一、项目训练目标：
（一）知识目标
掌握母液的配制，掌握脱毒技术以及灭菌技术的操作，熟悉各母液的配方，
掌握植物体初代以及继代培养操作。
（二）能力目标
1、熟悉各母液的配制以及配方。
2、掌握脱毒技术以及灭菌技术的操作。
3、掌握植物体初代培养，继代培养的操作。
（三）素质目标
1.培养爱护公物的品质。
2.培养严谨细致的作风。
3.培养学生动手操作能力。
二、项目主要任务与课时安排：
序号 主要任务 课时
1 1.MS 培养基的配制与分装 4
2 2.培养基的制作与灭菌 4
3 3.外植体初代培养 4
4 4.继代增殖培养 4
5 5.试管苗的生根与驯化移栽 6
6 6.药用植物脱毒技术 4
合计 26
三、学生分组：
5 人/组
四、实训地点：
农业生化实训室
五、实训主要设备、器材：
无菌培养瓶，封口膜，超净工作台，高压灭菌锅，电子天平，称量纸，
移液枪，镊子，电磁炉，锅，锥形瓶，70％酒精，95％酒精等。
任务一 MS 培养基的配制与分装 一、实验目的：
了解常见培养基（MS、White）母液中的营养成分组成及作用；
掌握培养基母液及植物生长调节剂母液配制的方法。
二、实验原理：
培养基的主要成分包括无机营养物质、碳源、有机物质、植物生长物质等，
由于每种培养基往往含有一二十种化合物，配制起来不仅繁琐，而且还很难达到 准确和精确，尤其是生长调节物质和微量元素用量较少，难于准确称量，稍有偏 差，就会影响试验结果及试验的重复性。为解决这一问题，常常将大量元素、微 量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母 液。当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。
三、实验器具与药品：
【实验药品和试剂】
NH4NO3、KNO3、MgSO4·7H2O、（NH4）2SO4、NaH2PO4·H2O、CaCl2·2H2O、
MgSO4·7H2O、KH2PO4、Na2-EDTA·2H2O、FeSO4·7H2O、MnSO4·4H2O、
ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、肌醇、
烟酸、盐酸吡哆醇(VB6)、盐酸硫胺素(VB1)、甘氨酸等。
【实验仪器及用具】
天平（感量为 0.01g）、电子天平（感量为 0.0001g）、烧杯（1000mL、
500mL、100mL、50mL）、量筒（500mL、100mL、50mL）、容量瓶（1000mL、500mL、
250mL、100mL）、试剂瓶（1000mL、500mL、250mL、100mL）、药勺、玻棒、电炉、
石棉网、称量纸、滴管、冰箱。
四、实验步骤：
按组分别配制 MS、B5、N6、White 培养基母液，下面以 MS 培养基母液配制 为例进行介绍。
首先，按下表“MS 培养基母液的配制”，将各种母液根据各自的扩大倍数，
计算出扩大后的称取量，然后，分别进行药品称取和母液配制。
母液种类 成分 规定用
1000 50
微量元素 MnSO4·4H2O
1000 10
（1）MS 大量元素母液的配制（母液Ⅰ）
按照 MS 培养基配方的用量扩大 20 倍，将大量元素配制成 20 倍的母液。配 制时先用量筒量取蒸馏水 800mL，放入 1000mL 的烧杯中，依次分别称取 KNO3 38g;
NH4NO3 33g, MgSO4·7H2O 7.4g, KH2PO4 3.4g, CaCl2·2H2O 8.8g，按顺序先后倒 入烧杯中，用玻璃棒搅动，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后 一种化合物完全溶解后（注：CaCl2·2H2O 溶解时需将蒸馏水加热），将溶液倒 入 1000mL 的容量瓶，用蒸馏水定容至 1000mL。然后倒入细口磨砂试剂瓶中，贴 上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名，置于 4℃冰箱保存备用。配制 培养基时每升 MS 培养基吸取该母液量为 50mL。
注意：配制大量元素母液时，某些无机成分如 Ca2+、SO42 一、Mg2 十和 H2PO4 一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，药品采用等级 较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混 合时应注意先后顺序。特别应将 Ca2+、SO42 一、Mg2 十和 H2PO4 一等离子错开 混合，速度宜慢，边搅拌边混合。
（2）MS 微量元素母液的配制（母液Ⅱ）
将 MS 培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大 1000 倍，用电子天 平分别依次称取 MnSO4·4H2O 22.3g， ZnSO4·7H2O 8.6g , H3BO3 6.2g，KI 0.83g，Na2MoO4·2H2O 0.25g，CuSO4·5H2O 0.025g，CoCl2·6H2O 0.025g，并用 重蒸水逐个溶解，待全部溶解用容量瓶定容后，装入 1000mL 倒入细口磨砂试剂 瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名，置于 4℃冰箱保存备 用。配制培养基时每升 MS 培养基吸取该母液量为 1mL。
（3）铁盐母液的配制（母液Ⅲ）
在电子天平上准确称量 2.78g 硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)和 3.73g 乙二胺四乙 酸二钠(Na2-EDTA)，分别倒入盛有 400mL 蒸馏水的烧杯中，加热并不断搅拌使之 溶解。保持加热，把 FeSO4 溶液慢慢倒入 Na2-EDTA 溶液中并不断搅拌，接近沸 腾时停止加热，待溶液冷却后把 pH 值调到 5.5，加蒸馏水到最终容积 1000mL，
倒入棕色磨口试剂瓶中，经室温放置一段时间令其充分反应后，贴上标签，注明 配制日期、扩大倍数、配制人姓名，置于 4℃冰箱保存备用。配制培养基时每升 MS 培养基吸取此母液 10mL。
注意：如果将新配制的铁盐母液立即放入冰箱中，则会容易形成沉淀。
（4）MS 有机母液的配制（母液Ⅳ）
用电子天平依次称取：肌醇（环己六醇）10g，盐酸硫胺素（维生素 B1）10mg，烟酸 50mg，甘氨酸 200mg，盐酸吡哆醇（维生素 B6）50mg，用蒸馏 水依次溶解
并定容后，装入 1000mL 的磨口瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、
配制人姓名，置于 4℃冰箱保存备用。配制培养基时每升 MS 培养基吸取该母液 10mL。
（5）植物生长物质母液的配制
2,4-D 母液：准确称量 2,4-D 50mg，先用 1-3mL 95%乙醇完全溶解后，加蒸 馏水定容；也可以用少量碱（如 1mol/L 氢氧化钠）溶液，使之中和成为钠盐或 钾盐，在水中溶解，再加水定容至 100mL，即配成浓度为 500mg/L 的母液。贴上 标签，注明名称、浓度和配制日期，放入 4℃冰箱保存。NAA 母液的配制过程与 2,4-D 相同。
6-BA 母液：准确称量 50mg 6-BA，加入少量碱溶液（如 1mol/L 氢氧化钠）
或稀酸（1mol/L 盐酸）溶液使之完全溶解后，加蒸馏水定容至 100mL，即配制成
浓度为 500mg/L 的 6-BA 的母液。转入磨口试剂瓶中，并贴上标签，注明母液名 称、浓度和配制日期，放入 4℃冰箱保存备用。
注意：所有的母液都应保存在 2~4℃冰箱中，若母液出现沉淀或霉团则不能 继续使用。
White 培养基的配制方法与 MS 培养基类似。
【练习与思考】
1.以本小组配制的母液为例，说明配制过程中的注意事项。
2、各母液装量要求。
五、考核评价