3-1 實驗流程
圖 5 整體實驗流程圖
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3-2 3D 細胞支架製作方法
本實驗使用的材料聚乙烯醇(PVA)、卡德蘭膠(Curdlan)購於日東化學 製藥公司(Nitto Chemical Pharmaceutical Company)、甲醛(Formaldehyde) 購於 Aldrich Chemical Company、硫酸 (H2SO4)購於第一化學公司(First
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以冷凍乾燥處理，接著保存在防潮櫃中。
表 1 PVA-Curdlan 化學交聯的製作條件
3-3 傅立葉紅外線光譜儀(FT-IR) 分析
將原料與交聯後的 PVA-Curdlan 3D 細胞支架，利用冷凍乾燥去除水 分後，將乾燥的待測物品壓成片後，再置入 FT-IR 進行分析。光譜吸收 範圍為 650cm-1 - 4000cm-1 ，分析後觀察 PVA-Curdlan 3D 細胞支架官能 基的變化。並繪製成對照圖表。
3-4 電子顯微鏡(SEM) 分析
將待觀測的細胞支架樣本完全乾燥後，以導電帶黏在銅座上，並以真 空蒸鍍機度上鉑(Pt)，然後放置於 SEM 的樣品基座上，調整致所要觀察 的位置，進行觀察拍攝。而經過酵素分解的細胞支架樣品也以相同的方 式進行處理並且拍攝型態。而有培養細胞的 3D 細胞支架則需先在 10%
的甲醛浸泡 24h，使細胞能夠慢慢脫水並且固定在細胞支架上，再以冷
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凍乾燥的方法乾燥後，如上述處理待觀測的細胞支架的處理方式進行 SEM 觀察並且進行能量散射光譜儀(EDS)分析 3D 細胞支架表面所含的 元素物質。
3-5 PVA-Curdlan 細胞支架的膨潤度
經過交聯後的 PVA-Curdlan 3D 細胞支架我們以冷凍乾燥的方式將它
3-6 PVA-Curdlan 細胞支架的孔隙率測試
孔隙在 3D 細胞支架的研究中是一個重要的因子，其原因在於孔隙可 能會對 3D 細胞支架的一些性能有關，例如: 支架的機械強度、細胞的 生物相容性、酵素的分解率等等有著很大的影響。 這個實驗的孔隙率[33]
是藉由體積的移除去計算出來。將 3D 細胞支架樣品浸泡於已知體積(V1)
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的二種酵素，分別為 Lipase 脂解脢(20μg/ml)、Lysozyme 溶菌酶(20μg/ml) 這兩種酵素，並且加入一組以 PBS 溶液當作對照組，進而和兩種酵素進
3-8-1 脂肪酵素(Lipase)
脂肪酵素又稱為胰脂酵素或是解脂酵素，是一種能促進分解脂肪的酵
3-8-2 溶菌酶(Lysozyme)
溶菌酶是一種低分子量的、不耐熱的堿性蛋白質，其中富含精氨酸。
27 的細胞培養液成分含有 DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)、
FBS(Fortified Bovine)10%、Penicillin Streptomycin Solution 1%，和 2.2g NaHCO3 並且以 HCL、NaCl 進行調整培養液的 PH 值約 7.4。培養箱的
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的表面，之後放置 37℃和 5% CO2以及 95% 的相對濕度的培養箱之中 並且在 30 分鐘後取出，再將細胞支架移至沒有添加任何試劑的孔盤中，
並添加 2mL 培養一開始進行細胞附著的試驗，培養五天後將含有細胞 的 3D 細胞支架並泡於 5mL 10%的甲醛 24 小時，甲醛易溶脂類物質，
因此能穿過細胞膜並進入細胞內。使用甲醛固定細胞使細胞能夠完整的 固定在 3D 細胞支架上，透過觀察細胞在 3D 細胞支架上的生長情形，
確認細胞支架在醫療上面的應用，並利用 EDS 儀器分析出是否在 PVA-Curdlan 3D 細胞支架上有細胞的元素。
3-10 能量散射光譜儀(EDS)
EDS 為能量散射光譜儀(Energy Dispersive Spectrometer)的簡稱，主要 利用電子束所激發的特性 X 光來檢測待測樣品的定性或半定量化學成 份分析。擷取物質放射出來的特性 X 光，分析其能量散佈圖，即可知該 樣品元素的組成[34]，使原有的物性結構分析能力外，再增添化學元素分 析的功能。
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