討論

蛋黃的成分中，水分占 48％、脂質占 34％、蛋白質則為 17％

(Li-Chan et al., 2007)。由於蛋黃中的大部分脂質會與特定蛋白質聚集 形成脂蛋白顆粒（lipoprotein granules：HDL & LDL）並散佈於親水 性的漿液（plasma）中，故蛋黃的組成也常被區分為疏水性的顆粒部 分（granule fraction）及親水性的漿液部分（plasma fraction）

(Kovacs-Nolan et al., 2005)。在親水性的漿液中，蛋黃球蛋白（livetin）

是最主要的蛋白質種類，約占蛋黃乾重的 10％(Anton, 2007)；蛋黃球 蛋白包含 70 kDa 的 serum albumin（-livetin）、45 kDa 的

-2-glycoprotein（-livetin）

由於蛋黃的組成中，由脂蛋白顆粒等所組成的固形物（solid）占 將近 50％ (Anton, 2007)，又含量豐富的脂質常會對後續的純化工作 造成干擾(Hansen et al., 1998)，是以現有的蛋黃 IgY 萃取方法都以去 脂步驟開始(Schade, R. et al., 2005)。目前最常見的去脂步驟包括 PEG 沉澱法(Polson et al., 1980; Polson et al., 1985; Prabhu et al., 2010)和水 稀法(Akita et al., 1992, 1993; Ruan et al., 2005)兩種；前人的研究結果 顯示，若以粗萃液的 IgY 產率（yield）與純度（purity）為比較標準，

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則水稀法較 PEG 沉澱法為優(Akita et al., 1993; Verdoliva et al., 2000;

Araujo et al., 2010)。

Prabhu et al., 2010)。這些限制不但延長完成純化工作所需要的時間、

增加純化工作的複雜度、也會降低一般實驗室及產業界對使用 IgY 的

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Ko and Ahn (2007)的研究結果也發現，萃取試劑的 pH 值從 6 下降為 5 時，粗萃液的 IgY 含量雖無明顯變化，但其脂質含量卻顯著下降 12.5 倍。上述的資料說明，當以水稀法萃取蛋黃 IgY 時，其去脂效應屬於 pH-dependent 的作用，並且僅有狹窄的適用 pH 範圍。然而前人的研 究也發現，不同顆雞蛋之間，其蛋黃的 pH 值並不盡相同，水稀液的

相較於酸水所需要的 5.5 小時以上(Akita and Nakai, 1992)，醋酸鈉溶 液明顯具有提升萃取時效的優勢，我們推測此一優勢應該與醋酸鈉溶

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（carotenoids）存在之故(Laca et al., 2010)，當這些脂溶性物質無法與 特定種類的蛋白質形成脂蛋白顆粒而被沉澱時，蛋黃粗萃液即變得黃 濁。因此，無論是選擇純水或醋酸鈉溶液作為蛋黃 IgY 的萃取試劑，

其去脂作用均為 pH-dependent 的反應，並且也都僅有狹窄的適用 pH 範圍。根據前述，我們亦可延伸推論，以 pH 為 4.2 的醋酸鈉溶液所

- 50 - 度則約為 30.6  6.0％，此一產率（yield）與純度（purity）的數據與 前人以水稀法萃取蛋黃 IgY 的結果相似(Akita et al., 1993; Verdoliva

- 51 - 膠（gum pectin）、卡拉膠（-carrageenan）和氯化鈣（CaCl2）的溶液 進行蛋黃的去脂作用，再搭配兩次不同飽和度的硫酸銨沉澱步驟，可 於 5h 內從 1 顆蛋黃中分離得到 60 mg 純度達 80％的 IgY 樣品，且試 劑花費僅需約 5 美元；而本研究所發展的 IgY 萃取方法則是先以醋酸 鈉溶液進行蛋黃的去脂作用，再藉硫酸銨鹽析沉澱 IgY 樣品，此一兩

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步驟的方法可於 2h 內從 1 顆蛋黃中分離得到近 90 mg 純度超過 80％

的 IgY 樣品（表五；Current protocol, 40％ AmS saturation），並且試 劑花費估計為 1.5 美元。由於本研究所開發的方法在簡易性、方便性、

與經濟性等方面均較現有的各種方法為佳，亦無使用任何有機溶劑，

能減少環境的負擔。本方法除了可供一般實驗室例行萃取 IgY 採用，

也易被放大規模以達成產業界大量生產之目的。

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表五、不同 IgY 萃取方法的比較。

* Akita and Nakai (1992)的操作時間及 IgY 樣品產量與純度皆擷取其 萃取步驟至硫酸銨鹽析沉澱。

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