1. 綠原酸在血漿檢品中之 HPLC 定量方法
本研究的定量分析法，是將血漿檢品經添加內標準品 m-hydroxybenzoic acid 及以氰甲烷去蛋白並離心後，取上清液以氮氣噴吹使氰甲烷逸離後，
以移動相溶解，再注入 HPLC 分析。經過多次試驗與修正後，找出最適當 定量分析條件。Figure 1 顯示空白血漿、標準濃度血漿及家兔靜脈注射後血 漿檢品之 HPLC 層析圖。
層析圖中綠原酸波峰與內標準品 m-hydroxybenzoic acid 波峰獨立清晰 並無干擾，可見本法分離效果良好，具專一性。利用本法所製備標準液之 檢量線，其決定係數(R2)分別為 0.9991 及 0.9996，顯示在此範圍之內有良 好的線性關係(Figure 2~3)。
本法之偵測極限( Limit of Detection )，經逐步稀釋綠原酸標準溶液後分 析之，測得偵測極限為 12.5 ng/ml。回收率(Recovery)試驗結果平均可達 86.2
﹪(Table 7)。以製備血漿檢品檢量線之標準液，取六次標準液獨立檢品測得 之偵測極量( Limit of Quantitation )，其最低濃度的變異係數( C.V.)皆均低於 10 % (Table 10 )。顯示分析準確度良好。於同日內(Intraday)及間日內(Interday) 的精確度評估，其變異係數( C.V.%)均低於 10﹪(Table 8~9)。
綠原酸標準血漿檢品，以三種濃度( 1 , 10 , 100
µ
g/ml )於室溫及-30℃冷綜合前述幾項分析確效試驗可知，本研究對於綠原酸高效液相層析 法，為一靈敏、簡便、再現性良好及精確之定量分析法，可以供綠原酸藥 物動力學相關研究及臨床藥物監測之分析應用。
2. 綠原酸在家兔體內之藥物動力學
為探討家兔體內綠原酸之動力學及體內過程，首先以四種不同劑量(2、
10、20 及 50 mg/kg)在家兔進行靜脈給藥研究。經由耳靜脈注射綠原酸注射 液後，經分析所得血漿中綠原酸濃度經時變化數據，如 Table 13~16 與 Figure 6 所示。而六隻家兔之平均血漿中綠原酸濃度變化，分別示於 Table 17 及 Figure 7 中。當家兔給予較低劑量(2 mg/kg)，在 2 小時(120 min)後偵測不到 血中藥物濃度，在 10 mg/kg 劑量時，在 3 小時後偵測不到血中藥物濃度。
由 Figure 7 中曲線的斜率可以發現， 綠原酸在家兔靜脈注射後血中濃度之 消逝極為迅速。
將分析所得之血漿中綠原酸濃度經時變化之數據，以 WinNonlin Program 進行曲線配適，發現二室體模式下，可以得到良好配適。在配適二 室模式(附錄二)後，所得之藥物動力學數據列於 Table 22 至 25。
綠原酸的四種劑量 2、10、20 及 50 mg/kg 於靜脈注射給予六隻家兔後，
其血中濃度之變化可以用下列四個方程式表示：
2 mg/kg：Cp = 8.753e-0.162t +0.673e-0.024t 10 mg/kg：Cp = 30.478e-0.092t +1.339e-0.069t 20 mg/kg：Cp = 63.628e-0.091t +2.839e-0.022t 50 mg/kg：Cp = 116.306e-0.074t +6.252e-0.019t
當家兔經靜脈注射 2 、10、 20 及 50 mg/kg 四種劑量綠原酸後，平均 排除半衰期(t1/2β)依次為 29
±
3.2、31±
4.4、30±
2.8 及 37±
1.4 min。平均穩定 狀態分佈體積 (VdSS ) 分別為 1.096±
0.035， 1.048±
0.147， 1.000±
0.08 及 1.349±
0.079 L 。 平 均 曲 線 下 面 積 (AUC0-∞ ) 分 別 為 82.386±
6.071 、 390.512±
60.377、832.643±
85.573 及 1907.49±
118.694µ
g min/ml。據何心等人實驗(39)，老鼠靜脈注射 1.2 mg/kg 綠原酸後，半衰期約為 12 min, 分佈體積為 0.08 L，平均曲線下面積(AUC0-∞)為 2.32
µ
g.hr/ml，與本 實驗結果有差異，應與給藥劑量及實驗動物不同有關。將檢品濃度數據以 Lagran-P 程式以非室體模式分析，所得相關藥物動 力學參數，分別列於 Table 18~21 中。綠原酸四種劑量之平均半衰期(T1/2) 為 32.623
±
1.038、33.275±
1.762、34.962±
0.955 及 41.985±
0.862 min.。平均 穩定狀態分佈體積(VDSS )為 0.794±
0.107、0.611±
0.107，0.54±
0.056 及 0.697±
0.037 L。平均曲線下面積(AUCp)為 60.318±
5.74、312.061±
48.96、691.557
±
77.928 及 1610.9±
110.9µ
g.min/ml。據 Yow-Shieng Uang 等人於 1997 年的實驗(46)，家兔靜脈注射 Caffeic acid 10 mg/kg 後，半衰期約為 14min, 分佈體積為 0.15 l/kg，平均曲線下面 積(AUC0-∞ )為 531 mg.min /ml 與綠原酸比較，半衰期與分佈體積較小、
血中濃度較高
家兔經靜脈注射 2 、10、 20 及 50 mg/kg 四種劑量綠原酸後血中濃度 值，經 Lagran-P 程式處理後之藥物動力學參數，以平均曲線下面積(AUCp) 與給藥劑量(Dose)做線性迴歸，結果如 Figure 10 所示，決定係數(R2)為 0.9813，顯示綠原酸在家兔經靜脈注射劑量 2~50 mg/kg 之間其平均曲線下
了清除率(Cl) 無明顯差異之外，其餘的藥物動力學參數均在統計學上有明 顯差異。
3. 綠原酸 在家兔體內的生體可用率(F)
六隻家兔分別以靜脈注射(I.V.) 50 mg/kg、肌肉注射(I.M.) 50 mg/kg 及 口服投與(P.O.)250 mg/kg 之綠原酸後，經分析而得之個別血中濃度值及曲 線，分別示於 Table 26~28 及 Figure 8 中。六隻家兔之血漿中綠原酸濃度平 均值及經時變化曲線則分別示於 Table 29 及 Figure 9。家兔經肌肉注射(IM) 劑量 50 mg/kg 之綠原酸後，約在 35 min. 即可達平均最高血中濃度(Cmax) 10.25
±
1.37µ
g/ml。絕對生體可用為 0.477±
0.093。綠原酸口服的絕對生體可用率約為 0.127±0.023 ; 與劉漢清等人(38)研 究報告之綠原酸的絕對生體可用率 0.126 比較，與本實驗結果相近。又據 Yow-Shieng Uang 等人於 1995 年的實驗(47)，口服咖啡酸 10mg/kg 時，Tmax 約在 20-30 min 之間， 本實驗 Tmax 則約為 60 min。綠原酸的口服絕對生 體可用率很低，是否因綠原酸化性不安定，易受體內環境破壞，以口服方 式給藥，在製劑上有待進一步的探討研究。
前後兩次對家兔進行靜脈注射後之血中濃度值，經 Jana 及 WinNonlin Program 處理後之藥動學參數以統計 t-test 做比較(Table 37)，結果在統計學 上均無差異。家兔經靜脈注射(I.V.)、肌肉注射(I.M.)及口服給藥(P.O.)後血中 濃度值經 Jana 及 WinNonlin Program 處理後之藥動學參數以 One way ANOVA 比較(Table 38)，發現三種投藥方式之間有差異性存在。