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表 1 實驗使用抗體
抗體名稱 稀釋倍數 分子量 kDa 抗體來源 供應廠商
SOD2 1:1500 28 rabbit Millipore
Caspase-3 1:500 17-35 rabbit Cell-s
iNOS 1:500 130 rabbit Cell-s
β-tubuilin 1:3000 50 rabbit Abcam
Dopamin βHydrolease 1:5000 69 rabbit Gene Tex
TNF-a 1:500 35 mouse Santa-C
PARP 1:1500 80 rabbit Cell-s
GAPDH 1:1000 45 rabbit Cell-s
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圖 1 斑馬魚成魚浸泡在含有芬普尼水域環境的存活率變化
不同濃度芬普尼(0, 0.5, 1.0, 2.0 ppm)投予後第 24、48、72 和 96 小時記錄斑馬魚之平均存活率，結果顯示在含 2.0 ppm 芬普尼的水域中，第 24 小時紀錄斑馬魚存活率只有剩下 10%；在含 1.0 ppm 芬普尼的水域中，斑馬 魚存活率則逐步遞減，第 96 小時紀錄斑馬魚存活率只剩 50%；在含 0.5 ppm 芬普尼的水域中，從 24 至 96 小 時紀錄斑馬魚存活率均為 90%；在乾淨水域中(sham 組)的斑馬魚存活率則均維持在 100%。平均樣本數=3，實 驗數值以平均值±平均值標準誤差(standard error of the mean, SEM)表示，且用且單因子變異數檢定，以及 Student-Newman-Keuls 多重差距檢定來分析是否有顯著誤差，**代表顯著誤差 P<0.01，*代表顯著誤差 P<0.05。
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圖 2 斑馬魚成魚浸泡在不同濃度芬普尼水域環境的運動改變
圖 A：單一斑馬魚在乾淨水域(sham 組)；與含有 0.1 與 0.5 ppm 芬普尼的水域環境中處理 0、48、72 小時後 的運動軌跡熱點圖，每組斑馬魚運動軌跡的分析時間為 10 分鐘。圖 B：實驗統計結果顯示斑馬魚的(a)運動平 均速度、(b)運動平均距離。從第 24 小時開始，在乾淨水域(Sham)數值均為最佳；而在含有芬普尼的水域環境 則隨著濃度增加而顯著遞減。平均樣本數=5，實驗數值以平均值±平均值標準誤差(SEM)表示，且用且單因子 變異數檢定，以及 Student-Newman-Keuls 多重差距檢定來分析是否有顯著誤差，**代表顯著誤差 P<0.01，*
代表顯著誤差 P<0.05。
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圖 3 斑馬魚胚胎浸泡在含有芬普尼水域環境的側線毛細胞變化
圖 A：單一斑馬魚胚胎在乾淨水域(sham 組)；與含有 0.1、 0.5 與 1.0 ppm 芬普尼的水域環境中處理 12 小時 後，利用 FM1-43染色的側線毛細胞螢光影像。圖 B：實驗統計結果顯示斑馬魚胚胎的側線毛細胞數目，在乾 淨水域(Sham)數值均為最佳；而在含有芬普尼的水域環境則隨著濃度增加而側線毛細胞數目顯著遞減。平均 樣本數=3，實驗數值以平均值±平均值標準誤差(SEM)表示，且用且單因子變異數檢定，以及
Student-Newman-Keuls 多重差距檢定來分析是否有顯著誤差，**代表顯著誤差 P<0.01。
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圖 4 斑馬魚成魚浸泡在含有芬普尼水域環境後腦組織的氧化壓力表現
圖 A：單一斑馬魚在乾淨水域(sham 組)、以及含有 0.1、 0.5 與 1.0 ppm 芬普尼的水域環境中處理 12 小時後 的腦組織抗氧化壓力相關的超氧化物歧化酶-2 蛋白(Superoxide dismutase 2, SOD2)表現，結果顯示芬普尼實驗 處理組腦組織的 SOD2 蛋白表現較正常控制組明顯減弱，刻度線長度＝30μm。圖 B：利用西方墨點法分析實 驗結果顯示：芬普尼實驗處理組腦組織的 SOD2 蛋白表現較正常控制組明顯減弱；統計分析結果顯示：實驗 處理組斑馬魚腦組織的 SOD2 蛋白平均表現值較正常控制組(Sham)顯著減少。平均樣本數=3，實驗數值以平 均值±平均值標準誤差(SEM)表示，且用且單因子變異數檢定，以及 Student-Newman-Keuls 多重差距檢定來分 析是否有顯著誤差，**代表顯著誤差 P<0.01。
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圖 5 斑馬魚成魚浸泡在含有芬普尼水域環境後腦組織的發炎作用表現
圖 A：單一斑馬魚在乾淨水域(sham 組)、以及含有 0.1、 0.5 與 1.0 ppm 芬普尼的水域環境中處理 12 小時後 的腦組織發炎相關的腫瘤壞死因子 α(TNFα)蛋白表現，結果顯示芬普尼實驗處理組腦組織的 TNFα 蛋白表現較 正常控制組明顯增強，刻度線長度＝30μm。圖 B：利用西方墨點法分析實驗結果顯示：芬普尼實驗處理組腦 組織的TNFα 蛋白表現較正常控制組明顯增強；統計分析結果顯示：實驗處理組斑馬魚腦組織的 TNFα 蛋白 平均表現值較正常控制組(Sham)顯著增強。平均樣本數=3，實驗數值以平均值±平均值標準誤差(SEM)表示，
且用且單因子變異數檢定，以及 Student-Newman-Keuls 多重差距檢定來分析是否有顯著誤差，**代表顯著誤 差 P<0.01。
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圖 6 斑馬魚成魚浸泡在含有芬普尼水域環境後腦組織的細胞凋亡表現
圖 A：單一斑馬魚在乾淨水域(sham 組) 、以及含有 0.1、 0.5 與 1.0 ppm 芬普尼的水域環境中處理 12 小時後 的腦組織細胞凋亡相關的半胱天冬酶原 3 (Caspase 3)蛋白表現，結果顯示芬普尼實驗處理組腦組織的 Caspase 3 蛋白表現較正常控制組明顯增強，刻度線長度＝30μm。圖 B：利用西方墨點法分析實驗結果顯示：芬普尼實 驗處理組腦組織的 Caspase 3 蛋白表現較正常控制組明顯增強；統計分析結果顯示：實驗處理組斑馬魚腦組織 的 Caspase 3 蛋白平均表現值較正常控制組(Sham)顯著增強。平均樣本數=3，實驗數值以平均值±平均值標準 誤差(SEM)表示，且用且單因子變異數檢定，以及 Student-Newman-Keuls 多重差距檢定來分析是否有顯著誤 差，*代表顯著誤差 P<0.05。
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圖 7 斑馬魚成魚浸泡在含有 DMSO 水域環境後不會改變運動表現
實驗統計結果顯示斑馬魚在乾淨水域(sham 組)；與含有 DMSO (0.1 ppm)的水域環境中處理 0、48、72 小時 後的運動(A)平均速度、(B)平均距離。結果顯示斑馬魚不論在乾淨水域，或是含有 DMSO 的水域環境中，運 動平均速度與平均距離表現均無顯著差異(P>0.05)。平均樣本數=5，實驗數值以平均值±平均值標準誤差(SEM) 表示，且用且單因子變異數檢定，以及 Student-Newman-Keuls 多重差距檢定來分析是否有顯著誤差。
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圖 8 系統農藥芬普尼誘發斑馬魚腦組織損傷的可能分子機制
斑馬魚會因為芬普尼實驗處理造成腦組織產生氧化壓力(oxidative stress)、發炎作用(inflammation)、以及細胞 凋亡(apoptosis)，這結果說明利用芬普尼實驗處理斑馬魚的動物模式，未來應該可以作為探討系統農藥相關研 究的實驗動物平台。