實驗一、測量 aqp8aa 在 1pdf 到 4dpf 仔魚的基因表現量
實驗二、測量 aqp8aa 在高氨及高碳酸馴養下的基因表現量
實驗三、測量 aqp8aa 在高氨及高碳酸馴養下的蛋白質表現量
實驗四、標定 aqp8aa 在斑馬魚仔魚上的分布及細胞上的分布
實驗五、測量 aqp8aa 在抑制離子細胞生成後基因的表現量
實驗六、測量 aqp8aa MO 各濃度之蛋白質表現量
實驗七、測量 aqp8aa knockdown 對於整體的 Δ[H+]及 Δ[NH4
+]的影響
實驗八、測量 aqp8aa knockdown 1% CO2填充對仔魚整體 Δ[H+]影響
實驗九、測量 aqp8aa knockdown 1 % CO2填充對特定細胞 Δ[H+]影響
實驗十、測量 aqp8aa knockdown 對特定細胞 Δ[NH4
+]影響
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實驗一、aqp8aa 在 1pdf 到 4dpf 仔魚的基因表現量
仔魚自受精後開始分別馴養至 1dpf、2dpf、3dpf、4dpf 犧牲抽取
RNA，針對 aqp8aa 基因進行即時定量 QPCR 試驗，分析樣品的 mRNA 相對表現量，各組樣本數為 6，利用 RPL13a 為 internal control gene。
實驗二、aqp8aa 在高氨及高碳酸馴養下的基因表現量
斑馬魚仔魚自受精後分別進行 NW、1% CO2 填充 PH5 馴養及
5mM NH4+環境馴養至 3 dpf 後犧牲抽取 RNA。每日換水並監控水體 酸鹼值變化與溫度恆定，針對 aqp8aa 基因以即時定量 PCR 定量其
mRNA 表現情形，以說明 CO2及高氨環境對於基因表現量的調節情 形。各組樣本數為 6。rpl13a 為 internal control gene。
實驗三、aqp8aa 在高氨及高碳酸馴養下的蛋白質表現量
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將斑馬魚仔魚受精後 3 天進行固定，置換於 PBS 並進行原位雜 交法仔魚體表表皮細胞以分別以 aqp8aa anti-sense RNA 探針與 aqp8aa sense RNA 探針進行標定，並將已標定 aqp8aa 的仔魚進一步
以免疫螢光染色法，分別以 HR cell 的 marker (HA), NaR cell 的 marker
(NKA)與 NCC cell 的 marker (NCC)進行標定，以驗證 aqp8aa 表現在 仔魚表皮細胞的何處，且表現於何型離子細胞上。
來驗證 aqp8aa 是否分布於兩型離子細胞上。各組樣本數為 6。rpl13a 為 internal control gene。
實驗六、aqp8aa MO 各濃度之蛋白質表現量
利用 aqp8aa MO 分別注以下三種濃度組別 0 ng/egg、2 ng/egg、4 ng/egg，馴養至 3 dpf 後犧牲抽取蛋白質。每日換水並監控水體酸鹼 值變化與溫度恆定，針對 AQP8AA 蛋白質以 western blot 定量其蛋白
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質表現情形，以說明 aqp8aa MO 確實能夠有效抑制其蛋白質生成且 其抗體之專一性。rpl13a 為 internal control 。
實驗七、aqp8aa knockdown 對於整體的 Δ[H+]及 Δ[NH4+
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排出氫離子的差異，以證明 AQP8AA 可能參與著 CO2通透作用。各 組樣本數為 6。
實驗九、aqp8aa knockdown 1% CO2填充對仔魚整體 Δ[H+]影響
從水鏡下我們可以藉由型態的差異清楚的分辨離子細胞與PVC，
而將離子細胞利用外觀分為HRC及Non-HRC 兩型。再利用SIET技術 分別進行測量其細胞之氫離子濃度梯度，並拍照紀錄細胞位置再將仔 魚進行1 % CO2填充水體浸泡10分鐘後，在NW環境下以SIET測量同 一顆細胞氫離子濃度梯度，比較同一個細胞在NW與1 % CO2填充後，
氫離子濃度梯度差異。以推測其細胞上AQP8AA蛋白質弱化後是否對 於其CO2的排放會造成差異，加以驗證AQP8AA可能參與著CO2的排 放作用。各組樣本數為6。
實驗十、aqp8aa knockdown 對特定細胞 Δ[NH4
+]影響
利用 SIET 技術針對 aqp8aa knockdown 後 3 dpf 之斑馬魚仔魚進 行兩型離子細胞之氨離子濃度梯度測量，驗證弱化 AQP8AA 蛋白質 生成之後，對於斑馬魚仔魚排出氨離子的差異，以證明 AQP8AA 是 否參與著氨的通透作用。各組樣本數為 6。
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