目標植物白英 solanum lyratum Thunb.溫室栽培暨鑑定自台中中 國醫藥大學郭昭麟教授，五月栽種，十一月採收全草 40.5 公斤，於 室溫下以甲醇溶液萃取三次，萃取液過濾後於 40℃下以減壓濃縮之 方法除去有機溶媒，將剩餘之水分以冷凍乾燥之方法除去後，得到粗 萃物 622 g。粗萃物接著以正己烷、乙酸乙酯依序與水作分配萃取，
依序劃分為正已烷層、乙酸乙酯層和水層(圖 1) ，以乙酸乙酯層作為 研究目標。
乙酸乙酯層以 Sephadex LH-20 / EtOH 進行管柱層析，以 10 % H2SO4為呈色劑，劃分為 fraction 1 - 5 五個部分。Fr. 1 - 5 分別由各種 層析管柱，以不同比例之溶媒系統反覆分離純化後，得到 SL-1 ~ SL-18 共十八個化合物。以上各層萃出物之分離、純化流程，分別如 下頁圖 2 所示。
Solanum lyratum thumb.
Whole fresh plants 40.5 kg
Extraxted wtih MeOH 120 L 3 times MeOH extract
622 g
Patition with hexane
Hex layer (217.3 g) water layer
Patition with Ethyl acetate
EA layer Benzene : Acetone Hexane : EA
二、細胞毒殺試驗 (MTT cytotoxicity assay)
本實驗利用 colorimetric MTT cytotoxicity assay 來評估由白英中 所分離純化之化合物之是否具抗癌藥物潛力。MTT 是一種四唑鹽類 (tetrazolium salt)，全名是[3-(4,5dimethylthialzol-2-yl)-2,5-diphenyltetra zolium]bromide。於 1983 年首次被使用於檢測細胞存活及增生作用，
45為一簡易且不需放射線的檢測方法，目前已廣泛作為各種細胞存活
程度的基本試驗。
其檢測原理為 MTT 溶於水後呈現淡黃色，會被活細胞胞飲 (pinocytosis)而進入細胞內；活細胞內的粒腺體(mitochondria)含有各 種脫氫酵素(dehydrogenase)，一般認知粒線體特有的琥珀酸脫氫酵素 (succinatedehydrogenase)會以 MTT 為受質，將 MTT 結構中四唑環 (tetrazolium ring)切斷而形成不可溶的 MTT formazan 結晶，並由細胞 內胞吐(exocytosis)排出到細胞表面，此時肉眼觀察原本為淡黃色的 medium 轉為暗紫色 (即生成之 formazan 顏色)，顯微鏡下亦可觀察到 formazan 針狀結晶，同時其吸光值亦會改變；反之若細胞已死，其脫 氫酵素已失去功能，故 MTT 仍維持淡黃色。因此此方法可用來測試 化學樣品加入細胞後細胞的存活率。本實驗是利用酵素連結免疫吸附 分析儀 (ELISA reader) 於螢光波長 600 nm 下，測其吸光強度
(Optical density: O.D)，並計算藥物之細胞毒性強度。
實驗方法
1. 癌細胞培養 (cancer cell line culture)
將 MCF-7 cells (human breast cancer cells, 人乳腺癌細胞)及 Hep G2 cells (human hepatoblastoma), 人類肝癌細胞，培養在含有 10 % FBS (fetal bovine serum) 及含 100 units/ml penicillin 和 100 μg/ml streptomycin 之 RPMI-1640 培養基中，放置 95 % O2、5 % CO2(37˚
C) 之恆溫箱中培養。
2. 檢品濃度配製：
將 sample 以 100 % DMSO 溶解成 10 與 50 mg/ml，其最終實驗 濃度為 10 與 50 μg/ml。
3. 實驗步驟:
取 1×105cells/well 的細胞，將其植入 24 well plate 中 (此時含細 胞的溶液為 500 μL/well)，經過 24 小時後，加入檢品培養 24 小時，
於每個 well 加入 MTT 20 μl(1 mg/mL)，於二氧化碳細胞培養箱 (37
°C) 中培養 4 小時，除去所有液體，再加 0.4 ml DMSO 到每個 well 溶解 formazan 結晶，並振盪 10 分鐘。然後以酵素連結免疫吸附分析 儀於螢光波長 600 nm 下，測定其吸光值並計算出檢測藥物之細胞毒 性。
對照組 (600 nm 吸光值)-實驗組 (600 nm 吸光值)
抑制百分比(%)＝ ────────────────────── × 100%
對照組 (600 nm 吸光值)
三、實驗材料
一、儀器：
化學成分之物性測定儀器：
核磁共振儀 (NMR)
Bruker AM-500 FT-NMR Spectrometer (500 MHz) 質譜分析儀 (MS)
Applied Biosystems MDS Sciex API 2000 MS System (CA, USA)
旋光度測定儀 (Optical Rotation)
Jasco P-1020 digital polarimeter (Tokyo, Japan) 紫外光譜儀 (UV-VIS)
Hitachi U-2800 spectrophotomater (Tokyo, Japen) 高效能液相層析系統：
紫外光偵檢器
Hitachi UV detector L-7400 (Tokyo, Japen) 折射率偵檢器
Biscoff RI detector (Leonberg, Germany) 幫浦：
Hitachi pump L-7100 (Tokyo, Japen) Hitachi pump L-2130 (Tokyo, Japen) 層析管柱：
Biosil 5 ODS-W 10mm I.D x 250mm (Biotic Chemical)
其他儀器：
減壓濃縮機
Rotary evaporator n-1000 & Water bath sb-1000 (Eyela) 冷卻循環機
Refrigerated circulation BL-20 (YIHDER) 冷凍乾燥機
FD-1, FD-5 (Eyela) 純水製造器
Milli-Q (Millipore) 超音波震盪器
Ultrasonic Cleaner D2000 (Delta) 紫外光－可見光分光光度計 UV-1601 (Shimadzu)
二、層析法：
管柱層析：
MCI-gel CHP20P ( 75-150 μm, Mitsubishi Chemicial Industrie ) Sephadex LH-20 ( 20-100 μm, Pharmacia Fine Chemicals ) Cosmosil C18-OPN ( 75 μm, Nacalai Tesque, INC. )
Silica gel 60 ( 70-230 mesh, E. Merck ) 薄層層析板：
Kiesel gel 60 F254 ( 0.2 mm, E. Merck ) 薄層層析之展開溶媒：
Benzene : Acetone ( 85:25, 85:15, 65:35, v/v ) Chloroform : Methanol ( 8:1, 5:1, v/v )
Chloroform : Methanol : H2O ( 7:3:0.5, 8:2:0.2, 9:1:0.1, v/v/v ) TLC 檢測法：
UV lamp 254 nm
H2SO4Spray reagent ( 10% v/v in EtOH，噴霧後加熱。) FeCl3spray reagent : (5% FeCl3 in H2O)
Dragendorff spray reagent :
(A 液: 0.17 g bismuuth subnitrate + 2 ml acetic acid in 8 ml water B 液: 4 g potassium iodide in 10 ml water 1:1 v/v
混合: 1 ml A + 1 ml B +2 ml Acetic acid + 7 ml water 可保持一 個月。)
三、一般化學溶媒及試藥：
Acetonenitrile, Acetic Acid, Benzene, Chloroform, Dichloro methane, Ethyl acetate, Ethyl formate, Formic acid, Hexane, Pyridine (ACS Grade; Fisher Scientific)
Acetone-d6, Chloroform-d, Methanol-d4(Deuteration, Cambridge Isotope)
Acetone (A.R. Grade; E. Merck), Methanol (A.R. Grade; E.
Merck)
Ethanol (Ultra Pure; Alps Chem Co., LTD) Methanol (HPLC Grade; Mallinckrodt) Pyridine-d5(Deuteration, Aldrich)
四、抗癌活性分析：
細胞株：
MCF-7 人乳腺癌細胞
Source: Food Industry Research and Development Institute BCRC Number: 60436
Type: Human breast adenocarcinoma Species: Homo Sapiens (Human) Tissue: mammary gland, breast Growth property: Adherent Morphology: Epithelial
Incubation Condition: 37oC, 5% CO2 HepG2 人類肝癌細胞：
Source: Food Industry Research and Development Institute BCRC Number: 60364
Type: human hepatoblastoma Species:Homo sapiens (human)
Tissue: Liver; hepatocellular carcinoma Growth property: Adherent
Morphology: Epithelial
Incubation Condition: 37C, 5% CO2 細胞培養液：
Minimum Essential Medium (Gibco) Fetal bovine serum (Gibco)
Non-essential amino acids (Gibco) L-Glutamine (Gibco)
Sodium-Pyruvate (Hyclone) 活性分析試藥與試劑：
Dimethyl Sulfoxide (DMSO) (Sigma)
MTT ([3-(4,5dimethylthialzol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium]
bromide (Sigma) Doxorubicin (Sigma)
第三章 化合物構造之結構鑑定
本實驗中共從白英 solanum lyratum Thunb.分得十八個化合物，，化合 物 1-18 上述化合物經解析各種光譜及物理數據，詳述決定構造如後。
化合物 1 (3,3',4',7-tetramethoxymyricetin) 之結構解析
O
O OH H3CO
OCH3
OCH3
OH
OCH3
化合物 1 為黃色針狀結晶，與 FeCl3試劑呈藍黑色反應。
氫譜 (DMSO-d6, 500 MHz) 顯示有四個甲氧基信號，分別於 δH
3.75 (3H, s)、δH3.80 (3H, s)、δH3.82 (3H, s)、δH3.83 (3H, s)。在芳香 區域中，有兩組間位偶合氫訊號；較高磁場的一組為δH6.32 (1H, d, J
= 2.0 Hz)、6.68 (1H, d, J = 2.0 Hz)，其化學位移符合黃酮類骨架 A 環 6、8 位置氫訊號之特徵值；較低磁場的一組間位偶合訊號 δH7.17 (1H, d, J = 1.9 Hz)及 δH7.24 (1H, d, J = 1.9 Hz)，化學位移近似 myricetin 骨 架的 B 環氫譜位移值，推測應為 B 環上不對稱甲氧基取代造成兩氫 化學不等位。依以上物理性質及氫譜特徵，推測本化合物為 Flavonol 類化合物。
解析碳譜，1 具有四個甲氧基碳 (δC56.0、δC56.1、δC60.0、δC
60.1)，尚有一個羰基吸收的碳 δC 178.3 及十四個 SP2碳原子 (δC 92.4 ~ δC161.0)。碳數符合黃酮類骨架類特徵，經由 HMBC 中 A、B 環芳香 氫對此十四烯類碳之關聯訊號 (Table 2) 及各碳吸收大小相對關係，
確認主骨架之連結方式。同時，B 環上之特徵訊號 δC104.0 及 δC
110.0 可確認化合物 1 為具有甲氧基取代之 myricetin 骨架。經解析甲 氧基氫與芳香碳之 HMBC 關聯訊號：δH3.82 / δC 165.5 (C-7) 可確認 甲氧基δH3.82 接於 C-7 位置、δH3.80 / δC138.8 (C-3) 可確認甲氧基 δH3.80 接於 C-3 位置、δH3.83 / δC150.6 (C-3') 可確認甲氧基 δH3.83 接於 C-3'位置、δH3.75 / δC139.0 (C-4') 可確認甲氧基 δH3.75 接於 C-4' 位置。
綜合以上物理數據及圖譜解析，並與文獻資料比對後，確認此化 合物為 3,3',4',7- tetramethoxymyricetin (1)46。
Table 2 NMR spectral data of compound 1 (δ values,in DMSO-d6,
J in
Hz)Position δ(13C) δ1H mult (J,Hz) HMBC 2 155.4
3 138.8 4 178.3
5 161.0 12.53 (bs) C-5, C-6, C-10 6 98.0 6.32 (d, 2.0 Hz) C-5, C-7, C-8, C-10 7 165.5
8 92.4 6.68 (d, 2.0 Hz) C-6, C-7, C-9, C-10 9 156.4
10 105.4 1' 125.0
2' 104.0 7.17 (d, 1.8 Hz) C-1', C-2', C-4', C-5', C-2 3' 153.1
4' 139.0
5' 150.6 9.68 (bs, OH) C-2', C-3', C-4'
6' 110.0 7.24 (d, 1.8 Hz) C-1', C-3', C-4', C-5', C-2 3-OMe 60.0 3.80 (3H, s) C-3
7-OMe 56.1 3.82 (3H, s) C-7 3'-OMe 56.0 3.83 (3H, s) C-3' 4'-OMe 60.1 3.75 (3H, s) C-4'
8-H 6-H 6'-H 2'-H
O
O OH H3CO
OCH3
OCH3
OH
OCH3 7.24 7.17 6.68
6.32
3.80
3.83 3.75
3.82
12.53
9.68
Fig. 41H-NMR spectrum of 1. (DMSO-d6, 500 MHz)
8
O
O OH H3CO
OCH3
OCH3
OH
OCH3
6 2' 8
4'-OH 6' 5-OH
3'-OMe 7-OMe 3-OMe 4'-OMe
8 6 102' 6'
1'
5' 34'
3' 29
5 7
4
Fig. 6 HMBC spectrum of 1. (DMSO-d6)
化合物 2 (3, 3’, 7 - trimethoxyquercertin)之結構解析
O
O
OCH3
OH H3CO
OCH3
OH
化合物 2 為黃色針狀結晶，與 FeCl3試劑呈藍黑色反應。
2 之氫譜 (DMSO-d6, 500 MHz) 顯示有三甲氧基信號，分別為 δH
3.79 (3H, s)、δH3.84 (3H, s)、δH3.94 (3H, s)。在芳香區域中，有一組 間位偶合氫吸收訊號，為δH6.34 (1H, d, J = 2.0 Hz)、6.42 (1H, d, J = 2.0 Hz)，其化學位移符合黃酮類骨架 A 環 6、8 位置氫位移特徵，另在 較低磁場有一組 ABX 系統偶合氫之訊號，分別為 δH6.95 (1H, d, J = 8.4 Hz)、δH7.62 (1H, d, J = 8.4, 1.9 Hz)、δH7.65 (1H, d, J = 1.9 Hz)，化 學位移符合 Quercertin 骨架的 B 環氫譜特徵。無 C 環氫訊號可推測此 化合物為 Quercertin 的多甲氧基衍生物。
碳譜中除去三甲氧基碳δC 55.9、δC56.0、δC59.9 後，餘下一羰基 碳(δC178.2)及十四個 sp2碳質子 (δC92.5 ~ δC165.3) 的 C3-C6-C3黃酮 類特徵。經由 HMBC 中各芳香氫對碳之關聯訊號 (Table 3) 及各碳碳 譜吸收，推定主骨架之連結方式後，可確認此化合物為
trimethoxyquercertin。經解析甲氧基氫與芳香碳之 HMBC 由 δH3.79 / δC138.1 (C-3)、δH3.84 / δC165.3 (C-7)、δH3.84 / δC147.6 (C-3') 關聯
訊號，確認甲氧基取代位置。
綜合以上物理數據及圖譜解析，並與文獻資料比對一致後，確認 此化合物為 3,3’,7- trimethoxyquercertin (2)47。
Table 3 NMR spectral data of compound 2 (δ values,in DMSO-d6,
J in
Hz)Position δ(13C) δ1H mult (J, Hz) HMBC (H→C) 2 155.9
3 138.1 4 178.2
5 161.0 12.63 (bs) C-5, C-6, C-10 6 97.9 6.34 (d, 2.0 Hz) C-5, C-7, C-8, C-10 7 165.3
8 92.5 6.76 (d, 2.0 Hz) C-6, C-7, C-9, C-10 9 156.4
10 105.3 1' 122.5
2' 112.2 7.65 (d, 1.9 Hz) C-1', C-3', C-4', C-2 3' 147.6
4' 150.0 9.99 (bs) C-3', C-4', C-5' 5' 115.8 6.95(d, 8.4 Hz) C-2', C-4', C-6' 6' 120.8 7.62 (dd, 8.4 Hz, 1.9 Hz) C-2', C-4', C-2 3-OMe 59.9 3.79 (3H, s) C-3
7-OMe 55.9 3.84 (3H, s) C-7 3'-OMe 56.2 3.84 (3H, s) C-3'
6-H 8-H 5'-H 2'-H6'-H
3-OMe
7-OMe 3'-OMe
O
O OH H3CO
OCH3
OH
OCH3 7.62 7.65
6.76
6.34
3.78 3.84
3.84
6.95
12.63
9.99
12-OH
4'-OH
Fig. 71H-NMR spectrum of 2. (DMSO-d6, 500 MHz)
4 7 5
2 3 6 8
9 4' 3' 6'1' 5' 2' 10 3-OMe
3;-OMe 7-OMe
O
O OH H3CO
OCH3
OH
OCH3 155.9
138.1
178.2 161.0
97.9 165.3
92.5 122.5
112.2
147.6
150.0
120.8 115.8
59.9 56.2
55.9
Fig. 813C-NMR spectrum of 2. (DMSO-d6, 125 MHz)
8-H6-H 5'-H 2'-H6'-H
3-OMe 7-OMe
3'-OMe
12-OH 4'-OH
3;-OMe 7-OMe
86 10 5'2'
6'1'
4 57
92 4'3'
3 3'-OMe
O
O OH H3CO
OCH3
OH
OCH3
Fig.9 HMBC spectrum of 2. (DMSO-d6)
化合物 3 (3,4'-dimethoxykampferol) 之結構解析
O
O
OCH3
OH HO
OCH3
化合物 3 為黃色無晶型粉末，與 FeCl3試劑呈墨綠色反應。
氫譜 (Acetone-d6, 500 MHz) 顯示有二個甲氧基訊號，分別呈現 於δH3.84 (3H, s)、δH3.89 (3H, s)。在芳香區域中，偏高磁場有一組 間位偶合氫吸收訊號，為δH6.23 (1H, d, J = 2.0 Hz)、6.47 (1H, d, J = 2.0 Hz)，化學位移符合黃酮類骨架 A 環 6、8 位置氫位移特徵，另在 較低磁場有一組 A2X2系統偶合氫訊號δH7.09 (2H, d, J = 9.0 Hz)、8.07 (2H, d, J = 9.0 Hz)，化學位移符合 Kampferol 骨架的 B 環氫譜特徵。
無 C 環氫訊號；推測此化合物為 dimethoxykampferol 骨架。
碳譜中除去二甲氧基碳 δC55.8、δC60.2 後，餘下一羰基碳 (δC
179.4) 及十四 sp2碳 (δC105.6 ~ δC162.6) 的典型黃酮類特徵。經由 HMBC 中各芳香氫（Table 4）及各位置碳關聯訊號，確認 3 之骨架 之連結方式後，B 環上之特徵吸收 δC114.8 (2C) 及 δC130.9 (2C) 可 確認化合物 3 為 dimethoxyKampferol。經解析甲氧基氫與芳香碳之 HMBC 關聯訊號 δH3.84 / δC139.2 (C-3)、δH3.89 / δC162.6 (C-4')，確 認甲氧基取代於 C-3、C-4'。
綜合以上物理數據及圖譜解析，並與文獻資料比對一致後，確認 此化合物為 3,4'-Dimethoxykampferol (3)48。
Table 4 NMR spectral data of compound 3 (δ values,in Acetone-d6,
J in
Hz)Position δ(13C) δ1H mult (J, Hz) HMBC
2 156.4
3 139.2
4 179.4
5 163.0 12.72 (br s) C-5, C-6, C-10 6 99.4 6.23 (d, 2.0 Hz) C-5, C-7, C-8, C-10
7 165.1
8 94.5 6.47 (d, 2.0 Hz) C-9, C-7, C-6, C-10
9 157.7
10 105.6 1' 123.5
2' 130.9 8.07 (d, 9.0 Hz) C-1', C-3', C-4', C-6' 3' 114.8 7.09 (d, 9.0 Hz) C-2, C-2', C-4', C-5' 4' 162.6
5' 114.8 7.09 (d, 9.0 Hz) C-2, C-2', C-3', C-4' 6' 130.9 8.07 (d, 9.0 Hz) C-1', C-2', C-3', C-4' 3-OMe 60.2 3.84 (3H, s) C-3
4'-OMe 55.8 3.89 (3H, s) C-4'
37
6-H 3'5'-H 8-H
2'6'-H
3-OMe
5-OH
4'-OMe
O
O
OCH3
OH HO
OCH3
6.23 6.47
8.07 7.09 7.09 8.07
3.89
3.85
12.72
Fig. 101H-NMR spectrum of compound 3. (Acetone-d , 500 MHz)
38
3 4'
3-OMe 4'-OMe
O
O
OCH3
OH HO
OCH3
Fig. 12 HMBC spectrum of compound 3. (Acetone, 500 MHz)
化合物 4 (3,3',7- trimethoxymyricetin)之結構解析
O
O OH HO
OCH3
OCH3
OH
OCH3
化合物 4 為黃色無晶型粉末，與 FeCl3試劑呈藍綠色反應。
氫譜 (DMSO-d6, 500 MHz) 顯示有三甲氧基氫訊號，分別為 δH
3.75 (3H, s)、δH3.79 (3H, s)、δH3.82 (3H, s)。在芳香區域中，有兩組 間位偶合氫之訊號，較高磁場的一組為δH6.19 (1H, d, J = 2.0 Hz)、6.43 (1H, d, J = 2.0 Hz)，化學位移符合黃酮類骨架 A 環 6、8 位置氫訊號 特徵，較低磁場的一組間位偶合氫δH7.15 (1H, d, J = 2.0 Hz)及 δH7.20 (1H, d, J = 2.0 Hz)，偶合形式推測為間位取代，加上化學吸收近似 myricetin 骨架的 B 環氫譜位移值，推測應為 B 環上不對稱甲氧基取 代，造成兩氫化學不等位。綜合以上物理性質及氫譜特徵，推測本化 合物為 Flavonol 類化合物。
解析碳譜，除三甲氧基碳外 (δC56.0、δC 60.0、δC60.1)，尚有一 羰基碳δC 178.1 及十四個 sp2碳訊號 (δC 93.9 ~ δC164.4) 可被觀察。
碳數符合黃酮類骨架特徵。B 環上之特徵吸收 δC103.9 及 δC109.9 可 確認化合物 4 為 trimethoxymyricetin 骨架。比對化合物 1 之碳譜可 發現本化合物碳譜在 B 環的化學位移幾乎沒有改變，而在 A 環的位
移出現微細差異 (C-6 = +0.8 ppm, C-7 = -1.1 ppm, C-8 = +1.5 ppm，δC
化合物 4 減 δC 化合物 1 )，且比對甲氧基的氫譜及碳譜可發現化合 物 4 較化合物 1 少了 7-OMe (δH3.82 / δC56.0)，因此推論出本化合 物的甲氧基連結於 C-3、C-3'及 C-4'。
綜合以上物理數據及圖譜解析，並與文獻資料比對一致後，確認 此化合物為 3,3',4' –trimethoxymyricetin (4)49。
Table 5 NMR spectral data of compound 4 (δ values,in DMSO-d6,
J in
Hz)Position δ(13C) δ1H mult (J, Hz)
2 156.5
3 138.6
4 178.2
5 161.3 12.54 (bs) 6 98.8 6.19 (d, 2.0 Hz)
7 164.4
8 93.9 6.43 (d, 2.0 Hz)
9 156.5
10 106.3 1' 125.1
2' 103.9 7.15 (d, 2.0 Hz) 3' 153.1
4' 139.0 5' 150.6
6' 109.9 7.20 (d, 2.0 Hz) 3-OMe 60.0 3.79 (3H, s) 3'-OMe 56.0 3.82 (3H, s) 4'-OMe 60.1 3.75 (3H, s)
O
O OH HO
OCH3
OCH3
OH
OCH3
12.54 6.19
6.43
12.54 7.15 7.20
3.75
3.82
8-H6-H 2'-H
3'-H
5-OH
Fig. 131H-NMR spectrum of compound 4. (DMSO-d6, 500 MHz)
8
Fig. 1413C-NMR spectrum of compound 4. (DMSO-d6, 125 MHz)
化合物 5 (3-methoxykampferol) 之結構解析
O
O
OCH3
OH HO
OH
化合物 5 為黃色無晶型粉末，其之紅外線光譜顯示有羥基 ( 3208 cm-1) 、羰基 (1660 cm-1) 及苯環 (1602 cm-1, 1498 cm-1) 等官 能基的存在。另外，紫外光譜在 268 nm (5.08) 及 350 nm (4.93) 有最 大吸收 (λmaxMeOH (log ε))，與 FeCl3試劑呈墨綠色反應。
氫譜 (DMSO-d6, 500 MHz) 顯示有一甲氧基信號 δH3.74 (3H, s )。高磁場位置 δH12.65 (1H, br s)為受氫鍵影響位移之羥基，據其特 徵可推測為黃酮類 C-5 位置之羥基。在芳香區域中，於 δH6.17 (1H, d,
J = 2.0 Hz)、6.42 (1H, d, J = 2.0 Hz) 有一組間位偶合質子吸收訊號，
推測黃酮類骨架 A 環 6、8 位置氫，另在較低磁場有一組 AA'XX'系 統偶合氫訊號δH6.92 (2H, d, J = 9.0 Hz)、7.90 (2H, d, J = 9.0 Hz)，化 學位移與 kampferol 骨架的 B 環氫譜特徵相似。可推測此化合物為 methoxy kampferol 骨架。
於 5 之碳譜中呈現一甲氧基碳 δC59.8，一個羰基碳 (δC178.0) 及十四個 sp2碳 (δC104.3 ~ δC161.3) 的黃酮類特徵。甲氧基之化學位 移δC59.8 位移相對於一般黃酮類 AB 環上甲氧基取代之 δC55 處於較
低磁場，可推測此甲氧基為 C 環受羰基影響之 C-3 位置取代。
綜合以上物理數據及圖譜解析，並與文獻資料比對後，確認此化 合物為 3-methoxykampferol (5)50。
Table 6 NMR spectral data of compound 5 (δ values,in DMSO-d6,
J in
Hz)Position δ(13C) δ1H mult (J, Hz)
2 155.7
3 137.7
4 178.0
5 160.2 12.65 (br s) 6 98.6 6.18 (d, 2.0 Hz)
7 164.2
8 93.8 6.42 (d, 2.0 Hz)
9 156.4
10 104.3
1' 120.6
2' 130.2 7.91 (d, 9.0 Hz) 3' 115.7 6.91 (d, 9.0 Hz)
4' 161.3
5' 115.7 6.91 (d, 9.0 Hz) 6' 130.2 7.91 (d, 9.0 Hz) 3-OMe 59.8 3.75 (s)
O
O
OCH3
OH HO
OH
6.18
6.42
7.91 6.91 6.91 7.91
3.71 12.65
5-OH 2' 6' 3' 5' 8 6
3-OMe
Fig. 151H-NMR spectrum of compound 5. (DMSO-d6, 400 MHz)
4 2 3
Fig. 1613C-NMR spectrum of compound 5. (DMSO-d6, 100 MHz)