1. 免疫組織化學染色（ Immunohistochemical stain）：
將第 4 天初代培養海馬迴神經細胞移除培養基後以 PBS 沖洗 5 分鐘 3 次。將細胞以 4% paraformadehyde 浸漬固定 10 分鐘後以 PBS 沖洗 3 次，細胞浸置於 3%H2O2十分鐘以 去除內生性因子。加入阻斷試劑(Blocking agent)於室溫下反 應 30 分鐘，以防止非特異性結合降低偽陽性；相對於對照 組，實驗組加 NSE-? (neuron specific enolase – ? primary antibody；1:1000) 抗體，於室溫下反應 1 小時，以 PBS 清 洗 5 分鐘 3 次後。加入二次抗體(secondary antibody)室溫反 應 1 小時，加入標誌試劑（labeling reagent：streptavidin / peroxidase complex）室溫下反應一小時。以 PBS 清洗 5 分鐘 3 次後以 DAB 溶液（DAB 0.05g、30% H2O2 67μl 溶 於 100ml 1X PB buffer）呈色 5 分鐘後以水清洗停止反應。
以 Hematoxylin 做核染色並將結果以 Image Plus 影像系統 分析。
2. 初代培養海馬迴細胞生存率( Tryphan blue 染色法)：
初代培養海馬迴神經細胞添加類澱粉蛋白 6、12、24、
48、72 小時後移除培養基。以 0.5% Trypsin/EDTA（Sigma）
將細胞剝離後，加入含 10 % 胎牛血清之培養基中止反應。
將細胞懸浮液移入離心管中，1500 rpm 離心 5 分鐘。以 PBS 均勻沖散初次培養基內細胞懸浮液後取 150µl 加入細胞染劑 150µl Tryphen blue（Gibco）並混合均勻，靜置 1 分鐘後以 毛細管將細胞液注入細胞計數器中。於顯微鏡下以核內染上 色為死細胞，核發亮代表活細胞為條件下觀察計數。
3. 細胞凋亡之偵測 ( TUNEL-like 偵測法 )
初代培養海馬迴神經細胞添加類澱粉蛋白 6、12、24、
48、72 小時後移除培養基。以 4 % paraformadehyde 浸漬 固定細胞 10 分鐘，加入 Proteinase K 於室溫中放置 20 分 鐘，再浸置於 3% H2O2中 5 分鐘以去除內生性因子之干擾。
之後加入已配置的 TdT Equilibration Buffer，放置 30 分鐘；
後去除 TdT Equilibration Buffer，加入含 TdT 酵素的反應混 合試劑於 37℃反應 90 分鐘。接著加入 Stop Solution 反應 5 分鐘，加入 Blocking Buffer10 分鐘，拭乾後加入 Conjugate
Buffer，反應 30 分鐘後，以 DAB 呈色 10 分鐘，methyl green 作背景染色後脫水，並於光學顯微鏡下觀察並照相。
4. DNA Fragementation：
將細胞剝離後，以 1500rpm 離心 5mins，吸除上清液並
將細胞彈散。以 PBS 清洗二次後，吸除上清液，加入 0.5ml lysis buffer （ 20mMTris-HCl pH=7.4 、 10mM EDTA 、 0.2%Triton-X 100）後靜置於冰上 10mins。13000 rpm 離心 10mins。取上清液，加入 10 µl Proteinase K 與 5 µl RNase 置於 50℃ 24hrs。加入 1ml（phenol：chloroform：isopanyl Alcohol = 25：24：1）振動均勻。13000rpm 離心 10mins。
加入等量的 isopropanol 及 1 µl glycogen，-20℃放置隔夜。
將 sample 回溫後，13000rpm 離心 10mins 去上清液、加入 1ml 絕對酒精後，13000rpm 離心 10mins 去上清液。加入 1ml 70%酒精後，13000rpm 離心 10mins。去上清液後冷凍 乾燥，將所抽取之 DNA 以 DDW 溶解後注入 1.5% agarose 待 DNA 分離後，以 Ethidium Bromide 染色並於 UV 下觀察。
5. 西方轉漬法（Western blotting） : (A) 蛋白質萃取：
細胞以 PBS 沖洗 3 次後置於冰上以 0.1%SDS 刮取細 胞，保存於-80℃。
(B) 蛋白質定量法（Bradford protein assay）：
甲、 標準曲線製作：
將已知濃度之標準蛋白質溶液 1mg/ml Bovine Serum Albumin（BSA）依序稀釋等倍濃度分別為：0、50、100、
200、400 µg/µl ，由其中各取 20µl 加入 1ml 已 5 倍稀釋的 蛋白質染劑（Bio-red）中混合均勻靜置反應 10 分鐘。利用 分光光度計 595 波長檢測吸光值，再利用線性迴歸畫出標準 曲線（r2 > 0.99）。
乙、 檢體蛋白質定量：
將萃取之蛋白質檢體置於冰水上，以超音波震動 20 秒 後立刻移於冰上靜置 20 秒，重複四次後置入沸水 5 分鐘，
快速移於冰上。取上述經沸水處理後的蛋白質 20µl 加入 1ml 已 5 倍稀釋的蛋白質染劑（Bio-red）中混合均勻靜置反應 10 分鐘。利用分光光度計 595 波長檢測吸光值，再代入標
準曲線中求出檢體的蛋白質濃度。將檢體蛋白質分裝 100µg / tube 以 Savant＠ 濃縮乾燥後保存於-80℃。
(C) 蛋白質電泳（protein electrophoresis）：
將已製備 7~10%的 separating gel 注入玻璃夾層中後，
上 層 加 水 以 維 持 平 衡 ， 約 20 分 鐘 凝 膠 。 將 水 倒 掉 加 入 stacking gel 插上 comb，待膠凝固後將 comb 移除加入 running buffer 至覆蓋過膠。注入 5µl marker（MBI） 及 20~30ug/ well 之檢體蛋白質。通入電流 70 伏特 2.5 小時。
(D) 蛋白質轉漬（transfer）：
於電泳結束後將已分離之蛋白質膠體取出，並截去上 層 stacking gel。依正極至負極方向依序疊放：海綿、3M paper、蛋白質膠、已用甲醇溼潤的 PVDF 轉漬膜、3M paper 及海綿，將其組合完成後將以轉漬盒夾緊放入充滿轉漬緩衝 液之轉漬盒中（Bio-red），置於 4℃，以 100 伏特轉漬 1 小 時。轉漬完成後，取出轉漬膜並於右上方截去一角以作標 示，再將轉漬膜浸置於 5 % 脫脂奶/ TTBS 室溫震搖 1 小時。
(E) 蛋白質偵測（ Immunoblotting）：
將 Blocking 完成之轉漬膜浸於一次抗體溶液中置於 4℃
震搖 overnight。以 TTBS 溶液沖洗轉漬膜 10 分鐘三次。加 入接有 HRP 標誌之二次抗體後置於室溫下震搖 1 小時以 上。以 TTBS 溶液沖洗轉漬膜 10 分鐘三次。加入 ECL 螢光 反應劑反應一分鐘，以 X 光片感光呈像，經顯影、定影後將 底片晾乾，以 NIH Image analysis 影像系統分析。
6. 以流氏細胞儀偵測細胞週期：
以 0.5% Trypsin/EDTA（Sigma）將細胞剝離，加入含 10%胎牛血清之培養基中止反應。將細胞懸浮液移入離心管 中， 1500 rpm 離心 5 分鐘。去上清液，加入 5ml PBS 彈散 細胞團塊後 1500 rpm 離心 5 分鐘，將上清液移除。逐滴加 入 70%EtOH（Merk）並振搖細胞懸浮液避免細胞形成團塊 至總量為 3ml。移置於-20℃保存隔夜。取出檢體， 1500 rpm 離心 5 分鐘。上清液移除後加入 5ml PBS 1500 rpm 離心 5 分鐘。移除上清液，加入 1ml Popidium Iodine stain sol’n
（PI），須避光並於 1 小時內上機。