減緩許多。而從微觀病理切片來看，與只有 TNBS 誘發的比較，發現有 vanillin 治療的明顯降低黏膜組織受損情形，隨著vanillin 濃度增加病兆指數的發展也隨
並有顯著的差異(P value＜0.05；P value＜0.01)（圖4 C）。
Vanillin 治療發炎性大腸症的結果
在 vanillin 治療組試驗中從肉眼觀察，將 TNBS 誘發發炎性大腸症未受
Vanillin 對 Cytokine 基因表現的影響
由RT-PCR 分析顯示在未受 vanillin 治療只有 TNBS 誘發發炎性大腸症組別 中，proinflammatory 和 inflammatory cytokine mRNA 的量顯著地增加，包括：
IFN-γ、TNF-α、IL-6 和 IL-1β。而 vanillin 治療組別中，這些 cytokine 的表現 明顯受到抑制，幾乎降低到接近陰性控制組 cytokine 的表現，但是 IL-4 則是出 現相反的結果。所以由以上結果表示，vanillin 治療在 TNBS 誘發發炎性大腸症 的老鼠中，可以抑制proinflammatory 和 inflammatory cytokine 基因的表現。（圖 7）
Vanillin 對 NF-κB 活性的影響
利用直腸組織收集核內萃取蛋白質，進行EMSA 偵測 NF-κB 活性。結果顯 示，未受vanillin 治療的直腸核內萃取蛋白質，NF-κB 活性明顯地增加；而 vanillin 治療的直腸核內萃取蛋白質，則是NF-κB 活性明顯地降低 （圖 8 A）。再藉由
西方轉漬法分析p65、IKKα 和 IKKβ 蛋白質活性的改變。結果顯示，未受 vanillin 治療的直腸無論是核內或是細胞質的 p65，其活性都有明顯地增加。而 IKKα、
IKKβ 及 IKKα β 磷酸化的活性，也是明顯地增加。在 vanillin 治療的直腸 p65、
IKKα 和 IKKβ 蛋白質活性，則是明顯地降低（圖 8 B）。因此，本研究暗示vanillin 治療在 TNBS 誘發發炎性大腸症的老鼠中，可由抑制 NF-κB 活性，進而抑制這 條訊息傳導路徑，達到降低發炎性大腸症的發展。
基因轉殖鼠的構築及子代的確認
結果顯示出生的 25 隻小鼠中，利用 PCR 檢測，只有 6 隻為基因轉殖鼠，轉 殖機率為24%（圖 9 A）。進一步利用南方雜合法分析轉殖基因在小鼠染色體中 的數量，發現其中有三隻（標號2、19、21）轉殖基因的數量為 1~3，其餘的轉 殖基因數量為3~15（圖 9 B）。因為轉殖基因的數量為 1~3 的小鼠較適合進行交 配繁殖第一代（F1），因此我們挑選適當的基因轉殖鼠親代，與野生株同品系老
鼠進行交配繁殖。從 PCR 陽性率來看，無論是一公多母或是一公一母的交配方
式，都有30 至 50％左右的成功帶有 NF-kB 報導質體的子代產生（圖 10）。
全身性、即時性、非侵入性活體影像的分析
由結果顯示，可明顯觀察到基因轉殖鼠體內放射出來的luminescence 量，15 分鐘後達到最高峰，之後隨著時間增加而衰退。也可觀察到在一些部位有明顯較 強的luminescenc 表現而在各種器官放射出來的 luminescence 表現情形，也可藉
由這極敏感攝相機進行分析，所以這樣的技術平台確實是可行的（圖11）。
利用活體影像分析vanillin 治療發炎性大腸症的效果
在TNBS 誘發發炎性大腸症未受 vanillin 治療的老鼠活體影像中，可觀察到 有放射出很強的 luminescence。而在 TNBS 誘發發炎性大腸症 vanillin 治療的老 鼠，放射出來的 luminescence 則是比未治療的降低許多（圖 12）。老鼠直腸影
像分析也是得到相同的結果（圖13 A 和 B）。而在直腸組織均質液 luciferase 活 性，未受vanillin 治療的 luciferase 活性表現增加，但是受 vanillin 治療的 luciferase 活性明顯地被抑制下來（圖13 C）。所以由結果得知，vanillin 治療可以有效抑 制luciferase 活性，也就是能抑制 NF-κB 活性，進而達到降低 TNBS 所誘發發炎 性大腸症疾病的發展。(P value＜0.05；P value＜0.01)