4. 實驗結果
4.3 抑制口腔癌細胞移行與入侵作用
4.3.1 魚針草萃取物對 FaDu 移行作用之抑制效果
4.3.1.1 Wound healing assay
利用Wound healing assay 評估魚針草萃取物對人類咽部鱗狀細胞癌 FaDu 的 移行抑制效果。由圖11 及圖 12 研究結果顯示，相較於 tip 剛刮完(0 hr)未處理任 何萃取物的照片，在24 hr 時的 Control (0 μg/ml)與 Vehicle (DMSO)兩組的小溝皆 會癒合；而有處理萃取物(5 μg/ml、10 μg/ml 及 25 μg/ml)的三組則仍有明顯的溝 存在，且這三組溝的寬度在24 hr 時未有明顯差異。但是在 48 hr 時，則可以發現 溝的寬度隨著萃取物劑量的增加，而有變窄的趨勢。在 72 hr 時，除了最高劑量 25 μg/ml 以外，其餘各組皆已癒合。因此可以發現，萃取物的抑制效果與濃度的 增加呈現劑量依存性(dose-dependence)。20 倍及 40 倍放大之細部觀察結果如附錄 一。
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圖11. 不同劑量魚針草萃取物及不同處理時間對 FaDu 癌細胞移行之抑制效應，並以
DMSO (劑量為 0.50%)為 Vehicle。以倒立式相位差顯微鏡 4 倍觀察結果。
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圖12. 不同劑量魚針草萃取物及不同處理時間對 FaDu 癌細胞移行之抑制效應，並以
DMSO (劑量為 0.50%)為 Vehicle。以倒立式相位差顯微鏡 10 倍觀察結果。
4.3.1.2 Cell migration assay
本節接著利用Cell migration assay 探討魚針草萃取物是否會抑制 FaDu 細胞穿越 polycarbonate membrane 的效果。首先，將不同劑量魚針草萃取物(5 μg/ml、10 μg/ml、15 μg/ml 及 20 μg/ml)、Control (0 μg/ml)及 Vehicle (DMSO)加入 Boyden chamber insert 後培養 24 hr，隔天將移行細胞進行固定染色，並用倒立式顯微鏡 進行觀察並拍照。待拍照完成後將再進一步把染色的活細胞退染，使用 ELISA 560 nm 測定吸光值並統計成圖表。
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Control Vehicle 5 μg/ml
10 μg/ml 15 μg/ml 20 μg/ml
圖13. 以不同劑量魚針草萃取物處理 24 hr 對抑制 FaDu 細胞移行之效應。以倒立
式相位差顯微鏡4 倍觀察結果。以 0 μg/ml 為 Control 組；DMSO (劑量為 0.50%) 為Vehicle。
Control Vehicle 5 μg/ml
10 μg/ml 15 μg/ml 20 μg/ml
圖14. 以不同劑量魚針草萃取物處理 24 hr 對抑制 FaDu 細胞移行之效應。以倒立
式相位差顯微鏡10 倍觀察結果。以 0 μg/ml 為 Control 組；DMSO (劑量為 0.50%) 為Vehicle。
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由圖13 及圖 14 研究結果顯示，Control (0 μg/ml)與Vehicle (0.50% DMSO) 兩 組的FaDu 細胞經過 24 hr 後，進行固定及結晶紫染色，可以明顯觀察到移行穿過 Boyden chamber insert 內 polycarbonate membrane 的深色斑點。以不同劑量魚針草 萃取物加入Boyden chamber insert 內 24 hr 後，由照片結果發現，隨著添加劑量增 加移行穿過polycarbonate membrane 的 FaDu 細胞有顯著的減少，並有劑量依存性。
圖15. 以不同劑量魚針草萃取物處理 24 hr 對抑制 FaDu 細胞移行之效應。使 用 0 μg/ml為Control 組；DMSO (劑量為 0.50%)為 Vehicle。圖表數值是將 染色的insert 退染後，在用 ELISA 定量溶液的顏色。
將已固定染色之 insert 以 Crystal violet extraction solution 溶出已經移行至 Boyden chamber insert 下層的 FaDu 細胞，然後以 560 nm 波長測定吸光值。如圖 15 所示，若以 Control 組(0 μg/ml) FaDu 細胞移行穿越過 polycarbonate membrane 的數值為 100%，則 Vehicle 組(處理 DMSO 的負控制組)為 95.79%，其他以不同 劑量魚針草萃取物(5 μg/ml、10 μg/ml、15 μg/ml 及 20 μg/ml) 處理過的移行穿越 百分比則分別是 79.64%、62.44%、61.38%、34.99%之。代入公式可知，魚針草萃 取物抑制FaDu 細胞移行之 IC50值為15.97 μg/ml (R2 = 0.9463)。
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