孢子囊體單生,平臥,全長約 5-22mm,孢子體形態有不對稱、節間距離不一致的情形(圖二十二:8,9);
有規則或無規則之輪生分枝(node),通常為 3-21 輪。每輪分枝(branch per whole)1-5 條,長約 67-170µm。
柄基部呈棒狀(clavate)(圖二十二:2),寬為 15-62µm,末端呈棍棒狀(clavate)(圖二十二:3),第一節 長約 60-250µm;孢子囊堆(sorus)為白色球狀,直徑 30-130。聚集形式為 violaceum type;(圖二十二:
5) 孢子無色,長橢圓形,長 / 寬 5.7-7.3/2.9-4µm,平均 6.5/3.5µm,比率為 1.9(圖二十二:1);具有非結 合型的極粒(unconsolidated polar granules)。描述樣本編號: Pin102PH。
Polysphondylium sp. H (Fig. 22)
Sorocarps soliary, prostrate5-22mm in length with regular or irregular whorls of branches(node). Whorls varying from 3-21 (Fig. 22:8, 9),asymmertry, internode distance irregular(Fig. 22:7-9), consisting of 1-5 branches of 67-170µm. Base clavate(Fig. 22:2), 15-62µm in width(average 31.8µm).Tip clavate (Fig. 22:3).
Terminal segment 60-250µm in length. Sori white, round, varying from 33.3-133.2µm in diam. Acumination of the “violaceum” type (Fig. 22:5). Spores colorless, elliptic(Fig. 22:1), 5.7-7.3×2.9-4µm, 1.9 in ratio, with unconsolidated polar granules. Strain described: Pin102PH.
採集地點:屏東縣內埔鄉 採集時間:93 年 11 月 採集編號:
Pin102PH
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圖二十二、輪生細胞黏菌 H 種形態特徵
1:孢子(bar=10µm) 2:孢子囊體之基部(bar=25µm) 3:孢子囊體之末端(bar=10µm) 4:孢子囊體之分枝(bar=25µm) 5:聚集(bar=500µm) 6-7:偽原生質體(bar=500µmm)
8-9:成熟之孢子囊體(bar=500µmm)
Fig. 22. The morphological characters of Polysphondylium sp. H
1:Spores(bar=10µm) 2:Base(bar=25µm) 3:Tip (bar=10µm) 4:Branches(bar=25µm)
5:Acumination(bar=500µm) 6-7:Pseudoplasmodium(bar=500µmm) 8-9:Sorocarps(bar=500µmm)
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表十九、輪生細胞黏菌之形態特徵測量資料。(每一種 Node ~ Base length 的儲存格中,第一行為範圍,第二行為平均值。)
Table 19. Morphological data of Polysphondylium in this study (From node to base data, the first line is the range, the second line is the average.) Node Brch/ A 4-17 2-7 133-450 199.8-932.4 26.6-166.5 3.1-7.7/2.8-4.4
6.9/3.6(1.92)
表二十、台灣等地採集之輪生細胞黏菌檢索表 Table 20. Key to Polysphondylium species in Taiwan
1 孢子囊堆紫色………. P.violaceum Brefeld 孢子囊堆無色………. ……….2 2 孢子囊體未端有延長現象………...………P. pseudo candidum Hagiwara
孢子囊體未端無延長現象……….……….3 3 孢子囊體對稱、節間距離大致相同……….………4 孢子囊體可能不對稱、節間距離不一致…..……….………5 4 孢子囊體分枝長可大於 400µm………...……….….………
P. sp. A孢子囊體分枝長小於 400µm………...……….………6 5 末端呈棍棒狀………
P.sp. H末端呈尖頭狀……….9 6 自行產生大孢囊………..………...……….……
P.sp. F無自行產生大孢囊………..…..……….………7 7 孢子狹長,長/寬大於 2.2………..………..………
P. sp. G孢子長/寬 小於 2.2………..8 8 具有次級分枝的現象……….…………...…
P. sp. B沒有次級分枝的現象………..……P. pallidum Brefield 9 聚集形式為 minutum type………..………
P. sp. E聚集形式為 violaceum type……..………..…10 10 具有無柄之孢子囊堆………..
P. sp. C不具有無柄之孢子囊堆………..…
P. sp. D86
87 7 中型孢子( 7×3.3µm),分枝短(173± 32µm) --- P. pseudo-candidum Hagiwara
大型孢子( 9.4×4.5µm),分枝長( 200-600µm)---P. candidum Hagiwara
陸、輪生細胞黏菌的形態和分子資料的比對
1. 輪生細胞黏菌的形態和 5.8S 序列分析的比對
本實驗所採集的輪生細胞黏菌共26株,去除P. violaceum後,為23株。然而在分析5.8S 序列時,卻只用了13株的序列。這是因為若用電腦分析全部的23條序列,在計算Maximum pasimony親緣關係樹的bootstap值時,因資料過於龐大,需費數月的時間,才能得知結果。為 節省時間,增進分析的效率,因此選用23株中,P. pallidum, P. tenussium, A, B, C, D, E, F, G和 H種各一株,加上P.can etc這群中的P.-candidum, P. pseudo-candidum和GinPpcan 3株的序列,共 計13條序列為代表。如此,也可了解這8種新種和P. pallidum, P. tenussium, P. candidum或 P.
pseudo-candidum是否為一單系群。而5.8S的分析結果,証明了這些種類為一單系群。
在Swanson (2002)的細胞黏菌形態研究的結果中,排除了P. violaceum後,發現其他兩種 輪生細胞黏菌P. filamentosum和P. pallidum為一單系群,而這兩種和P. violaceum不同之處在於 孢子囊體無色、具非結合性極粒之孢子。Swanson認為輪生細胞黏菌去除了色素、生長習性、
基部(base)和末端(tip) 等條件後,可能為一單系群。在我們的實驗5.8S序列及部分18S序列分 析結果中,形成單系群的輪生細胞黏菌共同形態特徵,也在於孢子囊體皆為無色和具非結合 性極粒之孢子,和Swanson的結果相同。綜合以上所述,可否歸納其他具有相同特徵之輪生細 胞黏菌為一單系群?具有色素、結合性極粒孢子的輪生細胞黏菌的分類地位如何?因為缺乏 世界其他輪生細胞黏菌的分子資料,尚不能斷言。
1. ITS1-5.8S-ITS2 序列和 18S 序列的適用性
在輪生細胞黏菌屬內各種的分析中,
ITS1-5.8S-ITS2 序列一千多個 base 中,不同種 間相差 113 個 base 以上,可明顯區不同種。種內的比較上,彼此間相差 68 個 base 之內,不 易區分種內的差異,由此可知 ITS1-5.8S-ITS2 序列在輪生細胞黏菌的分析上,適用的階級為 屬內各種。在 18S 的分析中,可明顯區分網柱細胞黏菌屬和屬的差異,在部分 18S 序列一千多個 base 中,相差 237 個 base 以上。在單系群之輪生細胞黏菌屬的比較上,則相差 71 個 base 之內,
不易區分屬內各種的差異,由此可知 18S 序列在輪生細胞黏菌的分析上,適用的階級為屬內
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各種。
3、台灣新種輪生細胞黏菌的現況
台灣鑑定出之八個新種輪生細胞黏菌,除了了 D 種(AliF2)、E 種(Hue16PE、Hue1804PE)、
G 懂(Pin101PG)、H 種(Pin102PH)只有一個地區的樣本外,其餘四種皆有兩個地區的採 集紀綠。因此我們認為至少 A、B、C 和 F 這四種分佈範圍應該更廣,若能再本島內做更廣泛 的採集,定能得到更多樣本,並得知這八種新種的分佈範圍。相信這是未來研究工作可進行 的方向。
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結論
1、本實驗綜合形態特徵,分子生物學遺傳距離及親緣關係樹所建構之分群等資料,台灣 已分離的 15 個輪生細胞黏菌(Polysphondylium)菌株,歸類成 8 群,應為新發現之 8 個新種。至於其命名及拉丁文格式,將於日後發表。
2、P. violaceum 較 Polysphondylium 的親緣關係接近網柱細胞黏菌(Dictyostelium).
3、P. candidum 和 P. pseudocandidum 為日本學者 Hagiwara 所發表,經本實驗分子生物學 資料分析,建議合併成 P. candidum 較合宜。
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