實驗結果
實驗一、青鱂魚仔魚馴養 FW 和 SW 環境,其個體每單位體重(g),
每小時(hr),其 NH4+排放量的差異
利用 Ammonia Assay Kit 檢測,馴養 FW、SW 和 HA-SW 的 7-dpf 仔魚,其 NH4+排放量的差異。結果顯示 HA-SW 組的排氨量(14.69 µmol g-1 h-1)顯著高於其他兩組;並且 SW 組的排氨量(8.29 µmol g-1 h-1) 顯著高於 FW 組(0.73 µmol g-1 h-1)11.3 倍(圖 1)。
實驗二、青鱂魚仔魚馴養 FW、SW 和 HA-SW,其卵黃囊體表和細胞 所累積的 H+濃度之差異
圖 2A 為測量青鱂魚仔魚體表(skin)和細胞(mitochondria-rich cells,MRCs;keratinocytes,KCs)離子累積濃度的位置。結果顯示 SW 組的 ∆[H+]顯著高於其他三組,∆[H+]比 FW 高 2.5 倍;然而 HA-SW 組的 ∆[H+]皆顯著低於 FW、SW 組,並且 5 mM NH4+處理組,其 H+ 體表累積濃度比背景值低(呈現鹼性)(圖 2B)。利用 SIET 測量 SW 和 HA-SW 組的 MRCs 頂膜開口處和鄰近 KCs 的 H+累積濃度,SW 組 MRCs 的 ∆[H+]顯著高於鄰近 KCs 約 3 倍;HA-SW 組(5 mM
NH4+
)MRCs 的 ∆[H+]顯著高於鄰近 KCs,且 KCs 呈現負值。兩個馴
2C)。
實驗三、EIPA 處理對於 SW 馴養的青鱂魚仔魚,其(一)其卵黃囊體表 和細胞所累積 H+濃度之影響;其(二)NH4+排放速率之影響
仔魚使用不同濃度的抑制劑 EIPA(100、200、500、1000 µM)浸 泡 30 分鐘後,測試 NHE 對於海水魚排 H+的貢獻度。處理 EIPA 濃度 100 和 200 µM 組,∆[H+]與海水控制組並無顯著差異;而處理 500 和 1000 µM 組,與控制組比較,∆[H+]顯著的降低,分別降低 38.1%和 52.8%(圖 3A)。使用 500 µM 的 EIPA 浸泡 1.5 小時處理後,與控制組 比較,其 MRCs 的 ∆[H+]顯著的下降約 94.5%;而 KCs 則無顯著差異 (圖 3B)。
利用 Ammonia Assay Kit 檢測,處理不同 EIPA 濃度(100 和 200 µM),其 NH4+排放量的差異。結果顯示 NH4+的排放量 (µmol g-1 h-1),
SW 組顯著高於 EIPA 處理組,並隨著處理 EIPA 濃度增加,而降低 NH4
+的排放量(圖 4)。
實驗四、外在環境鹽度改變對仔魚其(一)卵黃囊體表累積 H+和 NH4+
濃度之影響;其(二)細胞所累積的 NH4+濃度之影響
轉移組(SWFW)與 SW 組比較,海水轉移至淡水 0、0.5、1、2 小時後,在各時間點皆顯著降低 ∆[H+](圖 5A)。在瞬間轉移(0 小時)
後,∆[H+]顯著比 SW 組低;轉移 0.5 小時,∆[H+]顯著比 FW 組低約 1.3 倍;轉移 1 小時,與淡水組無顯著差異;轉移至 2 小時,∆[H+] 顯著比淡水組高約 1.3 倍(圖 5A)。轉移組的 NH4+排放量在各時間點 皆顯著低於 FW 組(圖 5B)。海水轉移至淡水 0.5、1 小時後,與 0 小 時比較,NH4+和 H+排放量顯著下降;直到 2 小時後,NH4+和 H+排放 量顯著高於轉移瞬間(0 小時) (圖 5B)。
FW、SW 和 HA-SW 組在轉移至 FW 下測量三組的細胞所累積 NH4+濃度,SW 組 MRCs 的 NH4+排放量顯著高於鄰近 KCs 約 6 倍;
HA-SW 組 MRCs 的 NH4+排放量顯著高於鄰近 KCs 約 2.2 倍;FW 組 MRCs 的 NH4+排放量顯著高於鄰近 KCs 約 2.2 倍。三個馴養組 MRCs 的 NH4+排放量比較,HA-SW 組和 FW 組無顯著差異,而 SW 組顯著 低於其他兩組;KCs 的 NH4+排放量也呈現相同結果(圖 6)。
實驗五、馴養 FW 酸性環境(pH5)的青鱂魚仔魚,在 pH7 環境下測量 對其卵黃囊體表和細胞所累積的 H+、NH4+、Na+濃度之影響,並加以 比較不同區域(卵黃囊、軀幹)細胞的累積程度
馴養 FW5 後,在 FW7 水體下測量。FW7 組,其 ∆[H+]顯著高於 淡水 pH5 組約 1.7 倍(圖 7A);FW7 組,其 NH4+排放量顯著低於 FW5 組約 1.6 倍(圖 7B);而 ∆[Na+],兩組間無顯著差異,皆為排放(圖 7C)。
測量兩組的細胞累積程度,兩組 MRCs 的 ∆[H+]皆顯著高於 KCs;FW5 組 MRCs 的 ∆[H+]與 FW7 組無顯著差異,KCs 亦同(圖 8A)。
兩組 MRCs 的 NH4+排放量皆顯著高於 KCs;FW5 組的 MRCs,其 NH4+
排放量顯著高於 FW7 組的 MRCs 約 2.6 倍,兩組 KCs 無顯著差異(圖 8B)。兩組的 MRCs 皆呈現 Na+吸收(∆[Na+]為負值),FW5 組的 MRCs,
其 Na+吸收量顯著高於 pH7 組的 MRCs 約 3.5 倍;而 KCs 皆為排放 Na+(正值),其淡水 pH5 組顯著高於 pH7 組約 4 倍(圖 8C)。
FW5 組軀幹的 MRCs,其 ∆[H+]顯著高於軀幹的 KCs;但卵黃囊 區的 MRCs 與 KCs 無顯著差異(皆為負值,鹼性)。FW5 組卵黃囊區 的 MRCs,其 ∆[H+]顯著低於軀幹的 MRCs,並呈現負值(鹼性),KCs 亦同(圖 9A)。卵黃囊區和軀幹的 MRCs,其 NH4+排放量顯著高於該 區的 KCs;卵黃囊區的 MRCs,其 NH4+排放量顯著高於軀幹的 MRCs 約 1.6 倍,兩區域的 KCs 無顯著差異(圖 9C)。軀幹和卵黃囊區 MRCs 的 Na+檢測皆為負值(Na+吸收),而 KCs 皆為 Na+排放。卵黃囊區的 MRCs,其 Na+吸收顯著高於軀幹的 MRCs 約 2.8 倍;卵黃囊區的 KCs,
其 Na+排放顯著高於軀幹的 KCs 約 1.7 倍(圖 9E)。
FW7 組軀幹和卵黃囊區的 MRCs,其 ∆[H+]顯著高於該區的 KCs;兩區域的 MRCs,其 ∆[H+]無顯著差異(圖 9B)。卵黃囊區和軀 幹的 MRCs,其 NH4+排放量顯著高於該區的 KCs;卵黃囊區的 MRCs,
其 NH4+排放量顯著高於軀幹的 MRCs 約 1.5 倍,KCs 亦同約 1.9 倍(圖 9D)。軀幹和卵黃囊區的 MRCs 皆為 Na+吸收,而 KCs 皆為 Na+排放。
卵黃囊區的 MRCs,其 Na+吸收顯著高於軀幹的 MRCs 約 4.8 倍;兩 區域的 KCs 無顯著差異(圖 9F)。