一、项目训练目标：
（一）知识目标
掌握微生物培养基配制方法，土壤中细菌的分离技术。
（二）能力目标
1、熟悉微生物基础培养基配方。
2、掌握菌落总数测定的方法
3、掌握平板培养技术和液体培养技术。
4、掌握俊宗保藏的方法。
（三）素质目标
1.培养爱护公物的品质。
2.培养严谨细致的作风。
3.培养学生动手操作能力。
二、项目主要任务与课时安排：
序号 主要任务 课时
1 饮用水中菌落总数的测定 4
2 微生物的生理生化反应 4
3 平板培养技术和液体培养技术 4
4 菌种的保藏 4
合计 16
三、学生分组：
总 分
优秀:>90 分 良好:81-89 分 中等:71-80 分 合格:60-70 分 不合格:<60 分
5 人/组 实训地点：
农业生化实训室
实训主要设备、器材：
小锅、灭菌锅、天平、电炉、漏斗、纱布、试管、培养皿、pH 试纸、橡 皮筋、报纸、棉花、烧杯、烘箱、移液器等。
任务一饮用水中菌落总数的测定 一、实验目的
1.掌握饮用水菌落总数检测的程序和方法；
2.了解检测饮用水中菌落总数的卫生学意义；
3.能够对饮用水中菌落总数检测结果做出准确、
规范的报告。
二、实验内容
•利用平板计数法检测三种不同来源的水中的 菌落总数（分组进行）
一、四组：桶装水
二、五组：自来水
三、六组：池水（8 教前面小水池）
水样采取方法
•1、自来水样的采取：
先用火焰灼烧自来水龙头 3min（灭菌），然后打开水龙头排水 5min（排除管 道内积存的死水），再用无菌三角瓶接取水样（约 50ml）。
•2、池水：
采集表层水水样时,可用适当的容器如塑料筒等直接采取。
三、实验材料与试剂 1.仪器
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
1.1 恒温培养箱：36℃±1℃。1.2 冰箱：2℃～5℃。1.3 恒温水浴箱：
46±1℃。
1.4 天平：感量为 0.1g。1.5pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸 1.6 磁力搅拌 器（能加热）1.7 微波炉
2.试剂
胰蛋白胨，酵母浸膏，葡萄糖，琼脂，蒸馏水，氯化钠 四、实验步骤
1、将试管和平板拆开，分别做好标记。
2、将无菌生理盐水分装于试管中，9ml/管，此时吸取 1ml 生理盐水到皿。
3、以无菌移液管吸取 25mL 样品置盛有 225LmL 生理盐水的无菌锥形瓶中，
充分混匀，制成 1:10 的样品匀液，此时吸取 1ml 稀释液到平皿。
4、用 1mL 无菌移液管吸取 1:10 样品匀液 1mL，沿管壁缓慢注于盛有 9mL 稀 释液的无菌试管中（注意：移液管尖端不要触及稀释液面），振摇试管使其混合 均匀，制成 1:100 的样品匀液，此时吸取 1ml 稀释液到平皿。
5、按上一步操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换 用 1 次 1mL 无菌移液管。
6、稀释样品后，依次将 3 个稀释度的样品匀液，在进行 10 倍递增稀释时，
吸取 1mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
7、及时将 15～20mL 冷却至 46℃的平板计数琼脂
培养基（可放置于 46±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，在台面上轻轻摇 动平皿使其混合均匀。
8、待琼脂凝固后，将平板翻转，36±1℃培养 48h±2h。
9、可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的 菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。(1) 选取菌落 30CFU300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30CFU 的平板记录具体菌落数，大于 300CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落 数应采用两个平板的平均数。
(2)其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落 生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中 菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以 2，代表一个平板菌落数。
(3)当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个 菌落计数。
1、稀释分离时，为什么要将已融化的琼脂培养基冷却到 46℃左右才能倾入