抗生物質之純度

經以上各步驟純化之抗生物質，以 Silica 60 TLC 片和 Ethyl Acetate：

Methanol＝ 8：2 的展開液進行分析。展開後再以 25％硫酸溶液顯色。實 驗結果如圖 8、9 所見，顯示此時除了抗生物質外尚有另一雜質的存在。展 開後未經處理之 TLC 片經由抗菌檢測後，有一明顯抑菌圈產生，此為抗生 物質之位置所在。此外，在實驗中發現一特殊現象；薄膜色層分析時，如 果展開前：

（一）以涼風吹拂 1 分鐘時：

展開後，發現抗生物質及雜質均會被展開液帶離原點，雜質出現位置 緊鄰於抗生物質下方。

（二）以熱風吹拂 1 分鐘時：

展開後，發現抗生物質同樣會被展開液帶離原點，但雜質則是停留在 原點處。

表 10. AB-10 抗生物質於各純化步驟下之回收率

純化步驟 體積(ml) 總活性(mm) 回收率(%)

粗培養液 600 9600 100

經丙酮沉澱 500 8000 83.3

經一次活性碳抽濾 300 6000 62.5

經二次活性碳抽濾 300 4400 45.8

經 Sephadex G-15 管柱層析 120 3120 32.5

將各步驟之純化產物分別稀釋至有效濃度後，做抗菌活性實驗分析，測量 其抑制圈大小，乘上稀釋倍數及體積做為抗菌物質之含量定義；在將初培 養液定為 100％下與之比較後，以此計算出各步驟在純化過程中的回收率。

（A） （B） （C）

圖 8. AB-10 抗生物質於 TLC 上之表現 （A）以涼風吹拂 1 分鐘

（B）以熱風吹拂 1 分鐘 （C）以熱風吹拂 2 分鐘

展開系統：Silica gel 60 TLC

Ethyl Acetate：Methanol＝8：2

（A）

（B）

圖 9. AB-10 抗生物質之純度表現及相對應之抑制圈位置 （A）TLC 片未經 25%硫酸溶液顯色

（B）TLC 片經 25%硫酸溶液顯色

展開系統：Silica gel 60 TLC

Ethyl Acetate：Methanol＝8：2

（三）以熱風吹拂 2 分鐘時：

展開後，發現抗生物質將不會被展開液帶開；雜質與抗生物質均會停 留在原點的位置。

此雜質在以冷風處理下，展開後不但緊鄰在抗生物質的下方，在 UV254nm 光照下，更與抗生物質有著非常雷同的淡黃色螢光表現，經反覆 推敲下，認為：此雜質與抗生物質之間極有可能是 isoform 的關係，此現 象在生物體內非常的常見（如：人體內的酒精脫氫酶）。

在薄膜色層分析時，分別以冷、熱風經不同時間的吹拂下，有不同的 展開結果。這可能是由於 isoform 物質在結構上有著若干些許差異，造成 其對溫度或乾燥上的耐受性亦有所不同。 從實驗結果得知，此抗生物質與 雜質均會受到高溫、乾燥或是其他因素的影響，導致其結構和極性上發生 變化，進而影響在 TLC 上展開後的表現。比較之下，雜質似乎對溫度或乾 燥的耐受力較低，一旦以熱風吹拂，便無法再被展開液帶離原點；而抗生 物質則是在以熱風吹拂超過 2 分鐘以上時，才會出現停滯在原點的情況。

再者，進一步推測此抗生物質可能有著 epoxide 結構（Bierl,1971），

如圖 10 所示，隨著 epoxide 環狀結構的破壞，其極性關係將由非極性變為 極性，如此一來，就會與 TLC 片上極性的 silica gel 結合，而不被展開液

（A）

（B）

圖 10.（A）Epoxide 之結構 （B）Epoxide 之開環反應

所帶離原點，這與實驗的結果相符合，另一方面，epoxide 上所接之官能 基的不同會影響其環狀結構打開的難易度，這可能也就是抗生物質與雜質 結構上的差異所在。

此外，也可能由於此雜質與抗生物質是 isoform 的關係，彼此的物化 性質非常雷同，導致在分離上的如影相隨，大大增加了純化上的困難，有 待後繼研究者來加以突破。