第一節 病人的篩選
在1995 至 1999 年間，我們於中國醫藥大學附設醫院收集了前列腺癌的病
人和正常受試者共210 位。其中前列腺癌的病人占 96 位，年齡介於 49 到 96 歲
之間，平均年齡為70.6 ± 8.97 歲；正常受試者 114 位，年齡介於 60 到 87 歲之間，
平均年齡為66.5 ± 5.08 歲，且藉由肛門指檢（digital rectal examination，DRE）
顯示並沒有罹患前列腺癌。正常受試者必須接受血清PSA 濃度的測試，以放射 免疫分析（radioimmunoassay）測量，且濃度要低於 4 ng/dl。若正常受試者的 PSA
值異常就必須從對照組中排除或者是接受更進一步的檢查包括前列腺切片檢查
以排除任何前列腺疾病的情況發生。藉由經直腸超音波導引細針切片檢查或根除
性前列腺切除手術從前列腺癌的病人取得樣本來進行病理組織檢驗。病理的分級
是根據WHO 的標準和 Gleason pattern。Gleason pattern 是 Donald F Gleason 在 1966 年時對前列腺癌之病理組織結構，研發之獨特分級系統[39,40]。因為容易
學習，個人判斷的差異也較少，因此被廣泛接受及使用。此系統將前列腺癌細胞
的生長型態及分化程度分為一到五分；腺體的排列方式最接近正常，分化最成熟
為一分，依次類推腺體的排列方式最凌亂，分化最不成熟的為五分。於切片時，
依標本中佔最大面積及次多面積的分數相加，即得到最終的Gleason score。以 Gleason score 來定義 well、moderately 和 poorly differentiated 的細胞分別為 2-4、
5-7 和 8-10。以 Tumor-Node-Metastatic（TNM）系統將臨床和病理的階段分成
破壞)和 metastatic（N+ and/or M+）(淋巴或遠處器官轉移)三組[41]。屬於 T1-T2b
的病人接受radical prostatectomy 或 radiotherapy 所以不適合做藥物的治療；而屬
於T3-T4 和 N+ and/or M+的病人則使用荷爾蒙療法治療。在荷爾蒙療法治療後的
第三個月和第六個月再對病人進行評估。評估的項目包括血清PSA 的測量、肛
門指檢和治療反應進行後症狀的評估。前列腺癌的病人在荷爾蒙治療後有反應的
定義為六個月內追蹤血清PSA 的量在最低點或小於 4 ng/dl。在開始治療時會記 錄病人的年齡，並將病人分成≧或＜70 歲兩組。本研究執行前皆告知病人並得
到病人的同意。
第二節 PCR-RFLP 分析
進行聚合酶鏈反應的總體積為50 μl，包含 10-20 ng 的 genomic DNA、正反
股引子各2 μl（2-6 pmol）、1X Taq polymerase buffer（1.5 mM MgCl2）5 μl 和
AmpliTaq DNA 聚合酶（Perkin Elmer, Foster City, USA）0.25 units，PCR 的反應
使用GeneAmp PCR System 2400 聚合酵素連鎖反應器（Perkin Elmer）。CDH-1 基
因3’-UTR C/T 引子的反應條件為：一開始升溫至 94℃五分鐘，接著進行 35 個
循環包含94℃三十秒、56℃三十秒、72℃三十秒和最後延長 72℃七分鐘。PCR
的產物為172 bp，再使用 2 units 的限制酶 Pml I 在 37℃作用三小時後，若基因
型為TT 則為 172 bp，基因型為 CC 則為 146+26 bp，基因型為 CT 則為 172+146+26
bp。位於 exon 1 第 114 個位置的 IL-2 基因 G/T 引子的反應條件為：一開始升溫
至94℃五分鐘，接著進行 35 個循環包含 94℃三十秒、57℃三十秒、72℃三十秒
和最後延長72℃七分鐘。PCR 的產物為 262 bp，再使用 2 units 的限制酶 Mwo I
在60℃作用三小時後，若基因型為 TT 則為 262 bp，基因型為 GG 則為 151+111 bp，基因型為 TG 則為 262+151+111 bp。IL-2Rβ 基因 C/T 引子的反應條件與上
述Il-2 的相同，但在 annealing 的溫度為 62℃，每個循環降 0.5℃，直到降至 52℃。
PCR 的產物為 101 bp，再使用 2 units 的限制酶 Hae III 在 37℃作用三小時後，若
基因型為TT 則為 101 bp，基因型為 CC 則為 63+38 bp，基因型為 CT 則為 101+63+38 bp。PCR 和限制酶作用後的產物進行電泳反應均使用 3%的洋菜膠
體，並使用ethidium bromide（EtBr）染色後置於 UV 燈下觀察 DNA 片段的大小。
各引子的序列、PCR 反應溫度、使用的限制酶和限制酶作用溫度均整理於 Table 1。
第三節 Kapalan-Meier survival analysis
所有的病人在一開始診斷出為前列腺癌後，我們就開始追蹤病人的存活狀
況長達五年的時間。病人存活率是根據病人存活的時間使用Kapalan-Meier
survival analysis 的 log-rank test 來計算。
第四節 統計方法
統計分析方法包括卡方檢定（χ2 test）和費雪氏檢定（Fisher’s exact test）。
以Statistical Package for the Social Science system（SPSS. Chicago, IL. USA）統計
軟體做資料的分析，統計的結果 p value 應小於 0.05 才有顯著的差異。