共取 14 位孕婦的胎盤(7 位為正常者胎盤，7 位經診斷為子癲前 症) ，生產方式皆為剖腹生產，採樣時間為生產胎盤取出後，馬上進行 重量稱重。迅速選取胎盤母體面靠近臍帶處(避開鈣化或不正常出血處) 約 1.0 cm x 1.0 cm x 1.0 cm 小塊，放入 10％中性福馬林固定。生產前 已先向孕婦解說實驗用途，並取得胎盤採樣同意書(如附錄)，採樣後胎 盤由孕婦自行帶回處理。子癲前症定義為本來正常無高血壓的婦女，在 懷孕 20 週以後，血管收縮壓超過 140 mmHg 且 舒張壓超過 90 mmHg，且尿液試紙蛋白尿超過 1+。對照組為無高血壓、糖尿病或其 他內科疾病史，尿液試紙皆無蛋白尿。
2. 本實驗的設計流程圖(如表二)。
3. 胎盤組織脫水、包埋與切片
將胎盤組織浸泡於10％中性福馬林固定至少24 小時後，再移至水槽以 流動的水沖洗約15 分鐘。接著進行組織脫水，置入組織脫水機Duplex process，依一定程序以漸增濃度之酒精70％ alcohol → 80％ alcohol
→ 80％ alcohol → 95％ alcohol → 95％ alcohol → 100％alcohol → 100％ alcohol → 二甲苯(Xylene) → Xylene 軟蠟(Paraffin) → Paraffin，此過程經14小時後，再於蠟缸中取出組織用Tissue block system 進行包埋固定，最後進行組織切片，厚度5µｍ，置放玻片於室 溫通風一天使其乾燥。
4. 組織染色(Hematoxylin ＆ Eosin stain；H&E stain)
將各別含有胎盤組織切片的玻片置於65℃烘箱30 分鐘至溶蠟，再用二 甲苯 浸泡5 分鐘共3 次使之脫蠟，接著浸泡於濃度漸減之酒精(100％
alcohol，5 分鐘 100％ alcohol，5 分鐘 95％ alcohol，5 分鐘 95％
alcohol，3 分鐘 75％ alcohol，3 分鐘)水化後，以流動的水沖洗3 分 鐘，將玻片置於Hematoxylin 染缸浸泡30~90 秒，使細胞核呈藍色，再 以流動的水沖洗10 分鐘，將玻片置於Eosin 染缸浸泡30~60 秒，使組 織纖維與細胞質呈不等程度的粉紅色。接著浸泡於濃度漸增之酒精(75
％ alcohol 95％ alcohol 95％ alcohol 100％ alcohol 100％ alcohol)
進行脫水，再經Xylene 浸潤組織後，以封片膠封片放置於室溫下通風 致乾燥，於光學顯微鏡(Olympus，BX50) 觀察並照相。
5. TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) stain
TUNEL analysis was performed using the in situ Cell Death Detection Kit TMR Red ( Roche Molecular Biochemicals; Indianaplois, IN) according to the manufacturer’s protocol
6. 免疫組織化學染色法(Immunohistochemistry stain；IHC)
將含有胎盤組織切片的玻片置於65℃烘箱30 分鐘至溶蠟，再用二甲苯 浸 泡5 分 鐘 共 3 次 使 之 脫 蠟 ， 接 著 浸 泡 於 濃 度 漸 減 之 酒 精 (100 ％ alcohol，5 分鐘 100％ alcohol，5 分鐘 95％alcohol，5 分鐘 95％
alcohol，3 分鐘 75％ alcohol，3 分鐘)水化後，以流動的水沖洗3 分 鐘。將玻片放置於含0.01M Citrate buffer (pH6.0) 經微波加熱(750W) 10 分鐘，再隔以流動的水隔水降溫10 分鐘。接著將玻片取出以1X 入一級抗體(Primary antibody)，而對照組則加入1X PBS 緩衝液作為
Negative control，皆於4 ℃下反應16 小時(overnight)，再以1X PBS 緩 衝液浸泡震搖5 分鐘，連續3 次。接著加入含有biotin-conjugated 之二 級抗體(Second antibody) ，於37℃下反應一小時，再以1X PBS 緩衝 液浸泡震搖5 分鐘，連續3 次。接著加入Avidin-Biotin Complex Kit (10µl A+ 10µl B +100µl 1X PBS, ABC kit) 於37℃下反應一小時，再以 1XPBS 緩 衝 液 浸 泡 震 搖 5 分 鐘 ， 連 續 3 次 。 再 加 入 DAB 呈 色 劑 (0.05gDAB + 100ml 1X PBS + 67µl H2O2) 反應3~5 分鐘至呈色，再以 二次水浸泡震搖5 分鐘，連續3 次。接著浸泡於Hematoxylin 中40 秒作 為背景染色，再以流動的水沖洗10 分鐘。放置於烘箱中使其乾燥，再 浸泡於二甲苯，便可使用封片膠封片放置於室溫下通風致乾燥後，於光 學顯微鏡(Olympus，BX50) 觀察並照相。