 (2H, m)、2.35 (2H, t)。

13

C-NMR (50 MHz, CDCl

3

)：

13.8 (-CH3)、22.4~33.5 (20 × CH2)、178.2 (-COOH)。

化合物 IV

黃色粉末(chloroform)；m.p.：285~287 ℃。

Molecular weight：436

TLC：R_f＝0.45 (chloroform：methanol＝10：1)

EIMS (70 ev) m/z (%)：

436 [M⁺] (7.6)、369 (3.8)、313 (100)、283 (5.2)、179 (11.6)、134 (5.6)、

109 (3.8)。

IR ν

_max

(KBr) cm

^-1

：

3442、3110、2932、1651、1605、1559、1443、1335、1220、1165、

1119、960。

UV ?max： 275、345 nm in MeOH；

269、401 nm in MeOH＋NaOH；

283、412 nm in MeOH＋AlCl₃；

291、362 nm in MeOH＋AlCl₃＋HCl；

272、397 nm in MeOH＋NaOAc；

263、369 nm in MeOH＋NaOAc＋H₃BO₃。

1

H-NMR (200 MHz, DMSO-d

6

)：

0.88 (3H, s, H-8")、0.99 (3H, s, H-9")、1.20 (1H, d.br, H-6")、1.42 (1H, m, H-5")、1.52 (1H, m, H-5")、1.57 (1H, m, H-6")、1.92 (1H, d, J＝9.0 Hz, H-4")、2.18 (1H, d, J=8.6 Hz, H-"2)、2.35 (1H, d, H-4")、2.65 (1H, d, J=12.0 Hz, H-1")、2.81 (1H, dd, J=12.0, 12.0 Hz, H-1")、3.86 (3H, s, 7-OMe)、4.12 (1H, s, H-10")、4.40 (1H, s, H-10")、6.68 (1H, s, H-3)、

6.71 (1H, s, H-6)、6.88 (1H, d, J=8.6 Hz, H-5')、7.41 (1H, s, H-2')、7.42 (1H, d, H-6')、13.13 (1H, s, 5-OH)。

13

C-NMR (50 MHz, DMSO-d

₆

)：

21.0 (C-1")、23.1 (C-5")、27.7 (C-9)、28.2 (C-8")、30.9 (C-4")、34.6、

34.6 (C-6", C-7")、52.4(C-2")、56.3 (7-OMe)、90.3 (C-6)、103.2 (C-3)、

104.5 (C-10)、109.1 (C-10")、112.2 (C-8)、113.6 (C-2')、116.2 (C-5')、

119.2 (C-6')、121.6 (C-1')、146.1 (C-3')、149.4 (C-3')、150.2 (C-4')、

155.6 (C-7)、158.0 (C-9)、163.6 (C-5)、164.2 (C-2)、182.1 (C-4)。

HMQC：如表三所示。

HMBC：如表三所示。

COSY：如表三所示。

化合物 V

黃色粉末(acetone)；m.p.：254~256 ℃。

Molecular weight：422

TLC：R_f＝0.35 (chloroform：methanol＝10：1)

EIMS (70 ev) m/z (%)：

422 [M⁺] (1.03)、351 (0.6)、337 (0.9)、299 (20.1)、270 (2.5)、165 (12.6)、

134 (18.5)、109 (13.2)。

IR ν

max

(KBr) cm

^-1

：

3117、2932、1651、1613、1450、1273、1111、810。

UV ?max： 275、346 nm in MeOH；

278、404 nm in MeOH＋NaOH；

283、412 nm in MeOH＋AlCl₃；

280、412 nm in MeOH＋AlCl₃＋HCl；

272、394 nm in MeOH＋NaOAc；

263、370 nm in MeOH＋NaOAc＋H3BO3。

1

H-NMR (200 MHz, DMSO-d

₆

)：

0.89 (3H, s, H-8")、0.99 (3H, s, H-9")、1.20 (1H, d.br, H-6")、1.43 (1H, m, H-5")、1.53 (1H, m, H-5")、1.59 (1H, m, H-6")、1.92 (1H, d, J＝9.0Hz, H-4")、2.30 (1H, m, J=8.2 Hz, H-2")、2.36 (1H, m, H-4")、2.64 (1H, d, J=12.0 Hz, H-1")、2.82 (1H, dd, J=12.0, 12.0 Hz, H-1")、4.21 (1H, s, H-10")、4.41 (1H, s, H-10")、6.43 (1H, s, H-6)、6.61 (1H, s, H-3)、6.86 (1H, d, J=8.8 Hz, H-5')、7.35 (1H, s, H-2')、7.39 (1H, d, H-6')、13.20 (1H,

s, 5-OH)。

13

C-NMR (50 MHz, DMSO-d

6

)：

21.0 (C-1")、23.1 (C-5")、27.5 (C-9")、28.2 (C-8")、31.2 (C-4")、34.6 (C-6")、34.9 (C-7")、51.9 (C-2")、93.1 (C-6)、102.9 (C-3)、103.4 (C-10)、

109.1 (C-10")、111.3 (C-8)、113.4 (C-2')、116.2 (C-5')、119.1 (C-6')、

121.8 (C-1')、145.9 (C-3')、149.5 (C-3")、149.8 (C-4')、155.0 (C-7)、

159.1 (C-9)、162.5 (C-5)、163.7 (C-2)、1821.9 (C-4)。

HMQC：如表五所示。

HMBC：如表五所示。

1

H-

¹

H COSY：如表五所示。

參考文獻

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(1979)

第二部分

引藻細胞分化誘導及抗細胞增殖之活性

成分研究

目錄 英文摘要 中文摘要 第一章 緒論

第一節 研究背景與目的… … … ...1 第二節 藥理試驗方法簡介… … … ...2 第二章 引藻成分之抽取與分離… … … ..3 第三章 引藻成分之化學結構鑑定… … … ..4 第四章 粗抽物與活性成分探討… … … ..6 第五章 結論… … … 10 第六章 實驗部分

第一節 儀器與試藥… … … .11 第二節 成分抽取與分離方法… … … .14 第三節 藥理實驗方法… … … .16 第四節 化合物之性質與光譜數據… … … .18 參考文獻… … … ..19

Summary

Studies on Differentiation-induced and Antiproliferation Constituents of Cryptomonadales

by

Yuan-Chia Huang

Graduate Institute of Pharmaceutical Chemistry China Medical College

One compound and one mixture── bis-(2-ethylhexyl) phthalate (CPA-1), mixture of hexadecanoic acid and octadecanoic acid (CPA-2) have been isolated from the n-hexane, chloroform and ethyl aceteate fractions of the ethyl acetic extract of Cryptomonadales. These compounds were isolated for the first time from Cryptomonadales.

The results of the biological activity investigation showed bis-(2-ethylhexyl) phthalate (CPA-1) exhibited antiproliferation activities on U937 cells (IC₅₀＝58.4 µg/ml).

引藻細胞分化誘導及抗細胞增殖之活性 成分研究

中國醫藥學院 藥物化學研究所

黃元照

中文摘要

由引藻 (Cryptomonadales) 乙酸乙酯粗抽物之正己烷、氯仿、乙 酸乙酯分劃中，單離出一個化合物及一個混合物：bis-(2-ethylhexyl) phthalate (CPA-1) 及 hexadecanoic acid 和 octadecanoic acid 之混合物 (CPA-2)。以上化合物均為已知，但都是第一次由引藻中分離得到。

經細胞分化和抗細胞增殖試驗發現 bis-(2-ethylhexyl) phthalate (CPA-1) 具有抑制 U937 血癌細胞增殖之活性 (IC₅₀＝58.4 µg/ml)。

第一章 緒論

第一節 研究背景及目的

引藻(Cryptomonadales, 圖 1)是國際綠藻股份有限公司，王順德博 士所開發的一種含有葉綠素、維他命、高蛋白的特殊品種藻類，已在 台灣、日本及東南亞各國當食品食用多年。引藻在民間有用於癌症、

貧血、紅斑性狼瘡、不孕症等疾病。在已研究的結果顯示引藻之水性 濃縮液中含有一些活性成分可以對癌細胞的生長誘導分化及抑制生 長的作用；亦顯示引藻對老鼠皮膚腫瘤的生成有顯著的抑制作用。故 著手進行引藻之分離純化，本研究以乙酸乙酯粗抽物、各溶媒抽出物 以及從各溶媒層分劃分離所得之成分為檢體，測試對 HL-60 或 U-937 cells 細胞增殖抑制及促進細胞分化的活性，也將進一步分離引藻中所 含促進細胞分化及增殖抑制之有效成分。

圖 1、引藻

第二節 藥理實驗方法簡介

一、抗增殖作用：

細胞的增殖作用主要受到細胞週期的(cell cycle)調控，人體內的 正常細胞多半停留在 G0-G₁期(G0-G₁arrest)進一步成熟分化，而癌細胞 不同於正常細胞之處就是因為細胞週期的失控而導致細胞不斷的增 殖與複製不成熟的幼稚細胞，如此惡性循環變造成癌症一發不可收 拾，所以若能以藥物將不正常之增殖給停止當然也促成了分化成熟的 進行了。

本研究之藥理實驗模式係利用 3-(4,5-dimethylthiazol-2-diphenyl) -tetrazolium bromide (MTT)來檢測粗抽物及化合物知不同濃度對 HL-60 或 U937 血癌細胞增殖的影響。MTT 染劑可穿透活細胞的細胞 膜經由粒線體上酵素的還原而成藍紫色反應，再利用 DMSO 將細胞 膜溶解後釋出藍色染料於 570 nm 下測量吸光度，即可以得到粗抽物 及化合物對細胞增殖比例的百分比^(1~4)。

二、細胞分化作用：

所謂分化療法便是希望藉由分化誘導劑的幫助來導正不成熟的 癌症細胞朝向分化成熟的途徑，進而伴隨正常的機制而死去，如此一 來癌症也將得到緩解根除的效果。

本 研 究 之 藥 理 實 驗 模 式 係 利 用 硝 基 藍 四 氮 唑 (nitroblue tetrazolium：NBT )溶液來做分化活性測試，其原理係利用癌症細胞分 化成熟時可恢復吞噬微生物或異物的功能，而細胞內酵素活性也大量 增加並釋放出超氧化物( ex: superoxide )去防禦外來物質的侵犯，於是 利用其還原性將硝基藍四氮唑( NBT )還原成藍黑色的 formazan 化合 物沈著於細胞內。藉由顯微鏡檢 200 個左右的細胞計算其中呈現藍黑 色細胞所佔百分比即為誘導分化的比例⁽⁵⁾。

第二章 引藻成分之抽取與分離

取由國際綠藻公司所提供之引藻精約 1000 ml，以乙酸乙 酯反覆抽取 30 次，依照 Scheme 1 流程圖所述之方法分離，目前暫時 得到 2 個化合物，經光譜解析及化學方法確認其結構為：

1. bis-(2-ethylhexyl) phthalate

2. hexadecanoic acid 和 octadecanoic acid 之混合物

Compound I

C

C O

O CH₂CH(CH₂)₃CH₃

O

O CH₂CH(CH₂)₃CH₃ CH₂CH₃

CH₂CH₃

Mixture II

CH

₃

(CH

₂

)

₁₄

COOH

CH

₃

(CH

₂

)

₁₆

COOH

第三章 引藻成分之化學結構鑑定

【一】化合物 I ( bis-(2-ethylhexyl) phthalate )

化合物 I 為白色顆粒，熔點 222~225 ℃，其 TLC 經溶媒 (chloroform)展開後 Rf 值為 0.65。

EI 質譜(圖 2)顯示準分子離子 峰為 391 [m+1] (6)，其他碎片尚有 279 (31)、167 (87)、149 (100)等吸收；分析其裂解模式，發現化合物 I 有 phthalate 類化合物裂解特徵，如圖 3 所示。故初步推論化合物 I 可能為 phthalate 類化合物。

1H-NMR 光譜 (圖 4；CDCl₃)顯示δ0.86~0.89 (m)為長鏈末端甲基 之吸收訊號，δ1.25~1.46 (m, br)為長鏈 methylene (-CH2-)的吸收訊 號，δ4.14~4.20(m)為長鏈中次甲基之吸收訊號，δ7.51~7.58 (2H, ddd) 與δ7.67~7.74 (2H, ddd)為芳香環的吸收訊號。

13C-NMR 光譜 (圖 5；CDCl₃)顯示δ10.7~13.8 為長鏈末端甲基碳 的吸收訊號，δ22.75~30.12 為長鏈 methylene (-CH2-)的吸收訊號，δ 38.4 為長鏈中-OCH₂-的吸收訊號，δ128.5~132.2 為芳香環上不飽和 碳的吸收訊號，δ178.2 為 carboxyl carbon (C=O)的吸收訊號。

綜合上述資料與文獻值^(6~7)比對，確認此化合物之結構為

bis-(2-ethylhexyl) phthalate，分子式為 C24H38O4，其結構如下所示：

C

C O

O CH₂CH(CH₂)₃CH₃

O

O CH₂CH(CH₂)₃CH₃ CH₂CH₃

CH₂CH₃

C

【二】混合物 II (hexadecanoic acid＆octadecanoic acid)

化合物 II 為白色片狀結晶，熔點 80~82℃，其 TLC 經溶媒 (n-hexane：chloroform＝10：1)展開後 Rf 值為 0.35，200 nm 以上不吸 光。

EI 質譜(圖 6)顯示 256 (22)為主要之化合物離子吸收峰，284 (3) 為次要化合物之分子離子峰，所以分子量為 256 及 284。且其裂解模 式符合長鏈脂肪酸之裂解模式，故推測混合物 II 可能主要為

hexadecanoic acid 且尚含有 octadecanoic acid 之混合物。

1H-NMR 光譜 (圖 7；CDCl₃)顯示δ0.88 (3H, t)為長鏈末端甲基之 吸收訊號，δ1.26 (40H, s.br)為長鏈 methylene (-CH2-)的吸收訊號，δ 2.35 (2H, t)為 H-2 的吸收訊號。

13C-NMR 光譜 (圖 8；CDCl₃)顯示δ13.8 為長鏈末端甲基碳的吸 收訊號，δ22.4~33.7 為長鏈 methylene (-CH2-)的吸收訊號，δ 179.0 為 carboxyl carbon (C=O)的吸收訊號。

綜合上述資料與文獻值^(8~9)比對，確認此混合物為 hexadecanoic acid 及 octadecanoic acid 的混合物。

CH

₃

(CH

₂

)

₁₄

COOH

CH

₃

(CH

₂

)

₁₆

COOH

第四章 粗抽物與成分活性探討

1. HL-60 cells (4 × 10⁴ /ml) were incubated with different con- centration of sample for 48 hrs.

2. Data were presented as mean ± SD (n = 3).

3. * p < 0.05; ** p < 0.01; *** p < 0.001

進一步，將引藻精以乙酸乙酯抽取後，合併抽取液，經減壓濃縮 完全去除溶媒並隨時濾取析出物得到析出物 (Fr. 1)、乳化層 (Fr. 2)、

乙酸乙酯抽出物 (Fr. 3)及水層 (Fr. 4)四個分劃，分離流程圖如 Scheme 1 所示。也進行 Scheme 1 中各分劃對 U937 血癌細胞增殖抑 制或誘導 U937 血癌細胞分化活性的測試，其結果如表二。

表二、引藻精與 1, 2, 3-1, 3-2, 3-3 等分劃對 U937 血癌細胞之活性 Compound Conc.

(µg/ml) MTT-assay

NBT-assay

Cont. 0.0 100.0 ± 1.0 8.1 ± 1.6

4 25

1. U937 cells ( 4 × 10⁴ ) were incubated with different concentration in 72 hrs. Data was presented as mean ± SD from three separate experiments.

2. ^* p < 0.05 compared with control.

表三、3-1-1、3-1-2、3-1-3、CPA-1、CPA-2 等分劃及化合物對 U-937 血癌細 胞之活性

Compound Conc.

(µg/ml) MTT-assay

NBT-assay

Cont. 0.0 100.2 ± 0.8 5.0 ± 0.9

1. U937 cells ( 4 × 10⁴ ) were incubated with different concentration in 72 hrs. Data was presented as mean ± SD from three separate experiments.

2. ^*_** p < 0.05 compared with control.

第五章 結論

本研究自引藻乙酸乙酯抽取物中，單離出 1 個化合物及 1 個混合 物：bis-(2-ethylhexyl) phthalate (CPA-1)、hexadecanoic acid 與 octade canoic acid 之混合物(CPA-2)。

本次藥理實驗發現，引藻細胞分化誘導之活性成分為難溶於乙酸 乙酯的高極性之脂溶性化學成分，而抗細胞增殖活性成分則從引藻原 液轉溶於乙酸乙酯抽出物及乙酸乙酯乳化層這 2個 fraction中，其 IC50

分別為 77.6 µg/ml 及 55.5 µg/ml。而在進一步分離的 fraction 中，則以 Fr. 3-1-1 及 Fr. 3-1-3 的細胞分化誘導與抗細胞增殖的活性較為明顯，

其 IC50與 ED50分別為 50.5 µg/ml、62.9 µg/m 與 69.3 µg/ml、85.8 µg/ml。

本研究只有小部份之初步成果，有必要持續進行更進一步的探討。

第六章 實驗部分

第一節 儀器與試藥

一 、 儀器

(一)熔點測定裝置 (melting point apparatus)

本實驗熔點測定裝置採用 Yanaco MP-500D 熔點測定裝置，測 定範圍在 40-500 ℃，溫度未經校正。

(二)紫外光-可見光光譜儀 (UV-visible spectrometer)

紫外光-可見光光譜分析採用 Shimadzu UV-160A UV-Visible recording spectrophotometer。

(三)紅外光光譜儀 (infrared spectrometer, IR)

紅外光光譜分析採用 Nicolet Impact 400 FT-IR spectro-

photometer，以溴化鉀粉末作為打錠稀釋劑；單位為波數(cm^-1)。

(四)質譜儀 (mass spectrometer, MS) EIMS ：

使用 VG PLATFORM II 測定，離子化電壓為 70 ev，單位為 m/z。

(五)核磁共振光譜儀 (nuclear magnetic resonance spectrometer)

採用 DPX-200 及 DPX-400 FT-NMR spectrometer。以δ表示化 學位移(chemical shift)，單位為 ppm。偶合常數(J)以 Hz 為單位，

並以 s 表單峰(single)，d 表二重峰(doublet)，t 表三重峰(triplet)，

q 表四重峰(quartet)，m 表多重峰(multiplet)，br 表寬峰。

(六)紫外光燈(UV lamp)

CAMAG UV-Cabinet II ，wavelength 254 及 366 nm。

二、試藥

(一) 本項研究所用之引藻精是由國際綠藻股份有限公司提供。

(二)成分抽取、薄層層析及管柱層析用溶媒

n-Hexane、benzene、chloroform、ethyl acetate、n-butanol、acetone、

methanol、等購自 TEDIA(ACS、20L)。

(三)核磁共振光譜用溶媒

Chloroform-d1 (deuteration degree 99.5%)、dimethylsulfoxide-d6

(deuteration degree 99.8%)、methanol-d₄ (deuteration degree 99.5%) pyridine-d₆ (deuteration degree 99.5%) 等購自默克公司(Merck Taiwan, LTD, 台北)。

(四)管柱色層分析 (column chromatography)填充劑

1. Silica gel ：Merck Kieselgel 60 (70-230 mesh, Art. 7734)；Merck Kieselgel 60 (230-400 mesh, Art. 9385)。

2. Cellulose microcristalline (Merck , Art. 2331)。

(五)薄層色層分析 (thin-layer chromatography)

1. TLC aluminium sheets (silica gel 60 F254, 20 ×20 ㎝, 0.2 ㎜ layer, Art. 5554, E. Merck)。

2. DC-Alufolien cellulose F (20 ×20 ㎝, 0.1 ㎜, Art. 5574, E.

Merck)。

(六) 製備薄層色層分析 (preparative TLC)

採用 PLC plates silica gel 60 F₂₅₄ concentrating zone (20 ×20 ㎝, 1

㎜, E. Merck)。

第二節 成分抽取與分離方法

取由國際綠藻公司所提供之引藻精約 1000 ml，以乙酸乙酯抽取 至抽取物低於 10 mg/ml (約 30 次抽取)，合併抽取液，經減壓濃縮完 全去除溶媒並隨時濾取析出物得到析出物 (Fr. 1)、乳化層 (Fr. 2)、乙 酸乙酯抽出物 (Fr. 3)及水層 (Fr. 4)四個分劃，分離流程如 Scheme 1 所示。

將此四個粗抽物進行細胞分化及抗細胞增殖試驗，結果發現 Fr. 3 較具有活性，故先進行 Fr. 3 之單離，其餘分劃層則暫予以保留。

乙酸乙酯抽出物以正己烷、氯仿抽取至抽取液近無色，合併抽取 液，經減壓濃縮得到正己烷抽出物約 2.18 g (Fr. 3-1)、氯仿抽出物約 5.08 g (Fr. 3-2)、乙酸乙酯殘留物約 1.03 g (Fr. 3-3)。其中正己烷抽出 物利用矽膠管柱色層分離，以氯仿及乙酸乙酯混合溶媒洗離，收集氯 仿、5% (Fr. 3-1-1, 102 mg)、10% (Fr. 3-1-2, 550 mg)乙酸乙酯之氯仿溶 液及甲醇 (Fr. 3-1-3, 970 mg)溶液四個分劃，而氯仿溶液經減壓濃縮 後得到化合物 I (15 mg)。

取 Fr. 3-1-1 經矽膠管柱色層分析，以氯仿及乙酸乙酯混合溶媒洗 離，收集 5%、10% (Fr. 3-1-1-1, 82.3 mg)乙酸乙酯之氯仿溶液二個分 劃，其中 5%乙酸乙酯之氯仿溶液以甲醇做再結晶得到化合物 II (18 mg)。

引藻精 (1000 ml)

CHCl₃ 5%EtOAc 10%EtOAc MeOH

silica gel*¹

silica gel*²

化合物II

第三節 藥理實驗方法

1. 癌細胞的培養

⁽¹⁾

本實驗使用 HL-60 血癌細胞 (human promyelocytic leukemia cells) 或 U-937 血癌細胞，這些癌細胞平常均培養於含有 10 ~ 20 % 胎牛 血清的 RPMI 1640 培養基，並加入 kanamycin (100 µg/ml)，penicillin (50

µ

g/ml)，及 streptomycin (50

µ

g/ml) 以防細菌污染。培養於於含 5 % 二氧化碳的細胞培養箱，當培養前及實驗時，會取出少量癌細胞，再

本實驗使用 HL-60 血癌細胞 (human promyelocytic leukemia cells) 或 U-937 血癌細胞，這些癌細胞平常均培養於含有 10 ~ 20 % 胎牛 血清的 RPMI 1640 培養基，並加入 kanamycin (100 µg/ml)，penicillin (50

µ

g/ml)，及 streptomycin (50

µ

g/ml) 以防細菌污染。培養於於含 5 % 二氧化碳的細胞培養箱，當培養前及實驗時，會取出少量癌細胞，再

在文檔中 1. 釘地蜈蚣抗過敏、抗發炎及抗細胞增殖活性成分之研究 2.引藻細胞分化誘導及抗細胞增殖之活性成分研究; 1.Studies on Antiallergic, Antiinflammatory and Antiproliferation Constituents of Helminthostachys zeylanica (L) Hook.2. Studies on Differentiation-induced and AntiproliferationConstituents of Cryptomon (頁 51-82)