基因位點追蹤的菌株

Ｏ. TCH3 (hupA-mturquoise::FRT::yjaH)：

此菌株是先以 MG1655 的菌株植入雙色抑制子螢光融合蛋白系統序列 yciH::FRT::Ptet::tetR-yfp::TSAL2, PparABCb:: parBb-mcherry::B1006::osmB 形 成 YJL2 突變株。

再以 YJL2 作為奠基植入 hupA-mturquoise::FRT::kan^R::FRT::yjaH 形成 TCH3K 添加類核標記的突變株。

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再轉型 pCP20A 的質體將 kan^R (康黴素 Kanamycin, Kan 的抗藥性蛋白的基 因)進行剃除，也就是說只保留 hupA-mturquoise::FRT::yjaH 的序列，最後再 將 pCP20A 剃除，便得到 TCH3 突變株。而此接下來的菌株都是奠基在 TCH3 進行下一步的基因改造。

I. MH2912KTCL (mazE::FRT::kan

::FRT::tetOx56::relA,

barA

::FRT::cm

::FRT::lacOx90::gudD

)：

此菌株是以 TCH3 的菌株在 relA 基因的下游植入康黴素的抗藥性蛋白的基 因及 56 個重複的操縱基因 tetO 序列，將原基因中 mazE::relA 的序列置換成 mazE::FRT::kan^R::FRT::tetOx56::relA 形成 MH2909KT 突變株。

再以 MH2909KT 作為奠基在 relA 基因的上游植入氯黴素的抗藥性蛋白的基 因及 90 個重複的操縱基因 lacO 序列，原基因中 barA^1882-2757:: gudD^449-134的 序 列 置 換 成 barA^1882-2757::FRT::cm^R::FRT::lacOx90::gudD^449-134 形 成 MH2912KTCL 突變株。

註：只要含有重複操縱基因序列的菌株，我們都沒有進行將抗藥性蛋白基因 剔除的工作，因為在這個操作進行的過程中，容易造成操縱基因序列的 縮短或丟失，使我們的基因位點成像無法有足夠好的對比度。

最後再轉型 pLT3-10 質體進入 MH2912KTCL，就完成我們觀察標定 relA 基 因上下游的菌株。

II. MH3210KTCL (ttdT::FRT::kan

::FRT::tetOx56::tsaD,

mug::ileX::FRT::cm

::FRT::lacOx90::yqjH)：

此菌株是以 TCH3 的菌株在 rpoD 基因的上游植入康黴素的抗藥性蛋白的基 因及 56 個重複的操縱基因 tetO 序列，將原基因中 ttdT::tsaD 的序列置換成 ttdT::FRT::kan^R::FRT::tetOx56::tsaD 形成 MH3207KT 突變株。

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再以 MH3207KT 作為奠基在 rpoD 基因的下游植入氯黴素的抗藥性蛋白的基 因及 90 個重複的操縱基因 lacO 序列，原基因中 mug::yqjH 的序列置換成 mug::ileX::FRT::cm^R::FRT::lacOx90::yqjH 形成 MH3210KTCL 突變株。

最後再轉型 pLT3-10 質體進入 MH3210KTCL，就完成我們觀察標定 rpoD 基 因上下游的菌株。

III. MH3424KTCL (yhdZ::FRT::kan

::FRT::tetOx56::rrfF::thRV, yrdA::FRT::cm

::FRT::lacOx90::yrdB)：

此菌株是以 TCH3 的菌株在 rrnD 基因的下游植入康黴素的抗藥性蛋白的基 因及 56 個重複的操縱基因 tetO 序列，將原基因中 yhdZ::rrfF::thRV 的序列換 成 yhdZ::FRT::kan^R::FRT::tetOx56::rrfF::thRV 形成 MH3421KT 突變株。

再以 MH3427KT 作為奠基在 rrnD 基因的上游植入氯黴素的抗藥性蛋白的基 因及 90 個重複的操縱基因 lacO 序列，原基因中 yrdA::yrdB 的序列置換成 yrdA::FRT::cm^R::FRT::lacOx90::yrdB 形成 MH3424KTCL 突變株。

最後再轉型 pLT3-10 質體進入 MH3424KTCL，就完成我們觀察標定 rrnD 基 因上下游的菌株。

IV. MH3917CLKT (glmU::FRT::cm

::FRT::lacOx90::atpC, atpI::FRT::kan

::FRT::tetOx56::rsmG)：

此菌株是以 TCH3 的菌株在 atp 基因的下游植入氯黴素的抗藥性蛋白的基因 及 90 個重複的操縱基因 lacO 序列，將原基因中 glmU::atpC 的序列換成 glmU::FRT::cm^R::FRT::lacOx90::atpC 形成 MH3913CL 突變株。

再以 MH3913CL 作為奠基在 atp 基因的上游植入康黴素的抗藥性蛋白的基 因及 56 個重複的操縱基因 tetO 序列，原基因中 atpI::rsmG 的序列置換 atpI::FRT::kan^R::FRT::tetOx56::rsmG 形成 MH3917CLKT 突變株。

最後再轉型 pLT3-10 質體進入 MH3917CLKT，就完成我們觀察標定 atp 基 因上下游的菌株。

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V. MH3935CTKL (rbsR::FRT::cm

::FRT::tetOx56::hrsA,

aspT::trpT::FRT::kan

::FRT::lacOx90::hdfR)：

此菌株是以 TCH3 的菌株在 rrnC 基因的上游植入氯黴素的抗藥性蛋白的基 因及 56 個重複的操縱基因 tetO 序列，將原基因中 rbsR::hrsA 的序列換成 rbsR::FRT::cm^R::FRT::tetOx56::hrsA 形成 MH3931CT 突變株。

再以 MH3931CT 作為奠基在 rrnC 基因的下游植入康黴素的抗藥性蛋白的基 因及 90 個重複的操縱基因 lacO 序列，原基因中 aspT::hdfR 的序列置換成 aspT::trpT::FRT::kan^R::FRT::lacOx90::hdfR 形成 MH3935CTKL 突變株。

最後再轉型 pLT3-10 質體進入 MH3935CTKL，就完成我們觀察標定 rrnC 基 因上下游的菌株。