0
藥物(g/mL)
控制組
細 胞 通 透 數 ( 1 0 4 )
0
接種 5104HepG2 細胞於100 lMatrigel (Becton-Dickinson) 上隨 後一起置入insert內，於24孔盤隔夜貼附培養，加入黃連解毒湯2.7
g/mL、黃連10.1 g/mL、香蘇散20 g/mL、紫蘇葉5.7 g/mL、炙甘 草2.8g/mL及陳皮1.4g/mL，施以藥物24小時後，收取下層貼附於孔 盤的細胞，與未加藥物之控制組相比可得知細胞侵犯力及活動能力的 情形。平均值為三次獨立實驗的換算結果，error bar為standard errors (＊，p<0.05；＃，p<0.01；☆，p<0.001分別代表由student t-test所換 算出具統計意義的結果）。統計分析以控制組與不同藥物間相比。
75
藥物(g/mL)
控制組
細 胞 通 透 數 ( 1 0
4)
0
藥物(g/mL)
控制組
細 胞 通 透 數 ( 1 0
4)
0
藥物(g/mL)
控制組
細 胞 通 透 數 ( 1 0
4)
0
76
藥物種類(濃度g/mL)
控制組
細胞通透數(104 )
0
藥物種類(濃度g/mL)
控制組
細胞通透數(104 )
0
藥物種類(濃度g/mL)
控制組
細胞通透數(104 )
0
接種 5104Huh 7 細胞於100lMatrigel (Becton-Dickinson) 上一起 置入insert內，在24孔盤內隔夜貼附培養，加入黃連解毒湯、黃連、
香蘇散、紫蘇葉、石上柏及夏枯草萃取液（濃度同前述）施以藥物24 小時後，收取下層貼附於孔盤的細胞，與未加藥物相比可得知細胞侵 犯力及活動能力的情形。
77
MMP-9
GAPDH VEGF 92→
92→
46→
37→
β-catenin MMP-9
GAPDH VEGF 92→
92→
46→
37→
VEGF 92→
92→
46→
37→
β-catenin
圖六、複方及其有效單方處理HepG2之血管新生相關蛋白表 現
接種 1× 106HepG2細胞於6公分培養盤內。施以香蘇散10μg/mL、紫 蘇葉2.9μg/mL、黃連解毒湯5.4μg/mL及黃連1.4μg/mL後，於24及48小 時萃取蛋白質，經SDS-PAGE轉漬到Nitrocellulose transfer membrane 上，以MMP-9、β-catenin、VEGF及GAPDH抗體雜交，後以
goat-anti-rabbit二級抗體雜交，再以ImmobilonTMWestern
Chemiluminescent HRP Substrate (Millipore)呈色並以冷光儀顯相。
kDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 h
78
圖七、中藥單方處理HepG2之血管新生相關蛋白表現
接種 1× 106HepG2細胞於6公分培養盤內。施以石上柏、夏枯草、鴨 膽子、山慈菇、苦參及黃獨濃度均為10μg/mL後，於24及48小時萃取 蛋白質，經SDS-PAGE轉漬到Nitrocellulose transfer membrane上，以 MMP-9、β-catenin、VEGF及GAPDH抗體雜交，後以goat-anti-rabbit 二級抗體雜交，再以ImmobilonTM Western Chemiluminescent HRP Substrate (Millipore)呈色並以冷光儀顯相。
KDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 2 4 48 h
MMP-9
GAPDH VEGF 92→
92→
46→
37→
β-catenin KDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 2 4 48 h
MMP-9
GAPDH VEGF 92→
92→
46→
37→
β-catenin
KDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 h
79
圖八、複方及其有效單方處理Huh 7之血管新生相關蛋白表 現
接種 1× 106Huh 7細胞於6公分培養盤內。施以香蘇散10μg/ml、紫蘇 葉2.9μg/mL、黃連解毒湯 5.4μg/mL、黃連1.4μg/mL後，於24、48、
72小時萃取蛋白質，經SDS-PAGE轉漬到Nitrocellulose transfer membrane上，以MMP-9、β-catenin及GAPDH抗體雜交，後以 goat-anti-rabbit二級抗體雜交，再以ImmobilonTMWestern
Chemiluminescent HRP Substrate (Millipore)呈色並以冷光儀顯相。
MMP-9
GAPDH kDa 0 24 48 72 24 48 72 24 48 72 24 48 72 h
92→
92→
37→
β-catenin MMP-9
GAPDH kDa 0 24 48 72 24 48 72 24 48 72 24 48 72 h
92→
92→
37→
β-catenin
KDa 0 24 48 72 24 48 72 24 48 72 24 48 72 h
80
圖九、中藥單方處理 Huh 7 之血管新生相關蛋白表現
接種 1× 106Huh 7細胞於6公分培養盤內。施以石上柏、夏枯草、鴨 膽子、山慈菇、苦參及黃獨以10μg/mL後，於24及48小時萃取蛋白質，
經SDS-PAGE轉漬到Nitrocellulose transfer membrane上，以MMP-9、
β-catenin及GAPDH抗體雜交，後以goat-anti-rabbit二級抗體雜交，再 以ImmobilonTM Western Chemiluminescent HRP Substrate (Millipore)呈 色並以冷光儀顯相。
MMP-9
GAPDH KDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 h
92→
92→
37→
β-catenin MMP-9
GAPDH KDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 h
92→
92→
37→
β-catenin
KDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 h
81
圖十、MMP-9 PCR偵測中藥複方對於HepG2之RNA表現
接種 2 × 106HepG2細胞於10公分培養盤內。施以黃連解毒湯5.4μg/mL、香蘇散10μg/mL後，培養24、48、72小時後，萃取RNA，
利用MMP-9、GAPDH primers經PCR放大基因表現量，以6%
polyacrylamide電泳分析PCR產物。
0 24 48 72 24 48 72 h + - + - + - + - + - + - + - (RT) 537bp→
256bp→
MMP-9
GAPDH
82
kDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 h
MMP-9
MMP-2 92→
72→
kDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 h kDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 h
MMP-9
MMP-2 92→
72→
圖十一、複方及其有效單方對於 HepG2 之 MMP 活性測試
接種 1× 106HepG2 細胞於 6 公分培養盤內。施以香蘇散 10 μg/ml、 紫蘇葉 2.9μg/mL、黃連解毒湯 5.4μg/mL及黃連 1.4μg/mL，經過 24、48 小時後，收取細胞培養液 經 SDS-PAGE 後以 2.5%Triton X-100 清 洗膠體以除去 SDS ，加入反應緩衝液於 37℃作用 18 小時，再以 Coomassie Brilliant Blue R250，染色並退染，最後利用 Fuji Image Reader LAS-3000 拍照顯影。
KDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 h
83