• 沒有找到結果。

Concentration of herbal extract (g/mL)

N/A
N/A
Protected

Academic year: 2021

Share "Concentration of herbal extract (g/mL)"

Copied!
35
0
0

加載中.... (立即查看全文)

全文

(1)

49

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c e ll v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c e ll v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

圖一、 (A)小柴胡湯(水萃取)處理 HepG2 細胞株之生長曲線

於96孔盤上每孔接種1104HepG2細胞,經隔夜培養貼附之後,加入 小柴胡湯(水萃取)濃度分別為1、2、10、20及50µg/mL,時間分別 為24、48及72小時,當實驗到達各待測時間點時,於每孔加入5l MTT,並於37℃下反應3小時,次將孔盤內培養液吸出,再加入100l DMSO以完全溶解紫紅色結晶物,利用OD570測量吸光值,並以未加 入細胞只加DMSO的孔當作空白背景值,以藥物處理之細胞存活率作 為vehicle control(100%),於相同施藥時間,不同濃度間之存活率換 算為百分比,平均值為三次獨立實驗的換算結果,error bar為standard errors (*,p<0.05;#,p<0.01;☆,p<0.001分別代表由student t-test 所換算出具統計意義的結果)。

(2)

50

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c e ll v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100 120

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c e ll v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100 120

圖一、(B)小柴胡湯(70%酒精萃取)處理 HepG2 細胞株 之生長曲線

實驗方法同前述。

(3)

51

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c e ll v ia b il it y (% )

0 20 40 60 80 100 120

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c e ll v ia b il it y (% )

0 20 40 60 80 100 120

圖一、(C)柴胡加龍骨牡蠣湯處理 HepG2 細胞株之生長曲

實驗方法同前述。

(4)

52

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100 120

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100 120

圖一、(D)核桃承氣湯處理 HepG2 細胞株之生長曲線

實驗方法同前述。

(5)

53

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

圖一、(E)半夏厚朴湯處理 HepG2 細胞株之生長曲線

實驗方法同前述。

(6)

54

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

圖一、(F)香蘇散處理 HepG2 細胞株之生長曲線

實驗方法同前述。

(7)

55

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 0.5 1.1 5.4 10.1 25.2

R e la ti v e c e ll v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

100

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 0.5 1.1 5.4 10.1 25.2

R e la ti v e c e ll v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

100

圖一、(G)黃連解毒湯處理 HepG2 細胞株之生長曲線

唯濃度分別為 0.5、1.1、5.4、10.1 及 25.2µg/mL,實驗方法同前述。

(8)

56

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 0.3 0.6 2.9 5.7 14.3

R e la ti v e c e ll v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 0.3 0.6 2.9 5.7 14.3

R e la ti v e c e ll v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

圖一、(H)紫蘇葉處理 HepG2 細胞株之生長曲線

唯濃度分別為 0.3、0.6、2.9、5.7 及 14.3µg/mL,實驗方法同前述。

(9)

57

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 0.1 0.3 1.4 2.7 6.8

R e la ti v e c e ll v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 0.1 0.3 1.4 2.7 6.8

R e la ti v e c e ll v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

圖一、(I)黃連處理 HepG2 細胞株之生長曲線

唯濃度分別為 0.1、0.3、1.4、2.7 及 6.8µg/mL,實驗方法同前述。

(10)

58

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

圖一、(J)石上柏處理 HepG2 細胞株之生長曲線

實驗方法同前述。

(11)

59

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

圖一、(K)夏枯草處理 HepG2 細胞株之生長曲線

實驗方法同前述。

(12)

60

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

圖一、(L)鴨膽子處理 HepG2 細胞株之生長曲線

實驗方法同前述。

(13)

61

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

圖一、(M)山慈菇處理 HepG2 細胞株之生長曲線

實驗方法同前述。

(14)

62

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

圖一、(N)苦參處理 HepG2 細胞株之生長曲線

實驗方法同前述。

(15)

63

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

圖一、(O)黃獨處理 HepG2 細胞株之生長曲線

實驗方法同前述。

(16)

64

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

圖二、(A)香蘇散處理 Huh 7 細胞株之生長曲線

實驗方法同前述。

(17)

65

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 0.5 1.1 5.4 10.1 25.2

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 0.5 1.1 5.4 10.1 25.2

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

圖二、(B)黃連解毒湯處理 Huh 7 細胞株之生長曲線

唯濃度分別為 0.5、1.1、5.4、10.1 及 25.2µg/mL,實驗方法同前述。

(18)

66

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 0.3 0.6 2.9 5.7 14.3

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 0.3 0.6 2.9 5.7 14.3

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

圖二、(C)紫蘇葉處理 Huh 7 細胞株之生長曲線

唯濃度分別為 0.3、0.6、2.9、5.7 及 14.3µg/mL,實驗方法同前述。

(19)

67

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 0.1 0.3 1.4 2.7 6.8

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 0.1 0.3 1.4 2.7 6.8

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

圖二、(D)黃連處理 Huh 7 細胞株之生長曲線

唯濃度分別為 0.1、0.3、1.4、2.7 及 6.8µg/mL,實驗方法同前述。

(20)

68

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

圖二、(E)石上柏處理 Huh 7 細胞株之生長曲線

實驗方法同前述。

(21)

69

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80 100

圖二、(F)夏枯草處理 Huh 7 細胞株之生長曲線

實驗方法同前述。

(22)

70

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c el l v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

圖二、(G)鴨膽子處理 Huh 7 細胞株之生長曲線

實驗方法同前述。

(23)

71

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c e ll v ia b il it y (% )

0 20 40 60 80 100

Concentration of herbal extract (g/mL)

0 1 2 10 20 50

R e la ti v e c e ll v ia b il it y (% )

0 20 40 60 80 100

圖二、(H)山慈菇處理 Huh 7 細胞株之生長曲線

實驗方法同前述。

(24)

72

Concentration of herbal extract ( g/mL)

0 1 2 10 20 50

R el a ti v e ce ll v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

Concentration of herbal extract ( g/mL)

0 1 2 10 20 50

R el a ti v e ce ll v ia b il it y (%

0 20 40 60 80

圖二、(I)苦參處理 Huh 7 細胞株之生長曲線

實驗方法同前述。

(25)

73

Concentration of herbal extract ( g/mL)

0 1 2 10 20 50

R el a ti v e ce ll v ia b il it y (% )

0 20 40 60 80 100

Concentration of herbal extract ( g/mL)

0 1 2 10 20 50

R el a ti v e ce ll v ia b il it y (% )

0 20 40 60 80 100

圖二、(J)黃獨處理 Huh 7 細胞株之生長曲線

實驗方法同前述。

(26)

74

藥物(g/mL)

控制

黃連解毒湯(10.1)

黃連(2.7)

香蘇散(20)

紫蘇葉(5.7)

炙甘草(2.8)

陳皮(1.4)

細 胞 通 透 數 ( 1 0 4 )

0 2 4 6

藥物(g/mL)

控制

黃連解毒湯(10.1)

黃連(2.7)

香蘇散(20)

紫蘇葉(5.7)

炙甘草(2.8)

陳皮(1.4)

細 胞 通 透 數 ( 1 0 4 )

0 2 4 6

圖三、HepG2 細胞侵犯能力實驗結果

接種 5104HepG2 細胞於100 lMatrigel (Becton-Dickinson) 上隨 後一起置入insert內,於24孔盤隔夜貼附培養,加入黃連解毒湯2.7

g/mL、黃連10.1 g/mL、香蘇散20 g/mL、紫蘇葉5.7 g/mL、炙甘 草2.8g/mL及陳皮1.4g/mL,施以藥物24小時後,收取下層貼附於孔 盤的細胞,與未加藥物之控制組相比可得知細胞侵犯力及活動能力的 情形。平均值為三次獨立實驗的換算結果,error bar為standard errors (*,p<0.05;#,p<0.01;☆,p<0.001分別代表由student t-test所換 算出具統計意義的結果)。統計分析以控制組與不同藥物間相比。

(27)

75

藥物(g/mL)

控制

黃連(2.7)

紫蘇葉(5.7)

石上柏(20)

草(20)

鴨膽子(20)

苦參(20)

黃獨(20)

山慈菇(20)

細 胞 通 透 數 ( 1 0

4

)

0 2 4 6 8

藥物(g/mL)

控制

黃連(2.7)

紫蘇葉(5.7)

石上柏(20)

草(20)

鴨膽子(20)

苦參(20)

黃獨(20)

山慈菇(20)

細 胞 通 透 數 ( 1 0

4

)

0 2 4 6 8

藥物(g/mL)

控制

黃連(2.7)

紫蘇葉(5.7)

石上柏(20)

草(20)

鴨膽子(20)

苦參(20)

黃獨(20)

山慈菇(20)

細 胞 通 透 數 ( 1 0

4

)

0 2 4 6 8

圖四、中藥單方對HepG2 細胞侵犯能力實驗結果

實驗方法、統計如前述,唯石上柏、夏枯草、鴨膽子、苦參、黃獨和 山慈菇萃取液(濃度均為20g/mL)。

(28)

76

藥物種類(濃度g/mL)

控制

黃連解毒湯(10.1)

黃連(2.7)

香蘇散(20)

紫蘇葉(5.7)

石上柏(20)

草(20)

細 胞 通 透 數 ( 1 0 4 )

0 2 4 6 8 10

藥物種類(濃度g/mL)

控制

黃連解毒湯(10.1)

黃連(2.7)

香蘇散(20)

紫蘇葉(5.7)

石上柏(20)

草(20)

細 胞 通 透 數 ( 1 0 4 )

0 2 4 6 8 10

藥物種類(濃度g/mL)

控制

黃連解毒湯(10.1)

黃連(2.7)

香蘇散(20)

紫蘇葉(5.7)

石上柏(20)

草(20)

細 胞 通 透 數 ( 1 0 4 )

0 2 4 6 8 10

圖五、Huh 7 細胞侵犯能力實驗結果

接種 5104Huh 7 細胞於100lMatrigel (Becton-Dickinson) 上一起 置入insert內,在24孔盤內隔夜貼附培養,加入黃連解毒湯、黃連、

香蘇散、紫蘇葉、石上柏及夏枯草萃取液(濃度同前述)施以藥物24 小時後,收取下層貼附於孔盤的細胞,與未加藥物相比可得知細胞侵 犯力及活動能力的情形。

(29)

77

MMP-9

GAPDH VEGF 92→

92→

46→

37→

β-catenin MMP-9

GAPDH VEGF 92→

92→

46→

37→

VEGF 92→

92→

46→

37→

β-catenin

圖六、複方及其有效單方處理HepG2之血管新生相關蛋白表

接種 1× 106HepG2細胞於6公分培養盤內。施以香蘇散10μg/mL、紫 蘇葉2.9μg/mL、黃連解毒湯5.4μg/mL及黃連1.4μg/mL後,於24及48小 時萃取蛋白質,經SDS-PAGE轉漬到Nitrocellulose transfer membrane 上,以MMP-9、β-catenin、VEGF及GAPDH抗體雜交,後以

goat-anti-rabbit二級抗體雜交,再以ImmobilonTMWestern

Chemiluminescent HRP Substrate (Millipore)呈色並以冷光儀顯相。

kDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 h

(30)

78

圖七、中藥單方處理HepG2之血管新生相關蛋白表現

接種 1× 106HepG2細胞於6公分培養盤內。施以石上柏、夏枯草、鴨 膽子、山慈菇、苦參及黃獨濃度均為10μg/mL後,於24及48小時萃取 蛋白質,經SDS-PAGE轉漬到Nitrocellulose transfer membrane上,以 MMP-9、β-catenin、VEGF及GAPDH抗體雜交,後以goat-anti-rabbit 二級抗體雜交,再以ImmobilonTM Western Chemiluminescent HRP Substrate (Millipore)呈色並以冷光儀顯相。

KDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 2 4 48 h

MMP-9

GAPDH VEGF 92→

92→

46→

37→

β-catenin KDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 2 4 48 h

MMP-9

GAPDH VEGF 92→

92→

46→

37→

β-catenin

KDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 h

(31)

79

圖八、複方及其有效單方處理Huh 7之血管新生相關蛋白表

接種 1× 106Huh 7細胞於6公分培養盤內。施以香蘇散10μg/ml、紫蘇 葉2.9μg/mL、黃連解毒湯 5.4μg/mL、黃連1.4μg/mL後,於24、48、

72小時萃取蛋白質,經SDS-PAGE轉漬到Nitrocellulose transfer membrane上,以MMP-9、β-catenin及GAPDH抗體雜交,後以 goat-anti-rabbit二級抗體雜交,再以ImmobilonTMWestern

Chemiluminescent HRP Substrate (Millipore)呈色並以冷光儀顯相。

MMP-9

GAPDH kDa 0 24 48 72 24 48 72 24 48 72 24 48 72 h

92→

92→

37→

β-catenin MMP-9

GAPDH kDa 0 24 48 72 24 48 72 24 48 72 24 48 72 h

92→

92→

37→

β-catenin

KDa 0 24 48 72 24 48 72 24 48 72 24 48 72 h

(32)

80

圖九、中藥單方處理 Huh 7 之血管新生相關蛋白表現

接種 1× 106Huh 7細胞於6公分培養盤內。施以石上柏、夏枯草、鴨 膽子、山慈菇、苦參及黃獨以10μg/mL後,於24及48小時萃取蛋白質,

經SDS-PAGE轉漬到Nitrocellulose transfer membrane上,以MMP-9、

β-catenin及GAPDH抗體雜交,後以goat-anti-rabbit二級抗體雜交,再 以ImmobilonTM Western Chemiluminescent HRP Substrate (Millipore)呈 色並以冷光儀顯相。

MMP-9

GAPDH KDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 h

92→

92→

37→

β-catenin MMP-9

GAPDH KDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 h

92→

92→

37→

β-catenin

KDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 h

(33)

81

圖十、MMP-9 PCR偵測中藥複方對於HepG2之RNA表現

接種 2 × 106HepG2細胞於10公分培養盤內。施以黃連解毒湯

5.4μg/mL、香蘇散10μg/mL後,培養24、48、72小時後,萃取RNA,

利用MMP-9、GAPDH primers經PCR放大基因表現量,以6%

polyacrylamide電泳分析PCR產物。

0 24 48 72 24 48 72 h + - + - + - + - + - + - + - (RT) 537bp→

256bp→

MMP-9

GAPDH

(34)

82

kDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 h

MMP-9

MMP-2 92→

72→

kDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 h kDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 h

MMP-9

MMP-2 92→

72→

圖十一、複方及其有效單方對於 HepG2 之 MMP 活性測試

接種 1× 106HepG2 細胞於 6 公分培養盤內。施以香蘇散 10 μg/ml、 紫蘇葉 2.9μg/mL、黃連解毒湯 5.4μg/mL及黃連 1.4μg/mL,經過 24、

48 小時後,收取細胞培養液 經 SDS-PAGE 後以 2.5%Triton X-100 清 洗膠體以除去 SDS ,加入反應緩衝液於 37℃作用 18 小時,再以 Coomassie Brilliant Blue R250,染色並退染,最後利用 Fuji Image Reader LAS-3000 拍照顯影。

KDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 h

(35)

83

kDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 h 92→

72→

MMP-9

MMP-2 kDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 h

kDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 h 92→

72→

MMP-9

MMP-2

圖十二、鴨膽子與苦參對於 HepG2 之 MMP 活性測試

實驗方法同前述,使用藥物為鴨膽子 10 和 20 μg/ml及苦參 10 和 20μg/mL。

KDa 0 24 48 24 48 24 48 24 48 h

參考文獻

相關文件

5 Create features of V1,V2 and testing data sets for validation set blending, including the predictions of models in step 2 and some optional extra features.. 6 Treat V1 as the

在上 一節中給出了有單位元的交換環 R 上的模的定義以及它的一些性質。 當環 R 為 體時, 模就是向量空間, 至於向量空間中的部分基本概念與定理, 有些可以移植到模上來。 例如 子

9、 空壓機皮帶張力於第一次開始運轉 1000 小時後予以檢查,第二次以後每隔 3000 小時實施,每 3000 小時清 潔自動排水閥,每

沒問題,那麼我先 到燒烤場準備,你 們就休息一下吧!..

上傳後的資料。倘若 於上傳初選檔案截止 日(2/24)前,仍有必 要更換評選檔案,請

在上 一節中給出了有單位元的交換環 R 上的模的定義以及它的一些性質。 當環 R 為 體時, 模就是向量空間, 至於向量空間中的部分基本概念與定理, 有些可以移植到模上來。 例如 子

碘液測試 澱粉 碘液保持褐色 碘液轉為深藍色 尿蛋白試紙 蛋白質 黃色

一、對抗生素Meropenem Trihydrate 具抗藥性(R 菌)和不具抗藥性(S 菌)的 Acinetobacter baumannii 菌在蛋白質電泳實驗中,比較蛋白質表現的差異。(文中所用代號: 「R